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钱智勇: 作品数：15 被引量：25H指数：3; 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金吴阶平医学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>

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C型利钠利尿肽基因转染对骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响: 2017年; 目的研究C型利钠利尿肽(C-type natriuretic peptide,CNP)基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨分化能力的影响,为实现高质量基于间充质干细胞的组织工程软骨构建奠定基础。方法采用全骨髓培养法分离SD大鼠BMSCs并进行传代培养及多向分化能力鉴定。将已构建的含有人CNP基因和增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组腺病毒(Ad-NPPC-eGFP)按照特定转染复数(multiplicity of infection,MOI)转染BMSCs,通过流式细胞仪检测转染效率,Real-time PCR检测转染后CNP mRNA表达情况,MTT实验检测转染后对细胞增殖的影响,阿尔新蓝染色检测转染后BMSCs体外诱导14 d及21 d时成软骨情况。结果成功获取了大鼠BMSCs,成脂、成骨分化诱导结果表明其具有较好的多向分化能力。腺病毒转染后细胞状态良好,转染效率较高,且未对细胞增殖产生显著影响(P>0.05),转染后BMSCs CNP mRNA高表达(P<0.05),体外成软骨能力强于未转染CNP基因组(P<0.05)。结论含有CNP基因的重组腺病毒可在SD大鼠BMSCs中稳定表达,并表现出较好的体外诱导成软骨能力。; 杨烁时权钱智勇刘东华郭希民徐娟; 关键词：骨髓间充质干细胞重组腺病毒软骨组织工程

人β-防御素3与结缔组织生长因子共表达重组慢病毒载体的构建及表达: 2017年; 目的体外构建共表达人β-防御素3(hBD3)与结缔组织生长因子(CTGF)的重组慢病毒,并检测其对骨髓间充质干细胞(BMSC)的转染效率及表达情况。方法体外构建携带hBD3、CTGF和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒表达载体,测定病毒滴度。转染BMSC,确定最适感染倍数(MOI)值。采用荧光显微镜和流式细胞仪检测病毒的转染效率及传代稳定性。Western印迹检测目的蛋白的表达。结果经PCR和测序分析鉴定,成功构建了携带hBD3和CTGF基因的重组慢病毒载体Lenti-CTGF-hBD3-EGFP、Lenti-hBD3-EGFP和Lenti-EGFP,检测病毒滴度分别为3.21×10~8、5.80×10~8和1.16×10~9。病毒转染BMSC最适MOI值为150。荧光显微镜下,转染后BMSC绿色荧光效率高;流式细胞仪检测病毒的转染效率,Lenti-CTGF-hBD3-EGFP为79.72%,Lenti-hBD3-EGFP为83.08%,Lenti-EGFP为84.43%,且都稳定遗传。Western印迹显示目的蛋白表达成功。结论成功构建了共表达hBD3、CTGF的重组慢病毒载体,并能在BMSC中高效、稳定表达,为进一步研究hBD3与CTGF的应用奠定了基础。; 孙洁钱智勇刘静张欣然刘翠刘东华郭红延郭希民; 关键词：重组慢病毒结缔组织生长因子骨髓间充质干细胞

PAA-CS超吸水海绵应用于喂服华法林大鼠拔牙创模型的止血效果被引量：3: 2015年; 目的探讨PAA-CS超吸水海绵应用于口腔拔牙创的优势。方法建立对照组(A组)SD大鼠拔牙创模型和华法林组(B组)SD大鼠凝血功能异常拔牙创模型,以纱布棉球做阴性对照对拔牙创进行止血,比较PAA-CS超吸水海绵与纱布棉球的止血效果。结果 B组凝血酶原时间(s)较A组显著延长[(19.73±2.74)vs(10.04±0.95),P<0.05],INR值增大(3.49 vs 1)。A、B两组中,PAA-CS超吸水海绵止血时间均少于纱布棉球,差异有统计学意义(P<0.05);A组止血后无继发出血;B组应用纱布棉球止血后有4只继发出血。结论成功建立了因喂服华法林而导致凝血功能异常的大鼠拔牙创模型,PAA-CS超吸水海绵的止血效果明显优于纱布棉球。; 张玉成张欣然刘翠朱彪钱智勇郭希民郭红延; 关键词：华法林

一种超吸水性高分子水凝胶干胶海绵及其制备方法和用途: 一种超吸水性高分子水凝胶干胶海绵及其制备方法和用途。该海绵是由壳聚糖作为骨架，超吸水聚合物作为支链，具有柔性结构的大分子或聚合物作为交联剂的立体网状多孔海绵。该海绵可通过一锅法制备完成。产物呈多孔道结构，并具有超吸水性特...; 郭希民钱智勇庹晓晔

C型利钠利尿肽重组腺病毒载体构建及鉴定被引量：2: 2015年; 目的:体外构建人C型利钠利尿肽(C N P,前体基因名N PPC)和增强型绿色荧光蛋白(EG FP)重组腺病毒,并检测其在兔骨髓间充干细胞(B M SC s)中的表达。方法:将N PPC基因克隆至含有EG FP的穿梭质粒,获得重组腺病毒A d-N PPC-EG FP颗粒,测定病毒滴度。转染兔骨髓间充质干细胞,测定感染复数(M O I)值,荧光显微镜、流式细胞仪检测转染效率及传代稳定性。结果:经PC R、酶切鉴定、测序分析,重组腺病毒构建成功,效价为1.2×1011PFU/m l,转染兔B M SC s最适M O I值为1000。感染细胞后效率较高,且稳定遗传。结论:成功构建C N P基因N PPC重组腺病毒,可在兔B M SC s中稳定表达,为进一步研究C N P的作用奠定基础。; 时权钱智勇刘翠郭希民徐娟; 关键词：重组腺病毒 CNP 骨髓间充质干细胞

血小板衍生生长因子-C对人毛乳头细胞生物学活性的影响: 2016年; 目的观察血小板衍生生长因子-C（PDGF-C）对体外培养的人毛乳头细胞生物学作用的影响。方法取整形外科除皱患者所弃头皮分离培养毛乳头，免疫荧光细胞染色法鉴定碱性磷酸酶在人毛乳头细胞的表达，CCK-8法检测浓度分别为0、10、20、30、40ng／ml的PDGF—C，在0、1、2、3、4、5、6d7个时间点对体外培养毛乳头细胞增殖的影响，绘制细胞生长曲线。流式细胞仪分析最适合浓度下人毛乳头细胞的细胞周期变化。Transwell细胞迁移实验及细胞划痕实验测定PDGF—C对毛乳头细胞迁移、趋化能力。结果碱性磷酸酶在人毛乳头细胞中呈阳性表达。PDGF—C在0～40ng/ml范围内，能明显促进人毛乳头细胞的增殖，并成剂量依赖关系，对人毛乳头细胞的促增殖作用在30ng／ml达高峰，差异有统计学意义（P〈0．05），在PDGF-C为30ng／ml条件下体外培养的人毛乳头细胞，处于S期细胞的比例较对照组显著增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。PDGF-C组相对于对照组向划痕处迁移细胞数明显增多。PDGF-C组向Transwell小室下面迁移细胞数多于对照组，2组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。PDGF-C组碱性磷酸酶活性能力增高，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论PDGF—C可促进体外培养的人毛乳头细胞的增殖、迁移及诱导能力。; 岳晓彤陈甫寰何秀叶宋慧锋王统民郭希民钱智勇; 关键词：毛乳头细胞细胞增殖细胞运动

一种稳定间充质干细胞来源软骨组织表型的方法: 本发明公开了经CNP基因修饰的间充质干细胞的新用途，其目的是将经CNP修饰过的间充质干细胞用于维持软骨组织的表型。此种间充质干细胞是通过将含CNP基因的重组腺病毒感染间充质干细胞得到的，将此种细胞用于软骨组织工程的种子细...; 郭希民时权钱智勇周勇毛宁; 文献传递

人β-防御素3与杀菌/通透性增加蛋白重组腺病毒载体及其转染C3H10T1/2细胞的构建: 2015年; 目的构建人β-防御素3(h BD3)与杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的重组腺病毒载体p Adxsi-BPIBD3,并转染鼠胚胎间充质干细胞系(C3H10T1/2),观察融合蛋白的表达。方法酶切原始质粒,得到BPI-BD3片段,连接到p Shuttle-CMV得到p Shuttle-BPI-BD3,验证后将插入片段转移至p Adxsi载体构建重组腺病毒质粒,线性化后转染HEK293细胞,扩增纯化后,TCID50测定重组腺病毒滴液。p Adxsi-BPI-BD3及空载体p Adxsi(作为对照组)转染C3H10T1/2。RT-PCR、Western blot检测BPI-BD的表达;MTT法检测其对细胞增殖的影响。结果成功构建重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3,纯化后病毒滴度达1.2×1010pfu/ml。p AdxsiBPI-BD3转染C3H10T1/2后,RT-PCR、Western blot结果显示,BPI-BD3融合蛋白表达成功。MTT结果显示,转染的C3H10T1/2生长无明显影响(P>0.05)。结论成功构建重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3,且转染C3H10T1/2后可稳定表达BPI-BD3融合蛋白,为进一步研究应用抗菌肽BPI-BD3奠定基础。; 张欣然刘翠钱智勇翟羽郭希民郭红延; 关键词：腺病毒载体

氧还蛋白过氧化物2在表皮干细胞向汗腺细胞诱导分化过程中对表型改变的影响被引量：2: 2017年; 目的探讨氧还蛋白过氧化物2基因在表皮干细胞向汗腺细胞分化过程中对表型改变的影响。方法分离培养健康包皮获取表皮干细胞，分离培养健康成人皮肤获取汗腺细胞，以免疫荧光细胞化学染色鉴定。慢病毒载体介导的氧还蛋白过氧化物2基因分为过表达组、敲低表皮干细胞组及空白对照组，RT．PCR和WesternBlot技术分别在基因和蛋白水平检测3组的氧还蛋白过氧化物2表达。每组分别通过Transwell板与汗腺细胞共培养，流式细胞术检测共培养前、后表皮干细胞CEA和B1整合素的表达情况。结果表皮干细胞及汗腺细胞符合其相应特异性抗原。共培养前表皮干细胞B1整合素高表达（98．69±0．67）％，CEA几乎不表达（6．20±3．15）％；共培养后B1整合素表达程度：敲低组（19．30±0．53）％〈空白对照组（65．77±2．32）％〈过表达组（92．63±10．97）％；共培养后CEA表达程度：敲低组（95．43±2．36）％〉空白对照组（51．20±0．79）％〉过表达组（45．91±0．93）％。以上结果组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论氧还蛋白过氧化物2基因可抑制表皮干细胞向汗腺细胞分化的表型改变，并可提高保留其本身特异性抗原表达水平的能力。; 陈甫寰宋慧锋郭希民岳晓彤刘玲英周勇刘东华钱智勇王统民何秀叶; 关键词：表皮干细胞汗腺细胞分化

一种利用三维细胞培养系统促进脐带血造血干细胞快速稳定增殖的细胞培养方法: 本发明提出了一种利用三维细胞培养系统促进脐带血造血干细胞快速稳定增殖的细胞培养方法，包括下列步骤：1)提取制备共培时作为基质细胞使用的细胞，并用流式细胞术进行鉴定；2)处理三维培养过程中使用的微载体或其他载体等材料，备用...; 郭希民刘东华钱智勇周勇毛宁; 文献传递

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