尹芳
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 含人白细胞介素-2基因逆转录病毒载体系统的建立及转染人白血病细胞株的研究
- 1998年
- 应用逆转录病毒载体LNCIL－2介导人白细胞介素（IL）－2基因经包装细胞PA317包装成重组病毒后，转染人白血病细胞株K562、HL－60，经G418筛选获阳性克隆，阳性克隆上清表达IL－2活性。转染后细胞经Southern检测存在新霉素抗性基因（neoR）。转染IL－2基因的白血病细胞生长速度、克隆形成率均落后于转染空载体或未转染基因的细胞。表明含人IL－2基因逆转录病毒载体系统已成功建立，转染人IL－2基因的白血病细胞增殖活性下降。
- 尹芳伍柏松刘启发郑维扬吴彬周淑芸
- 关键词：逆转录病毒载体白血病白细胞介素2基因转染
- 来源于正常健康成人和白血病病人骨髓间充质干细胞的比较研究
- ＜正＞目的骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）是来源于骨髓的一种非造血干细胞,关于它的研究有已有30多年的历史,而且多是以来源于健康成人的骨髓间充质干细胞为...
- 谢政军尹芳郭天剑郑维扬徐兵林榕徐晓兰周淑芸
- 文献传递
- rAAV-2-hGM-CSF、rAAV-2mGM-CSF转导骨髓间充质干细胞的在体基因表达
- 2008年
- 目的 观察经rAAV-2-hGM-CSF、rAAV-2-mGM-CSF基因转导修饰的骨髓间充质干细胞在体基因表达情况.方法 按预先摸索好的转染条件在体外用rAAV-2-hGM-CSF、rAAV-2-mGM-CSF感染骨髓间充质干细胞后,继续在体外扩增培养12 d,再将被基因修饰的骨髓间充质干细胞通过尾静脉回输到6周龄的裸鼠体内,对照组回输未经基因转导处理的骨髓间充质干细胞,分别于此后的2、4、6、8周处死裸鼠,取其外周血,计数白细胞总数,检测血清中hGM-CSF、mGM-CSF的含量.结果 回输前hGM-CSF、mGM-CSF的分泌水平为36.25、25.14 ng/L,回输后2、4、6、8周裸鼠血清中hGM-CSF的含量分别为23.77、26.32、19.77、15.25 ng/L,mGM-CSF的含量分别为34.96、34.84、35.50、32.93 ng/L,相应时间点对照组裸鼠血清中mGM-CSF的水平分别为17.34、17.44、14.68、16.85 ng/L.rAAV-2-mGM-CSF转导组可使裸鼠体内白细胞计数增加,而rAAV-2-hGM-CSF转导组和对照组裸鼠体内的白细胞计数却无变化.结论 骨髓间充质干细胞可作为一种基因治疗的载体细胞,携带在体外经过基因修饰了的治疗基因在体内发挥其治疗作用.
- 谢政军尹芳周淑芸
- 关键词：间质干细胞基因表达
- AAV载体质粒介导的荧光素酶shRNA抑制其在哺乳动物细胞中的表达被引量：10
- 2002年
- 目的 构建荧光素酶短发夹环产生质粒在BHK 2 1细胞中抑制荧光素酶的表达。方法 从人基因组DNA中用PCR方法调出人U6snRNA启动子 ,接以被 9bp序列间隔的 2 1bp荧光素酶靶序列的反向重复序列 ,置于AAV载体质粒pSNAV中 ,构建成荧光素酶短发夹环RNA(shRNA)产生质粒pSNAV U6 Luc。与pMAMneoLuc质粒共转染BHK 2 1细胞 ,检测其对荧光素酶表达的影响。并且单独转染荧光素酶细胞株 ,检测其抑制荧光素酶表达的效果。结果 pSNAV U6 Luc对共转染的pMAMneoLuc中荧光素酶的表达抑制 5 0 % ,而对荧光素酶细胞株中荧光素酶的表达抑制 70 %。结论 实验表明荧光素酶shRNA产生质粒能够有效抑制荧光素酶在BHK 2 1细胞中的表达。
- 马鑫鲁晓春彭建强谭淑萍袁振华尹芳王宏吴小兵侯云德
- 关键词：质粒介导荧光素酶短发夹环RNA哺乳动物
- 重组腺相关病毒载体介导的绿色荧光蛋白在急性髓性白血病患者骨髓间充质干细胞中的表达被引量：4
- 2005年
- 目的探讨重组腺相关病毒载体(rAAV-2-eGFP)是否可高效转导入骨髓间充质干细胞(BMSCs).方法从初发的急性髓性白血病(AML)患者骨髓中分离培养出BMSCs,在不同的感染复数(MOI=102,103,104,105,106,107)下用包含增强型绿色荧光蛋白(eGFP)的rAAV-2-eGFP感染BMSCs,寻找最佳的感染条件,并在转染后的不同时间点用倒置荧光显微镜以及流式细胞仪观察其表达情况.结果转染后10～14 d,eGFP在BMSCs中表达,转染效率为0.3%～2%,增加MOI亦不能明显增加转染效率.在MOI=105的条件下转染后观察了61 d,eGFP保持低水平长期稳定表达,在转染后的12～33 d,eGFP阳性的BMSCs从起始时的1.16%下降到(0.5～0.6)%,33～61 d一直维持在这一水平.结论rAAV-2-eGFP和BMSCs可用于体外基因治疗,但极低的转染效率可能是其进一步应用的障碍.
- 谢政军郑维扬徐兵宋兰林易正山尹芳周淑芸
- 关键词：重组腺相关病毒
- 重组腺相关病毒载体2型转染骨髓间充质干细胞的体外实验(英文)被引量：3
- 2005年
- 背景:目前应用于基因治疗的病毒载体中,重组腺相关病毒载体2型载体与腺病毒和反转录病毒载体比较,由于其无致病性,引起学者们的关注。目的:观察体外重组腺相关病毒载体2型转染骨髓间充质干细胞,并用其作为携带基因表达的载体进行急性髓性白血病基因治疗的可能性。设计:开放性实验。单位:南方医科大学南方医院的血液科。材料:实验于2004-02/07在南方医科大学南方医院的血液科实验室完成。本实验所用的骨髓间充质干细胞来自急性髓性白血病6例初发患者和4名健康成年志愿者的第3～5代传代细胞。方法:从初发的急性髓性白血病患者和正常健康志愿者髂后上棘做骨髓穿刺抽取6～10mL肝素抗凝的骨髓,分离培养出间充质干细胞,用包含增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型感染间充质干细胞,将获取的骨髓间充质干细胞加入含一定感染复数(感染复数=1×102,1×103,1×104,1×105,1×106,1×107)的增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型病毒载体的不完全培养液,10～14d后在相差荧光显微镜下或用流式细胞仪观测绿色荧光蛋白的表达。在体外培养条件下观察绿色荧光蛋白在经过重组腺相关病毒载体2型转导的骨髓间充质干细胞中的表达。体外观察经增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型转导并被新霉素筛选后绿色荧光蛋白在被转导的骨髓间充质干细胞中的表达。通过相差荧光显微镜下确证绿色荧光蛋白表达后,在BD流式细胞仪上检测绿色荧光蛋白的表达。主要观察指标:①增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型对骨髓间充质干细胞的转染率分析。②在转染后的不同时间点用相差荧光显微镜和流式细胞仪观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果:①转染率分析:增强型绿色荧光蛋白的重组腺相关病毒载体2型对来源于健康志愿者和急�
- 谢政军尹芳郑维扬宋兰林易正山伍志坚周淑芸
- 关键词：基因疗法腺相关病毒载体
- rAAV-2-hGM-CSF体外转导对骨髓间充质干细胞的影响
- 2008年
- 骨髓间充质干细胞（BMSC）由于易于从骨髓分离，且经体外培养20代内其干细胞特性不变，同时体外培养的BMSC经过静脉回输后可归巢定位到骨髓、肝、脾等器官，并在体内长期生存，这些特征使其在诸多方面都存在应用的潜力。有资料表明，体外用病毒载体对BMSC进行基因修饰后，可将基因表达系统携带到体内表达。重组腺病毒由于其在基因治疗中的作用，被认为是最为安全有效的病毒载体。如携带治疗基因的重组腺病毒载体在体外能有效导入BMSC，则会为以该系统为基础的基因治疗临床应用提供实验依据和进一步研究的基础。
- 谢政军尹芳周淑芸
- 关键词：骨髓间充质干细胞重组腺病毒载体基因表达系统BMSC体外培养
