王依璐
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- VWF-A1突变体的可溶性表达及其与血小板的相互作用
- 目的:在大肠杆菌中稳定高效表达可溶性野生型VWF-A1以及突变型G1324S、R1308L,并研究其与血小板的黏附及诱导血小板的钙响应过程。方法:首先将野生型VWF-A1及VWF-A1突变体R1308L、G1324S质粒...
- 刘晓玲王依璐吴建华方颖
- 血管性血友病因子A1分子在大肠杆菌中的可溶性表达及功能鉴定被引量：4
- 2014年
- 背景:血管性血友病因子A1通过介导随流血小板在受损血管部位的黏附在初始止血中发挥至关重要的作用,但重组A1在原核中多为包涵体表达,不利于纯化及体外的功能研究。目的:在大肠杆菌中稳定高效表达可溶性野生型血管性血友病因子A1以及突变型血管性血友病因子G1324S,并研究其生物学功能。方法:将血管性血友病因子A1(野生型)、血管性血友病因子G1324S(功能失去型突变体)重组质粒分别转化到感受态细胞DH5α中,筛选提取质粒。将提取的质粒分别转化到大肠杆菌(E.coli)BL21、E.coli M15中,筛选挑单克隆菌于LB培养基,扩大培养。比较溶菌酶破碎法和超声波破碎法两种不同的裂菌方法,使目的蛋白血管性血友病因子A1的可溶性表达,经过Ni柱亲和层析纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化的血管性血友病因子A1、血管性血友病因子G1324S纯度和免疫学活性;采用流动腔实验系统分析在不同流体剪应力条件下,血小板在两种目的蛋白上的黏附能力。结果与结论:每100 mL上清液可分别纯化得到5.77 mg血管性血友病因子A1,6.83 mg血管性血友病因子G1324S纯品,并具有较高的纯度和免疫学活性。流动腔结果显示,对每个剪切应力下铺设不同A1分子的底板进行两两比较,随着流体剪应力从0.1 Pa提高1 Pa,G1324S突变组所黏附细胞数下降的幅度(46.8%)要远高于野生型组(20.5%),说明突变后的A1分子的功能有所减弱。结果表明纯化的蛋白介导血小板黏附的能力与临床特征一致,野生型血管性血友病因子的结合活性明显高于突变型。
- 王依璐刘晓玲丁孝茹方颖
- 关键词：血友病A可溶性国家自然科学基金
- VWF-A1的表达纯化及其在力学环境中的功能研究
- 在循环血流中，血管性血友病因子(von Willebrand factor，VWF)通过介导高速流动的血小板在血管内壁受损部位的粘附，在初始止血过程中起着至关重要的作用，是连接血小板与血管内皮下胶原的桥梁。其中血小板的初...
- 王依璐
- 关键词：血小板纯化
- 文献传递
