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应用Luminex xMAP液相芯片技术研究miRNAs对THP-1细胞产生细胞因子的影响被引量：1: 2015年; 目的研究let-7e单独作用或miR-106b和miR-20a共同作用对THP-1细胞产生细胞因子的影响。方法用Cy3标记的miRNA阴性对照瞬转THP-1细胞24h、36h和48h，免疫荧光法检测其转染效率；let-7e、miR-106b及miR-20amimic分别瞬转THP-1细胞24h、36h和48h，qRT—PCR检测各miRNA表达量并筛选各miRNA的最佳转染时间；1mg／L LPS刺激各miRNA转染的THP-1细胞1h后，Luminex xMAP液相芯片技术检测THP-1细胞产生的IL-8、干扰素诱导蛋白-10（IP-10）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP—1）、IL-1d、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-α和IFN—β，并进行差异性分析。结果转染后90％以上的THP-1细胞带有红色荧光；let-7e mimic的最佳转染时间是48h，miR-106b及miR-20amimic的最佳转染时间是24h；相对于各自的对照组，let-7e mimic组IL-8、IP-10和MCP-1表达量增加，而在miR-106b和miR-20a mimic共转染组各趋化因子表达量减少。结论let-7e促进THP-1细胞中IL-8、IP-10和MCP-1的表达，miR-106b和miR-20a共同抑制它们的表达。; 桂连张倩倩蔡燕郭琪黄俊琪; 关键词：液相芯片细胞因子

microRNA家族成员let-7e对人单核细胞系THP-1细胞活性的影响及机制研究被引量：2: 2015年; 目的：研究let-7e对单核细胞系THP-1细胞凋亡和细胞因子分泌的影响及其机制。方法免疫荧光法检测cy3标记的mimic 对照转染THP-1细胞转染率，qRT-PCR法检测let-7e mimic及对照、let-7e inhibitor及对照转染THP1-细胞后let-7e的表达；MTT法检测转染后THP-1细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot法检测let-7e靶基因IFI6（interferon alpha-inducible protein 6）、EZH2（enhancer of zeste homolog 2）、caspase-3的表达；转染48h 后THP-1细胞用LPS刺激2h收集细胞培养上清，细胞因子芯片法检测上清中炎性因子的表达。结果 miRNA模拟物可以转染THP-1细胞，转染率约为75％，转染 let-7e mimic 12h 、24 h、48 h 后THP-1细胞的 let-7e 表达倍数分别为8．551±0．365、83．893±15．941、38．858±2．743，转染 let-7e inhibitor 12 h、24 h、48 h后THP-1细胞的let-7e表达倍数分别为0．594±0．174、2．427±1．229、3．053±0．207；let-7e mimic转染组THP-1细胞活性升高、凋亡率降低；miranda数据库分析证实let-7e与EZH2、IFI6、caspase-3结合的mirSVR score 分别为－0．1608、－0．5693、－09．423，证实IFI6、EZH2、caspase-3可能是let-7e的靶基因；let7-e mimic转染组IFI6、EZH2、caspase-3表达都有所下降；let-7e mimic 转染组 CD154、粒细胞集落刺激因子（ G-CSF）、CD54、IL-13、IL-1RA和IL-23表达有所下降。结论 let-7e有抗THP-1细胞凋亡的作用，可影响LPS诱导的细胞因子的表达。 let-7e可能通过调节其靶基因caspase-3、IFI6、EZH2对THP-1细胞的生物学功能产生影响。; 张林张英可桂连章旭之黄俊琪; 关键词：THP-1细胞

miR-106b的免疫调节及其与自噬和凋亡关系的研究进展被引量：1: 2014年; micro RNAs（mi RNAs）是一类长度为21~25个核苷酸的内源性非编码小RNAs,在转录后水平上负向调控基因的表达。micro RNA-106b（mi R-106b）作为mi RNAs的一员,其免疫调节功能可通过影响细胞因子和转录因子的表达和TGF-β信号通路来实现。此外,mi R-106b还影响细胞的自噬和凋亡途径。现就近年来mi R-106b的研究进展作一综述。; 桂连黄俊琪; 关键词：MI 免疫调节自噬凋亡

let-7e对PBMCs和原代单核细胞产生IL-10的影响被引量：1: 2015年; 目的研究let-7e对PBMCs和原代单核细胞产生IL-10的影响。方法生物信息学分析let-7e的靶基因并通过荧光素酶报告实验进行验证;用1μg/ml或10μg/ml LPS刺激PBMCs和原代单核细胞24、48和72 h后,ELISA法检测细胞培养上清中IL-10的质量浓度,筛选出LPS最佳刺激时间和质量浓度;用let-7e mimic或阴性对照(NC)瞬时转染PBMCs和原代单核细胞24、36和48 h后,q RT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率;转染细胞经LPS刺激后,ELISA法检测细胞培养上清中IL-10的质量浓度。结果 let-7e可能直接靶向抑制IL-10;1μg/ml LPS刺激细胞24 h即可产生较高水平的IL-10;瞬转let-7e mimic 24 h即可使细胞高表达let-7e;let-7e mimic组细胞培养上清中IL-10的质量浓度低于let-7e NC组。结论 let-7e可抑制PBMCs和原代单核细胞产生IL-10。; 桂连黄俊琪; 关键词：IL-10 LPS

MicroRNA let-7e对LPS诱导的TNF-α表达的影响及机制的初步研究被引量：2: 2015年; 目的研究let-7e对LPS诱导的人原代单核细胞产生的TNF-α表达的影响及其机制。方法用全血分离人原代单核细胞，流式细胞术检测单核细胞表面标记CD14；let-7e mimics或mimics NC瞬转原代单核细胞24h、36h、48h，qRT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率；采用1mg／L LPS刺激原代单核细胞1h、3h、6h、12h后，ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α的浓度，筛选出LPS最佳刺激时间；qRT—PCR法及ELISA法评估let-7e对LPS诱导原代单核细胞产生TNF-α的影响；Western blot法检测瞬转1et-7e mimics后EZH2的表达水平以及瞬转siEZH2后NF-κB p65、ARFGAP1和Arfaptin 2的表达水平。结果CD14^＋细胞大于70％；免疫荧光结果显示miRNA模拟物可以转染原代单核细胞，转染率约为70％；let-7e mimics转染原代单核细胞24h，细胞内即可表达较高水平的let-7e；LPS刺激原代单核细胞12h即可产生较高水平的TNF-α。ELISA结果证实let-7e mimics显著抑制LPS诱导的TNF-α的产生，同时在mRNA水平也得到一致的结果；Western blot结果显示let-7e mimics组EZH2的水平明显低于let-7e mimics NC组，沉默EZH2后胞核中NF—κ Bp65显著下调，沉默EZH2后囊泡转运调节蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达显著下降。结论在原代单核细胞中，let-7e显著抑制LPS诱导的TNF-α的表达；其机制可能是1et-7e靶向作用EZH2进而调节NF—κB的活性及囊泡转运相关蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达水平。; 张倩倩张英可桂连黄俊琪; 关键词：TNF-Α LPS

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桂连

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