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吴程华: 作品数：11 被引量：31H指数：4; 供职机构：云南农业大学动物科学技术学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金云南省现代农业生猪产业技术体系建设项目云南省高校科技创新团队支持计划资助项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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Red同源重组技术在大肠埃希菌基因敲除中的应用被引量：8: 2015年; 近年来,大肠埃希菌一直是分子生物学和基因组学的重要研究对象。20世纪80年代以来,生物学家发展了一种新型分子生物学技术-基因敲除。大肠埃希菌基因敲除技术发展迅速,各种新型技术的出现使得其基因组的改造较以往更为快速、简单,尤其是Red同源重组技术在大肠埃希菌基因敲除中的应用已经越来越成熟。本文简要综述了利用Red同源重组技术进行大肠埃希菌基因敲除的原理、策略及应用现状。; 吴程华严玉霖高洪谭锐董骎; 关键词：大肠埃希菌基因敲除

云南撒坝猪致病性大肠杆菌OmpF基因缺失株与β-内酰胺类抗生素耐药性关系的研究: 2016年; 通过测定大肠杆菌OmpF基因缺失株与亲本株的生长曲线,以及运用药敏实验和MIC实验比较大肠杆菌基因OmpF缺失株与亲本株对β-内酰胺类中几种抗生素的耐药性,从而了解OmpF基因缺失对菌株生长的影响及与β-内酰胺类抗生素耐药关系。结果表明：在同样的正常培养条件下,基因缺失株F-M-2/OmpF~Δ相对于亲本株F-M-2生长较缓慢,稳定期OD_（600）值相对于亲本株较低。对于β-内酰胺类中几种抗生素,基因缺失株相对于亲本株耐药性明显增强。; 王红丹崔艳艳高洪严玉霖赵汝吴程华

PEC HPI irp2基因缺失株的构建及蛋白结构功能预测被引量：2: 2018年; 为了探讨致病性大肠杆菌内HMWP2蛋白的生物学结构和功能,采用Red同源重组技术,对致病性E.coli的HPI irp2基因进行敲除,成功构建了致病性E.coli irp2基因缺失株,并利用测序结果对HMWP2蛋白进行了多重预测分析,以期为致病性大肠杆菌相关疾病的防治和发生机理研究提供理论基础。; 刘超英吴程华高洪严玉霖富国文赵汝; 关键词：RED同源重组基因敲除

云南省楚雄地区散养户猪伪狂犬病野毒感染的血清学调查被引量：6: 2015年; 为了解云南省楚雄地区散养户猪伪狂犬病病毒(PRV)野毒感染的情况,试验从楚雄地区9个散养户随机采集154份血清样本,并应用间接ELISA方法对血清样本进行PRVg E抗体检测。结果表明:在154份猪血清中,抗PRV g E抗体的阳性率为25.32%。说明楚雄地区散养户PRV野毒株感染率偏高。; 吴程华高洪严玉霖赵汝刘欢欢董骎谭瑞杨培昌; 关键词：散养户血清学调查

云南省楚雄部分地区猪场猪瘟血清学调查被引量：6: 2015年; 为了解云南省楚雄地区猪瘟(CSF)的感染情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA),对楚雄州部分地区规模化猪场和散养户饲养猪的283份血清样品进行猪瘟抗体检测。结果表明,楚雄地区规模化猪场和散养户的猪瘟抗体阳性率为56.89%,其中规模化养殖场为71.77%,散养户为14.86%。从检测结果来看,部分猪场猪瘟免疫效果不理想,今后还需加大免疫力度,从而达到更好的免疫保护。; 董骎高洪严玉霖赵汝吴程华刘欢欢谭锐杨培昌; 关键词：猪瘟酶联免疫吸附试验血清学调查

云南撒坝猪致病性大肠埃希菌外膜蛋白F(OmpF)缺失株的构建: 2015年; 为了进一步评价E.coli OmpF的功能,我们构建了E.coli外膜蛋白F的缺失突变株。首先根据E.coli F-M-2的测序后的OmpF基因序列设计PCR敲除引物,引物5’端分别有50bp和48bp的拟敲除基因的同源臂,3’端为扩增引物,以pKD3为模板,扩增两侧含FRT位点的氯霉素抗性基因,然后利用pKD46的λ-Red重组系统替换E.coli F-M-2基因组上的OmpF基因,再利用表达FLP重组酶的质粒pCP20将FRT位点之间的氯霉素抗性基因删除,最后用鉴定引物进行鉴定并测序。结果成功地构建了云南撒坝猪致病性E.coli OmpF缺失突变株。; 吴程华崔艳艳高洪严玉霖赵汝

shRNA介导的基因沉默表达载体构建方法及应用被引量：1: 2015年; shRNA即短发夹RNA,是设计为能够形成发夹结构的非编码小RNA分子,可通过RNA干扰来抑制基因的表达,其干扰原理是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。本文综述了shRNA表达载体的构建方法,并对其在生物领域研究中的应用前景进行了探讨。; 董骎高洪严玉霖赵汝吴程华刘欢欢谭锐; 关键词：SHRNA 表达载体构建 RNA干扰基因沉默

云南省楚雄地区猪蓝耳病抗体水平调查被引量：1: 2015年; 为了了解猪蓝耳病(PRRS)在楚雄地区散养户和规模化猪场中的免疫水平情况,从楚雄9个地区随机采集了230份血清样品,采用间接ELISA方法对血清样本进行PRRS抗体检测。结果显示,230份血清样品中,阳性数为160份,总体阳性率为69.6%,其中,抗体弱阳性样本89份,占38.7%,抗体强阳性样本71份,占30.9%。; 谭锐高洪严玉霖赵汝刘欢欢董骎吴程华杨培昌; 关键词：猪蓝耳抗体水平

大肠杆菌ompF基因的敲除及其对细菌7耐药性的影响: (目的)为了探讨ompF 基因对云南撒坝猪猪源大肠杆菌(E.coli)耐药性的影响,构建E.coli 的ompF 基因缺失株,并分析亲本株和ompF 基因缺失株的耐药性差异.(方法)采用Red 重组系统的3 种质粒(pK...; 王红丹崔艳艳吴程华高洪严玉霖赵汝; 关键词：猪大肠杆菌 RED同源重组基因敲除耐药性

云南撒坝猪EPEC HPI irp2缺失株的摄铁能力研究: 2017年; 【目的】本研究探讨了云南撒坝猪EPEC HPI毒力岛的摄铁功能与致病性之间的关系。【方法】本试验通过摄铁实验对5株肠致病性E.coli(A-E)和CVCC1565铁载体的合成和在不同2,2’-联吡啶含量下的最低生长抑制浓度及对数期生长速率进行了测定,同时利用已构建的E.coli irp2基因缺失株和亲本株进行对比,检测HMWP2蛋白的表达,并通过半数致死量实验比较两者之间的毒力。【结果】除E.coli(D)外,其余菌株的2,2’-联吡啶最低生长抑制浓度为0.6 m M;亲本株能够表达HMWP2蛋白,irp2缺失株不表达该蛋白;CAS固体培养基中菌株能产生橘黄色的透明晕圈;当2,2’-联吡啶浓度高于0.2 m M时,亲本株的生长率高于irp2缺失株;亲本株的LD50(8.73×10~7cfu/m L)低于缺失株(9.95×10~7cfu/m L)。【结论】云南撒坝猪EPEC HPI铁摄取功能和致病性之间存在着一定关系。; 刘超英吴程华高洪严玉霖富国文赵汝苗淑淑刘嫦; 关键词：EPEC HPI