罗少杰
- 作品数：13 被引量：51H指数：5
- 供职机构：广东海洋大学水产学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 脂多糖刺激对马氏珠母贝血细胞DNA甲基化修饰的影响被引量：3
- 2020年
- 【目的】研究马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)血细胞基因组DNA的甲基化修饰情况及其在脂多糖(LPS)刺激后的变化,为探究甲基化修饰在珍珠贝免疫防御中的作用提供理论基础。【方法】运用甲基化敏感扩增多态性法(MSAP)分析马氏珠母贝血细胞(正常养殖贝)以及注射LPS后(6、12、24 h)基因组CCGG位点甲基化的修饰水平变化,并对甲基化修饰位点进行回收测序。【结果】共获得1 102个清晰可辨的DNA条带,其中全甲基化位点条带215个,半甲基化位点条带127个,非甲基化位点条带760个。对照组血细胞基因组CCGG位点的甲基化修饰比例为23.76%,注射LPS后,甲基化比例为28.10%~48.25%,注射6 h时最低,12 h时最高;对特异性片段测序后,经Blast比对,得到5条存在甲基化修饰的基因序列,其中2条具有注释信息,分别是干扰素调控因子(Interferon regulatory factor)和磷脂酶BL2(Putative phospholipase B-like 2)。【结论】马氏珠母贝血细胞基因组CCGG位点的甲基化修饰参与调控LPS诱导的免疫反应,在免疫防御中发挥重要作用。
- 焦钰梁金婵谷泽丰张鹏飞张鹏飞罗少杰
- 关键词：马氏珠母贝免疫防御
- 马氏珠母贝近交与杂交家系的DNA甲基化多态性比较被引量：5
- 2016年
- 采用甲基化敏感多态性扩增技术(MSAP)检测马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)近交(F1)与杂交(Z1)家系闭壳肌的DNA甲基化修饰水平,对部分甲基化修饰片段进行回收、测序和注释分析。结果表明:使用20对引物进行选扩增PCR,最终F1和Z1分别获得(632.20±22.58)和(588.60±25.09)条条带,差异显著(P<0.05);F1和Z1之间的组织甲基化水平分别为(9.93±1.60)%和(8.04±1.25)%,差异显著(P<0.05)。对回收片段进行注释,F1家系共获得9条甲基化修饰片段,其中8条为功能蛋白,分别为E3泛素连接酶、逆转录病毒多聚蛋白、神经肽受体、交叉结点核酸内切酶、磷酸糖器、苯丙氨酸解氨酶、隐花色素蛋白、脆性位点相关蛋白;Z1家系共获得5条甲基化修饰片段且均为功能蛋白,分别为脆性位点相关蛋白、神经元乙酰胆碱受体α亚基、无调性的同源蛋白、麦芽糖酶、甲基胞嘧啶双加氧酶。初步阐明马氏珠母贝近交家系F1与杂交家系Z1间的DNA甲基化修饰水平和部分具甲基化修饰位点。
- 罗少杰张鹏飞焦钰王庆恒杜晓东邓岳文
- 关键词：马氏珠母贝MSAP
- 马氏珠母贝外套膜基因组DNA甲基化修饰位点MSAP分析
- DNA甲基化是一种重要且十分常见的表观遗传现象,其能够在不改变DNA结构的条件下对基因的表达,如组织发育和分化等进行调控.本研究通过甲基化敏感扩增多态性(methylation-sensitive amplificati...
- 罗少杰
- 关键词：马氏珠母贝甲基化敏感扩增多态性
- 马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)近交家系与其杂交子代DNA甲基化差异分析被引量：3
- 2018年
- 2012年4月,利用马氏珠母贝全同胞家系进行家系内与家系间交配组合构建了近交家系（A与D）与杂交家系（B与C）。贝龄2龄时,比较家系生长性状差异,利用甲基化敏感多态性扩增技术（MSAP）检测了4个家系甲基化水平的差异,估计了甲基化比例与生长性状平均值相关性系数。结果表明,家系杂交子代的平均壳长、平均壳高、平均壳宽与平均体重均值大于近交家系,性状优势率为8.5%～24.7%;近交家系与杂交家系的总条带数和甲基化比例均存在显著性差异（p〈0.05）。近交家系A和D获得的总条带数分别729.0±19.6与717.3±28.2,甲基化水平分别为（10.0±0.9）%与（8.5±0.4）%;杂交家系B和C获得的总条带数分别为703.0±10.7与726.3±18.8,甲基化比例分别为（5.9±0.7）%与（5.7±0.9）%;家系的平均壳长、平均壳高、平均壳宽与平均体重性状与甲基化均存在明显负相关,相关系数分别为-0.849、-0.751、-0.674和-0.652。
- 杨晶淼蔡炜裕罗少杰王庆恒焦钰焦钰邓岳文
- 关键词：马氏珠母贝杂交甲基化MSAP
- 马氏珠母贝外套膜不同区域基因组DNA甲基化MSAP分析被引量：5
- 2016年
- 通过甲基化敏感多态性扩增(methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)技术,检测马氏珠母贝(Pinctada martensii)外套膜的边缘膜区(mantle edge,Me)、套膜区(mantle pallial,Mp)和中央膜区(mantle central,Mc)的基因组DNA甲基化修饰水平;回收具特异性的清晰甲基化修饰片段进行测序、比对分析并筛选基因;利用荧光定量PCR对筛选基因进行定量分析。结果显示:(1)利用15对引物进行扩增实验,平均每个个体外套膜3个区域能够产生(1163.25±124.34)条清晰可辨的条带,其中Me、Mp和Mc分别得到(401.00±40.37)条、(380.63±52.39)条和(381.63±53.57)条扩增条带,各组织甲基化总条数差异不显著(P>0.05);Me、Mp和Mc的基因组甲基化水平分别为(17.07±2.19)%、(15.48±2.34)%和(19.61±2.88)%,Mc和Mp具有显著性差异(P<0.05);组织间的基因组甲基化水平由高到低排列依次是Mc>Me>Mp。(2)对特异性片段进行回收、测序后,经在线及本地Blast比对,得到8条存在甲基化修饰的基因序列,其中3条有同源序列,基因注释为40S核糖体蛋白SA(40S ribosomal protein SA)、iHog(interference hedgehog)、锌指蛋白(zinc finger protein castor)。iHog仅在中央膜上具有全甲基化修饰,且E值较低,为筛选的目的基因。(3)荧光定量结果表明iHog在Me、Mp和Mc中均有表达,以Me表达量最高,Mc表达量最低,差异显著(P<0.05)。我们推测iHog的DNA序列的甲基化修饰抑制了该基因在Mc组织中的表达。综上研究结果表明,马氏珠母贝外套膜3个区域的甲基化修饰水平不一,且DNA甲基化在基因表达调控中具有作用,这对深入研究珍珠贝生物矿化和免疫反应机制具有一定的参考意义。
- 罗少杰邓岳文郑哲焦钰王庆恒
- 关键词：马氏珠母贝外套膜DNA甲基化
- 马氏珠母贝DNA甲基化转移酶Dnmt1的克隆及表达被引量：1
- 2019年
- 【目的】对马氏珠母贝(Pinctada martensii)DNA 甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,Dnmt1)的基因全长及组织表达作分析,探究马氏珠母贝甲基转移酶Dnmt1(PmDnmt1)参与贝壳矿化调控机理。【方法】利用RACE 技术获得PmDnmt1 的cDNA 序列全长,并对PmDnmt1 的序列特征进行分析,同时利用逆转录-聚合酶链反应RT-PCR 技术检测马氏珠母贝不同组织中PmDnmt1 的表达情况。【结果与结论】PmDnmt1 基因cDNA 长4 818 bp,其中,开放阅读框为4 623 bp,编码1 540 个氨基酸。预测分子质量约为174.55 ku、理论等电点为5.89。结构域分析显示,PmDnmt1 具有DMAP 结合结构域、DNMT1-RFD 结构域、锌指结构、BAH 结构域和C5 胞嘧啶DNA 甲基化酶结构域等。多序列比对结果发现,Dnmt1 在不同物种间具有较高保守性。实时荧光定量PCR 分析显示PmDnmt1 在所有检测组织中均有表达,在外套膜中央膜部分的表达量最高(P<0.05)。PmDnmt1 可通过调控外套膜的DNA 甲基化修饰参与贝壳的形成。
- 章佳斌卢晓文罗少杰焦钰邓岳文
- 关键词：马氏珠母贝基因克隆
- 马氏珠母贝微胶囊饲料的适用性研究被引量：6
- 2015年
- 本研究测定了自主研发的马氏珠母贝（Pinctada martensii）微胶囊饲料的粒径范围、悬浮性和稳定性;并以室内投喂微胶囊饲料的马氏珠母贝为实验组,自然海区养殖的马氏珠母贝为对照组,养殖45 d后比较实验组与对照组成活率、生长率、软体部生化成分、肝胰脏形态与消化酶的差异。结果表明：（1）该饲料粒径均小于48μm,其中约80%饲料颗粒粒径在28-48μm;（2）该饲料分散性良好,静置状态下,在盐度为35的Na Cl溶液中的沉降速度是（2.74±0.21）mm/s;（3）饲料的氮保留率（NRR）较高,25℃浸泡120 min后、35℃浸泡60 min后NRR分别为（79.10±0.15）%和（80.85±0.72）%;（4）实验组和对照组的成活率没有显著差异（P〉0.05）;实验组壳长、壳宽、壳高和总重的绝对增长率和相对生长率均显著低于对照组（P〈0.05）;（5）实验组软体部脂肪含量显著大于对照组（P〈0.05）,碳水化合物、蛋白质和灰分含量无显著差异（P〉0.05）;（6）实验组肝胰脏为橘黄色,淀粉酶活力显著大于对照组（P〈0.05）,纤维素酶、蛋白酶活力差异不显著（P〉0.05）。研究结果表明,该微胶囊饲料粒径小、稳定性较好,能被马氏珠母贝消化与吸收,但需要继续改进饲料配方、完善室内养殖技术方案,为马氏珠母贝工厂化养殖条件的优化提供科学依据。
- 杨创业罗少杰王庆恒邓岳文杜晓东
- 关键词：马氏珠母贝微胶囊饲料生长率生化组分消化酶活力
- 马氏珠母贝前列腺素E合酶2基因PGES-2的克隆与表达分析被引量：1
- 2020年
- 前列腺素E合酶2 (prostaglandin E synthase, PGES-2)是一种核周蛋白,是前列腺素E2(prostaglandin E2, PGE2)合成的末段限速酶之一。研究发现,PGES-2通过与上游诱导酶偶合形成通路调节PGE2产生方式参与有机体炎症反应、神经系统疾病、促进组织溃疡等各种病理生理事件。为探索马氏珠母贝前列腺素E合酶2 (Pinctada fucata martensii, Pm-PGES-2)的序列特征及其表达情况,本实验通过RACE技术克隆出马氏珠母贝PGES-2基因的cDNA全长序列(Pm-PGES-2),并通过生物信息学软件分析该序列的功能结构;运用实时荧光定量技术检测马氏珠母贝PGES-2基因在各组织中的相对表达量。实验结果显示马氏珠母贝PGES-2基因cDNA序列全长1 419 bp,其中开放阅读框993 bp,编码330个氨基酸,非翻译区5 UTR长170 bp,3 UTR长256 bp。荧光定量PCR检测结果显示该基因在肝胰腺中表达量最高,鳃、边缘膜次之,各组织表达量差异具统计学意义(p<0.05)。本研究为进一步探究PGES-2在马氏珠母贝中的生物学功能提供研究基础。
- 陆晓娟杨帅罗少杰廖永山焦钰
- 关键词：马氏珠母贝基因克隆荧光定量
- 马氏珠母贝B型清道夫受体PmSR-B基因克隆与表达性分析被引量：8
- 2017年
- 采用c DNA末端快速扩增技术克隆获得马氏珠母贝清道夫受体基因c DNA全长序列(Pm SR-B);利用荧光定量技术检测Pm SR-B基因在各个组织中的表达量。结果表明,Pm SR-B基因c DNA序列全长1 857 bp,开放阅读框(ORF)长1 443 bp,编码480个氨基酸,5′非翻译区(5′UTR)长89 bp,3′UTR长325 bp。预测其分子质量为54.77 ku,等电点为7.94,脂溶性系数92.94,总平均亲水性-0.120,属于疏水性蛋白;不稳定指数26.37,属于稳定蛋白。氨基酸序列同源比对结果,Pm SR-B氨基酸序列与其他物种具有一定的保守性,与华贵类栉孔扇贝(Mimachlamys nobilis)SR-B的序列的相似度高达47%。荧光定量PCR检测结果,Pm SR-B在肝胰腺中表达量最高,其后依次是鳃、闭壳肌、中央膜,各组织的表达量差异具统计学意义(P<0.05)。
- 雷超贝伟烈郑哲罗少杰王庆恒邓岳文
- 关键词：马氏珠母贝基因克隆基因表达
- 马氏珠母贝基质金属蛋白酶基因MMP-17的克隆及表达分析被引量：14
- 2015年
- 基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)是一种能够降解细胞外基质的蛋白水解酶。MMP-17是一种膜型基质金属蛋白酶,通过糖基磷脂酰肌醇连接于细胞表面,参与调控有机体的内环境稳定、宿主防御等多种生理过程。为研究MMP-17在马氏珠母贝免疫反应中的作用,实验运用RACE技术,克隆得到马氏珠母贝MMP-17(Pinctada martensii MMP,PmMMP-17)基因c DNA全长序列,并对其序列特征及功能进行初步分析。结果显示,Pm-MMP-17基因c DNA全长2 794 bp,开放阅读框(ORF)为1 923 bp,编码640个氨基酸,5'UTR长156bp,3'UTR长715 bp,分子量约为73.11 ku,等电点为8.98;多序列比对和系统进化树分析表明,Pm-MMP-17与其他物种的MMP具有较高的保守性,与长牡蛎的MMP-17相似性高达82%;功能结构域分析表明,Pm-M M P-17有5个高度保守的结构区域:N-末端的信号肽、前导区、催化区、铰链区和C-末端的类血红素结合蛋白区;荧光定量数据分析表明,Pm-MMP-17基因在马氏珠母贝的闭壳肌、珍珠囊、足、外套膜、血淋巴、肝胰腺、性腺、鳃等8个组织中均有表达,在血液中的表达量最高,闭壳肌和鳃次之;脂多糖(LPS)刺激后,Pm-MMP-17基因表达水平上调,12 h后达到最大值,之后又逐渐下调并恢复到正常水平。研究表明,Pm-MMP-17基因可能在马氏珠母贝的免疫反应中起着重要作用。
- 罗少杰闫芳郑哲田荣荣邓岳文焦钰
- 关键词：马氏珠母贝克隆荧光定量
