张扬
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：北京大学基础医学院免疫学系更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 增殖抑制基因抑制乳腺癌细胞生长和侵袭及其相关机制研究被引量：4
- 2010年
- 目的研究增殖抑制基因（HSG）对乳腺癌MDA-MB-231细胞（简称231细胞）生物学行为的影响并对其作用机制进行探讨。方法构建HSG全长真核表达载体，通过脂质体瞬时转染法使其在231细胞中高表达，通过MTT比色实验检查肿瘤细胞的体外增殖能力、Matrigel穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力和应用流式细胞术检测肿瘤细胞的细胞周期及凋亡情况；并应用GsT—pulldown法检测HSG高表达对乳腺癌细胞Ras蛋白活性的影响。结果将构建好的重组人HSG真核表达质粒pcDNA3-MYC-HSG转染至231细胞中，MTT比色实验结果显示HSG的过表达可以抑制肿瘤细胞的增殖；Matrigel侵袭实验显示转染HSG的肿瘤细胞的穿膜细胞数（HSG／231组，78．5个±5．8个）与转染空载体组（vector／231组，131．1个±14．5个）相比明显减少。流式细胞分析结果显示转染HSG／231组细胞出现了G0／G1期阻滞（56．3％±2．3％），且凋亡细胞的百分比与对照组（vector／231组为50．4％±1．9％）相比有所增加。Ras蛋白活性检测发现转染HSG／231组的乳腺癌细胞Ras蛋白活性明显下降。结论HSG表达上调可抑制高侵袭性231细胞的体外增殖和侵袭能力，使其出现G0／G1期细胞周期阻滞，并可促进细胞凋亡。HSG对乳腺癌细胞的抑制作用可能与其抑制细胞Ras活性有关。
- 张扬杜强邱晓彦田新霞方伟岗
- 关键词：乳腺肿瘤肿瘤侵润细胞周期
- 人PSMP重组蛋白在CHO细胞中表达、纯化及功能鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的:构建新的具有趋化作用的人类细胞因子PSMP的真核表达载体,在仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表达并纯化,为PSMP的功能机制研究奠定基础。方法:从pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMPmyc/His片段,插入pMH3表达载体。利用电穿孔法将该表达载体转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定克隆株。以Dot blot及Western blot法检测上清液中PSMP蛋白的表达,利用有限稀释法对抗性筛选出的混合克隆单克隆化,悬浮无血清大批培养工程细胞,通过镍亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度,Boyden小室体外趋化实验分析蛋白功能活性。结果:PSMP-myc/His基因插入pMH3载体后成功构建真核表达载体pMH3-PSMP,转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达PSMP的基因工程细胞株。镍亲和层析纯化的重组蛋白PSMP纯度达95%以上且具有生物学活性。结论:成功构建了PSMP蛋白的真核表达载体,并获得其稳定表达的CHO细胞株,获得了较高纯度的、具有生物学活性的重组蛋白,为下一步PSMP功能和机制研究提供有用工具。
- 马靖裴晓磊张扬王应
- 关键词：CHO细胞
