范洋洋
- 作品数：8 被引量：6H指数：1
- 供职机构：江苏科技大学生物技术学院江苏省蚕桑生物学与生物技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目江苏省研究生培养创新工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 家蚕bmo-miR-34对BmE74基因表达的调控被引量：1
- 2016年
- 为了研究家蚕bmo-miR-34(一类高度保守的miRNA)对E74基因(BmE74)的表达调控作用,首先利用生物信息学软件RNAhybrid和RNA22进行结合位点预测,然后从家蚕丝腺组织中克隆了bmo-miR-34前体序列,分别构建bmo-miR-34表达载体和靶基因BmE74 3'UTR重组表达载体,利用双报告基因荧光检测系统在细胞水平研究bmo-miR-34对BmE74基因的转录后调控作用。生物信息学预测结果表明,BmE74 3'UTR具有bmo-miR-34潜在结合位点;体外转染试验结果显示,与对照相比,转染bmo-miR-34重组质粒的细胞荧光素酶活性极显著下调(P<0.01),但是当加入人工合成的bmo-miR-34抑制物后荧光素酶活性显著上调(P<0.01)。说明bmo-miR-34对BmE74的转录后表达具有抑制作用。
- 王欣范洋洋陈晨谢雨辰蒋涛汪生鹏沈兴家
- 关键词：家蚕
- Bmo-miR-375-3p对家蚕丝素蛋白轻链基因BmFib-L表达的调控作用被引量：1
- 2016年
- 【目的】探究家蚕Bombyx mori miRNAs对丝素蛋白轻链基因(fibroin light chain gene,Bm FibL)和P25蛋白基因Bm P25表达的调控作用。【方法】分别以Bm Fib-L和Bm P25 mRNA 3'UTR为靶序列,应用在线预测软件RNAhybrid从前期家蚕4和5龄幼虫后部丝腺(posterior silk gland)sRNA高通量测序获得的29个差异表达bmo-miRNAs中,筛选对Bm Fib-L和Bm P25具有调控作用的候选bmo-miRNAs;采用半定量RT-PCR方法在mRNA水平分析候选bmo-miRNAs及其靶基因Bm Fib-L和Bm P25在4和5龄幼虫期以及5龄第3天幼虫不同组织的表达水平;利用双荧光报告基因检测系统在家蚕细胞Bm N中验证候选bmo-miRNAs对Bm Fib-L和Bm P25表达的调控作用。【结果】筛选到一个在Bm Fib-L和Bm P25 mRNA 3'UTR上都有靶位点的bmo-miR-375-3p(曾称bmo-miR-375*)。在后部丝腺中bmo-miR-375-3p和其预测靶基因Bm Fib-L和Bm P25都有较高的表达水平,提示bmo-miR-375-3p具备调控Bm Fib-L和Bm P25表达的时空条件。miR-375-3p重组表达载体与融合了Bm Fib-L 3'UTR的萤火虫荧光素酶(luciferase)报告基因(luc)表达载体共转染Bm N细胞,报告基因luc的表达水平显著下降;而在miR-375-3p重组表达载体与融合了Bm P25 3'UTR的luc表达载体共转染Bm N细胞中报告基因luc的表达水平下降不显著。【结论】miR-375-3p显著下调Bm Fib-L基因的表达,而对Bm P25基因的表达无明显调控作用。
- 范洋洋钱平沈兴家王欣蒋涛唐顺明
- 关键词：家蚕MIRNA基因表达调控
- microRNA的功能及家蚕microRNA的研究进展
- 2015年
- microRNA(miRNA)是一类长度约22个碱基的内源性非编码小分子RNA,具有广泛的调节基因表达的功能,与生命体的发生、生长、发育和分化过程密切相关。miRNA除了对靶基因mRNA的翻译抑制、降解等起到负调控作用,还有去抑制和miRNA激活作用等正调控作用,以及竞争性内源RNA(ceRNA)调控机制。在家蚕中已经鉴定了许多新的miRNA,通过深度测序技术和利用基因芯片数据等分析了蚕体各个发育时期及不同组织中miRNA的表达特征,关于家蚕miRNA的功能及靶基因研究也成为热点。本文对miRNA的形成、生物学功能、靶基因预测等进行概述,并特别介绍家蚕miRNA的研究进展。
- 宋菲王欣钱平陈晨范洋洋沈兴家
- 关键词：MICRORNA生物合成生物学功能靶基因
- 家蚕miR-2755*和miR-375*体外对BmFib-L和BmP25基因的转录后调控作用
- MicroRNA（miRNA）是一类长约19-22个核苷酸的内源性非编码小RNA，在生物体内发挥着重要的调节作用。家蚕是一种重要的鳞翅目模式生物，家蚕丝腺具有高效、特异地合成丝蛋白的能力，具有重要的经济价值。为了研究家蚕...
- 范洋洋
- 关键词：家蚕
- 文献传递
- Bmo-miR-2755*对丝素蛋白基因BmFib-L和BmP25表达的调控作用被引量：3
- 2015年
- 为了研究家蚕miRNA对丝素蛋白基因表达的调控作用,采用生物信息学方法筛选获得对家蚕丝素轻链基因（BmFib-L）和P25蛋白基因（BmP25）有潜在调控作用的Bmo-miR-2755＊。利用半定量RT-PCR技术分析Bmo-miR-2755＊及其靶基因BmFib-L、BmP25在家蚕4~5龄期幼虫后部丝腺和5龄3 d幼虫不同组织器官中的表达水平,结果显示三者在后部丝腺组织中的表达水平都较高,呈现严格的时空特异性。以pcDNA3质粒为载体,构建Bmo-miR-2755＊的重组表达载体pcDNA3[ie1-egfpprimiR-2755＊-SV40];以pGL3.0-Basic质粒为载体,分别构建BmFib-L 3＇UTR、BmP25 3＇UTR与荧光素酶报告基因luc融合的重组报告质粒pGL3.0[A3-luc-Fib-L-3＇UTR-SV40]和pGL3.0[A3-luc-P25-3＇UTR-SV40]。以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参,分别将构建的Bmo-miR-2755＊重组表达载体和2个重组报告质粒共转染BmN细胞,通过检测细胞中的荧光素酶活性,明确Bmo-miR-2755＊可显著下调BmFib-L基因的表达,并能上调BmP25基因的表达,但上调作用未达显著水平。上述结果为研究家蚕miRNA的功能和阐明蚕丝蛋白基因表达调控分子机制提供了新的实验数据。
- 范洋洋陈晨王欣宋菲唐顺明易咏竹沈兴家
- 关键词：家蚕
- Bmo-miR-2771对家蚕丝胶蛋白基因BmSer-1表达的调控作用被引量：1
- 2016年
- 微小RNA(miRNA)可通过抑制mRNA转录或使RNA降解的方式在转录后水平调节靶基因的表达。研究与家蚕丝胶蛋白基因1(BmS er-1)转录后表达有关的miRNA(Bmo-miR)及其作用方式,以丰富丝胶蛋白基因表达的精细调控信息。首先从miRBase 21数据库中获得全部成熟体Bmo-miR,通过生物信息学分析筛选到一个对BmS er-1有潜在调控作用的BmomiR,命名为Bmo-miR-2771。设计茎环引物,采用半定量RT-PCR方法检测Bmo-miR-2771及其预测靶基因BmS er-1在家蚕5龄3 d幼虫头部、脂肪体、前部丝腺、中部丝腺、后部丝腺、中肠等组织器官以及血淋巴细胞中的表达水平,结果显示Bmo-miR-2771特异性地在中部丝腺中表达,并且靶基因BmS er-1在中部丝腺的相对表达量也明显高于其他组织。将构建的表达BmomiR-2771的重组质粒pcD NA3.0(ie1-egfp-pri-miR-2771-SV40)和表达BmS er-1 3'-UTR的重组质粒pG L3(A3-luc-Ser-1 3'UTRSV40)共转染家蚕卵巢培养细胞BmN,并以共转染pcD NA3.0(ie1-egfp-SV40)和pG L3(A3-luc-Ser-1 3'UTR-SV40)的BmN细胞为阳性对照,以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参,检测荧光素酶活性,结果显示实验组的荧光素酶活性相对于阳性对照组显著降低(P<0.05),从细胞水平证实了Bmo-miR-2771对BmS er-1基因表达具有负调控作用。
- 钱平蒋涛王欣宋菲陈晨范洋洋唐顺明沈兴家
- 关键词：家蚕微小RNA转录后调控半定量RT-PCR
- MiR-34基因家族功能研究进展
- 陈晨范洋洋王欣沈兴家
- 对丝腺细胞因子SGF-1具有调控作用的家蚕miRNAs功能研究被引量：1
- 2016年
- 为了研究家蚕miRNAs对丝腺细胞因子SGF-1表达的调控作用,以SGF-1为靶基因,利用生物信息学软件RNAhybrid和RNA22预测对SGF-1具有潜在调控作用的候选家蚕miRNAs,经茎环PCR鉴定后分别构建重组表达载体,在细胞水平研究家蚕miRNAs的功能。结果表明,转染了bmo-miR-305*重组质粒组的luc荧光素酶活性比未转染时极显著下调(P<0.01);转染了bmo-miR-3327*重组质粒组的luc荧光素酶活性比未转染时极显著下调(P<0.01);再各自转染了inhibitors后荧光蛋白表达量均上调(P<0.05)。说明SGF-1 3'UTR上存在bmo-miR-305*和bmo-miR-3327*的结合位点,且bmo-miR-305*和bmo-miR-3327*对SGF-1的转录后表达具有一定抑制作用。
- 王欣陈晨范洋洋谢雨辰钱平唐顺明沈兴家
- 关键词：家蚕MIRNAS
