王建文
- 作品数：10 被引量：21H指数：3
- 供职机构：首都医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金首都卫生发展科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Notch修饰相关糖基因EOGT1敲除大鼠模型的制备与基因型鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的建立介导Notch分子O-GlcNAc糖基化修饰的糖基转移酶EOGT1基因敲除大鼠模型,为研究EOGT1功能及其在肝功能损伤中的作用奠定基础。方法通过TALEN基因敲除技术敲除EOGT1基因,获得EOGT1^(+/-)大鼠,将EOGT1^(+/-)大鼠杂交后获得EOGT1^(-/-)大鼠。通过PCR凝胶电泳技术及DNA测序技术对大鼠的基因型进行鉴定。结果成功建立3种基因型(EOGT1^(+/+)、EOGT1^(+/-)、EOGT1^(-/-))大鼠的鉴定方法,通过观察发现3种基因型大鼠的外观和行为表现上无显著差异。统计大鼠出生后20天的体重发现,EOGT1^(+/+)大鼠和EOGT1^(-/-)大鼠的体重有显著差异(t=2.257,P=0.0343),同时还发现EOGT1^(-/-)大鼠的生育繁殖能力降低。结论成功构建了EOGT1基因敲除大鼠模型,EOGT1基因敲除大鼠与野生型大鼠相比,体重偏低,生育繁殖能力降低。该模型的构建为研究Notch分子O-GlcNAc糖基化修饰在肝功能损伤中的作用奠定了基础。
- 郝晓花王建文张一帆叶小慧魏红山
- 关键词：基因敲除糖基转移酶NOTCH
- Colgalt2-酶联免疫试剂盒的制备被引量：1
- 2014年
- 目的 利用N末端Colgalt2多克隆抗体和C末端Colgalt2多克隆抗体,制备Colgalt2双抗体夹心酶联免疫试剂盒.方法 体外扩增Colgalt2的N-末端编码序列,构建其原核表达质粒,诱导纯化Colgalt2重组蛋白.免疫大耳白兔获得抗Colgalt2 N-末端重组蛋白的多克隆抗体.以Colgalt2 N-末端重组蛋白为抗原,利用ELISA和Western Blot技术检测多克隆抗体效价和特异性.以Colgalt2 N-末端多克隆抗体包被酶标板,同时利用HRP标记的C末端Colgalt2抗体,制备Colgalt2-ElISA试剂盒.结果 我们成功克隆表达了N末端Colgalt2基因片段,制备了兔抗Colgalt2多克隆抗体,ELISA分析表明该抗体效价较高（＞1∶1 280000）,Western Blot分析显示该抗体有良好的特异性.对我们所制备的不同浓度的Colgalt2重组蛋白进行分析显示,所制备的分析试剂盒,在1.25～25 μg/ml范围内具有较好分析线性.线性相关系数约为0.98.结论 所制备的Colgalt2-ELISA分析试剂盒可以用于标本内Colgalt2蛋白检测.
- 刘燃李红敏任慧王智强王建文杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因蛋白质工程酶联免疫吸附试验
- 敲除Colgalt2基因加重小鼠急性肝损伤
- 2016年
- 目的：初步探讨Colgalt2基因介导的胶原Glcα1，2 Galβ1？糖基化修饰在急性肝损伤过程中的作用。方法取60只Colgalt2＋／＋小鼠和60只Colgalt2－／－小鼠进行急性肝损伤实验，雌雄各半。每组随机选取20只小鼠腹腔注射CCl4（CCl4∶橄榄油＝2∶7，20 ml／kg）。观察小鼠死亡情况，并绘制生存曲线。每组剩余40只小鼠随机分为0、4、8、12 h组，每组10只，腹腔注射CCl4（剂量同上）。分别于0、4及8 h各处死6只小鼠，之后将4及8 h组剩余的小鼠均纳入12 h组（ Colgalt2＋／＋小鼠， n＝14； Colgalt2－／－小鼠， n＝16），并于12 h处死小鼠。 HE染色观察肝组织的病理学改变，取血清进行生化指标ALT、 AST测定。利用qRT？PCR和Western印迹技术检测小鼠Colgalt2在基因及蛋白水平的表达情况。结果Colgalt2基因在Col？galt2＋／＋小鼠肝组织内表达，而在Colgalt2－／－小鼠肝组织内不表达。注射CCl4后10 h， Colgalt2＋／＋小鼠死亡率为35％， Colgalt2－／－小鼠死亡率为70％，两组小鼠死亡率差异显著（P＜0．05）。注射CCl4后12 h， Colgalt2＋／＋小鼠死亡率达50％， Colgalt2－／－小鼠死亡率为70％，差异不显著（P＞0．05）。肝功检测及HE染色结果均提示，与Colgalt2＋／＋小鼠相比， Colgalt2－／－小鼠肝损伤较重。注射CCl4后，野生型小鼠Colgalt2在RNA水平和蛋白水平表达下调。结论 Colgalt2基因敲除在一定程度上可加重小鼠急性肝损伤。该观察结果提示， Colgalt2基因介导的胶原Glcα1，2 Galβ1？糖基化修饰可能与肝损伤的修复有关。
- 杨琪王建文王智强刘燃李玉凤张一帆郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：CCL4急性肝损伤糖基转移酶
- 糖基转移酶Colgalt2基因敲除对肝细胞再生过程中增殖和凋亡的作用研究被引量：5
- 2015年
- 目的初步探讨Colgalt2基因敲除对小鼠肝细胞再生过程中细胞增殖和凋亡的作用。方法根据Higgins和Anderson于1931年提出的肝大部分切除模型,实施Colgalt2+/+野生型对照组小鼠和Colgalt2-/-小鼠(均为C57BL/6J品系)70%肝大部分切除术(PH),分别取正常小鼠和PH后1、3、7天的小鼠再生肝脏的右外叶,于10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,切片。采用免疫组织化学方法比较细胞增殖核抗原(PCNA)在小鼠肝部分切除术后各时间点组间的表达阳性率差异;胶原酶两步灌注法分别分离正常和PH后1、3、5天的Colgalt2+/+小鼠和Colgalt2-/-小鼠的肝细胞。流式细胞仪检测各组肝细胞凋亡率。结果 PH后1、3、7天,Colgalt2-/-小鼠肝细胞PCNA阳性表达率显著高于Colgalt2+/+小鼠肝细胞PCNA阳性表达率,且差异有显著统计学意义(P<0.01)。分离的肝细胞活细胞比率达94%,正常Colgalt2+/+小鼠和Colgalt2-/-小鼠分离的肝细胞凋亡率分别为(23.36±0.83)%、(21.04±1.16)%;PH后1天,Colgalt2+/+对照组小鼠肝细胞凋亡率和Colgalt2-/-小鼠肝细胞凋亡率分别为(8.27±0.33)%、(8.44±0.30)%,PH后1天肝细胞凋亡率均降至最低,随即肝细胞凋亡率逐渐升高;PH后3天,Colgalt2+/+小鼠和Colgalt2-/-小鼠肝细胞凋亡率分别为(15.92±0.56)%、(12.14±0.37)%,Colgalt2-/-小鼠的肝细胞凋亡率明显低于野生型对照组小鼠的肝细胞凋亡率(P<0.01);PH后5天,Colgalt2+/+小鼠和Colgalt2-/-小鼠肝细胞凋亡率分别为(21.36±0.51)%、(18.92±0.92)%,Colgalt2-/-小鼠的肝细胞凋亡率仍低于野生型对照组小鼠的肝细胞凋亡率(P<0.05),肝细胞凋亡率均接近于恢复正常水平。结论糖基转移酶Colgalt2基因敲除在肝再生过程中在一定程度上具有促进肝细胞增殖和抗肝细胞凋亡的作用,提示该基因介导的胶原Glcα1,2Galβ1-糖基化修饰对肝再生可能起着重要的调控作用。
- 王智强杨琪王建文刘燃郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：肝再生糖基转移酶凋亡
- 经会阴与经直肠前列腺穿刺活检在前列腺癌诊断中的对比分析被引量：10
- 2021年
- 目的对比经会阴前列腺穿刺术(transperineal prostate biopsy,TPPB)和经直肠前列腺穿刺术(transrectal prostate biopsy,TRPB)在前列腺穿刺中的优劣。方法收集首都医科大学附属北京朝阳医院2018年1月至2020年1月行超声引导下局部麻醉前列腺穿刺术的患者共237例,其中2018年1月至2019年6月,185例患者采用TRPB,2019年7月至2020年1月52例患者采用TPPB。结果对两组患者围手术期资料进行比较。TPPB组和TRPB组的患者年龄分别为(68.2±9.2)岁和(69.7±8.1)岁(P=0.331);体质量指数分别为(24.7±3.3)kg/m^(2)和(24.7±3.1)kg/m^(2)(P=0.924);查尔森合并症指数分别为2.7±1.7和2.8±1.1(P=0.744);前列腺体积为(59.5±32.0)cm^(3)和(65.9±28.7)cm^(3)(P=0.512);国际前列腺症状评分(International Prostate Symptom Score,IPSS)分别为10.3±4.7和10.2±5.0(P=0.960),以上差异均无统计学意义。术前实验室检查等方面的差异均无统计学意义(P>0.05)。所有手术均顺利完成,术后7 d内TPPB组和TRPB组分别出现33例次和145例次并发症,均为Clavien-Dindo 1级。两组在穿刺针数、穿刺阳性针数、穿刺病理恶性例数、Gleason评分、临床意义前列腺癌检出例数、血尿、下尿路症状、血精症和其他并发症等方面差异均无统计学意义(P>0.05)。TPPB组的手术时间长于TRPB组,穿刺点出血少于TRPB组(P=0.003)、发热少于TRPB组(P=0.047)、疼痛重于TRPB组(P=0.005),以上差异具有统计学意义。结论超声引导下经会阴前列腺穿刺术具有和经直肠前列腺穿刺术相似的诊断效能,可减少穿刺点出血和发热的发生,局部麻醉辅以全身麻醉便于该技术开展和推广。
- 刘赛王明帅曹文谢大炜牛亦农宋黎明张小东王建文
- 关键词：会阴直肠
- 肾移植术后微嵌合现象与移植肾功能关系的研究
- 微嵌合现象做为在当前有效免疫抑制下器官移植后出现的共有现象,已在心、肺、肝、肾等实质性器官移植和皮肤、骨髓移植中所证实.但关于微嵌合与免疫耐受之间的关系,人们有着不同的看法.虽然有在啮齿动物实验中获得的微嵌合诱导耐受和以...
- 王建文
- 关键词：肾脏移植移植肾功能免疫排斥反应
- 凋亡抑制蛋白Survivin和Livin在膀胱癌组织表达及临床意义研究
- 王建文
- 关键词：凋亡抑制蛋白LIVIN
- Colgalt2基因敲除小鼠Kupffer细胞形态及亚型差异被引量：3
- 2016年
- 目的从Colgalt2基因敲除小鼠肝脏内分离Kupffer细胞,并比较其与正常小鼠Kupffer细胞形态分化和亚型分化的差异。方法采用胶原酶灌注法、percoll密度梯度离心法和免疫磁珠分选法分离纯化Kupffer细胞,并将分离的Kupffer细胞进行培养,显微镜下观察其形态的变化和差异。用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)分别刺激Kupffer细胞6小时、12小时和24小时,检测细胞亚型。结果分离获得Kupffer细胞数目为(4.42±0.63)×10~6/鼠肝,流式细胞仪检测细胞纯度为97.9%。培养后的细胞逐渐延伸为不规则形态,早期Colgalt2基因敲除小鼠Kupffer细胞形态分化相比正常小鼠有延迟,后期两者无显著差异。在未刺激状态下,Colgalt2^(-/-)小鼠M1型Kupffer细胞的比例小于Colgalt2^(+/+)小鼠,Colgalt2^(-/-)小鼠M2a型Kupffer细胞所占比例较高;LPS刺激6小时后,Colgalt2^(-/-)小鼠M2a型所占比例高于Colgalt2^(+/+)小鼠;LPS刺激12小时后,Colgalt2^(+/+)小鼠M2a型和M2c型Kupffer细胞所占比例小于Colgalt2^(-/-)小鼠;LPS刺激24小时后,Colgalt2^(-/-)小鼠M2c型细胞所占比例高于Colgalt2^(+/+)小鼠。结论应用胶原酶灌注法、percoll密度梯度离心法、免疫磁珠分选法可以获得纯度较高的小鼠肝脏Kupffer细胞,为后期的细胞实验奠定基础。Colgalt2基因的敲除会影响小鼠Kupffer细胞的形态分化和亚型分化。
- 王建文张一帆李玉凤杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因敲除KUPFFER细胞细胞形态
- CRISPR/Cas9介导的Fam171a1基因敲除大鼠基因型鉴定及基因功能的初步研究
- 2017年
- 目的通过建立Fam171a1基因敲除大鼠模型,观察基因敲除后大鼠的表型变化,探索该基因的功能。方法采用CRISPR/Cas9打靶技术,获得Fam171a1^(+/-)基因型杂合子。Fam171a1^(+/-)大鼠交配获得Fam171a1^(-/-)基因型纯合子大鼠。采用DNA Analyzer 3730XL测序技术进行基因型鉴定。对功能未知基因Fam171a1进行基本生物信息检索。检测FAM171A1蛋白在野生型大鼠(wild type,WT)和Fam171a1^(-/-)基因型大鼠各组织的表达情况。对子代鼠20天体重、子代生育情况进行统计。采用全自动生化仪对血清生物化学指标进行检测。结果获得了稳定遗传的Fam171a1^(-/-)基因型大鼠。通过配笼繁殖共获得F2代125只,纯合子(Fam171a1^(-/-))25只、杂合子(Fam171a1^(+/-))71只、野生型(WT)29只,比例接近1∶2∶1。FAM171A1蛋白在WT大鼠肝脏等主要脏器表达,其中肺组织、脑组织和胰腺组织表达量较高,心、肝、脾和淋巴结中表达较弱,肾、胸腺和小肠组织中弱表达或不表达。同时,Fam171a1^(-/-)基因型大鼠各组织中不表达FAM171A1蛋白。Fam171a1^(-/-)子代大鼠出生20天体重显著低于WT大鼠(t=3.211,P=0.0017)。成年Fam171a1^(-/-)大鼠血清胆碱酯酶、总蛋白、AST和HDL水平显著高于WT(t=4.18,P<0.001;t=6.26,P<0.001;t=2.73,P=0.02;t=2.36,P=0.03)。与Fam171a1^(+/-)大鼠相比,Fam171a1^(-/-)大鼠生育能力无显著差异(t=0.2132,P=0.8330)。结论成功获得稳定遗传的Fam171a1基因敲除大鼠,Fam171a1基因可能参与SD大鼠的生长发育、肝功能的维持及脂代谢的调控。
- 李玉凤杨琪王建文叶小慧张曼卡郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：膜蛋白胆碱酯酶脂代谢
- Fam172a基因敲除小鼠的制备与基因型鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的建立稳定的Fam172a基因敲除C57/B6J小鼠模型,观察基因敲除对小鼠生长发育的影响以及该基因在小鼠体内的生物学的作用。方法采用基因打靶敲除技术,获得杂合子(Fam172a^(+/-))小鼠。将所得Fam172a^(+/-)小鼠饲养于屏障环境中杂交获得纯合子(Fam172a^(-/-))小鼠。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对小鼠基因型进行鉴定,称量出生后20天、40天以及60天野生型(wild type,WT)小鼠及Fam172a^(-/-)小、鼠的体重。随机处死8周龄WT小鼠和Fam172a^(-/-)小鼠,取心、肝、脾、肺及肾组织,采用Western blot险测Fam172a基因的组织表达特异性。结果 PCR及Western blot结果均证明Fam172a基因在Fam172a^(-/-)小鼠体内完全删除。Farm172a^(-/-)小鼠与WT小鼠20天、40天以及60天体重的差异均有统计学意义(P均<0.05)。FAM172A蛋白在WT小鼠中的表达有组织特异性。Fam172a^(-/-)小鼠每胎产仔数略低于WT小鼠,差异无统计学意义(P>0.05)。各小鼠外观、行为和繁殖力无显著差异。结论 Fam172a基因敲除C57/B6J小鼠模型已成功构建,并繁育出足够数量的Fam172a^(-/-)小鼠进行下一步实验。Fam172a基因对小鼠体重和生长发育具有重要作用。
- 张一帆王建文杨琪郝晓花黄玉波魏红山
- 关键词：基因敲除小鼠
