姚亮
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 供职机构：大连医科大学实验动物中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- STAT3在H-ras12V转基因小鼠肝肿瘤发生发展中的作用机制研究
- 目的: 探究STAT3在ras癌基因诱导的肝肿瘤发生发展中的作用机制。 方法: 1.提取9月龄H-ras12V转基因雄鼠肝肿瘤组织(T)、肿瘤周围组织(P)以及9月龄非转基因雄鼠肝组织(Wt)样本，经病理确认后，提...
- 姚亮
- 关键词：肝肿瘤
- 肝肿瘤线粒体功能障碍及抗氧化应激机制的探讨被引量：2
- 2015年
- 目的 :探讨癌基因Ras诱导小鼠肝组织中线粒体功能的障碍及肝肿瘤细胞抗氧化应激反应的分子作用机制。方法 :采集H-ras12V转基因雄性小鼠的肝癌组织、癌旁组织以及正常健康雄性小鼠的肝组织(正常对照)。采用比色法定量检测肝组织中线粒体呼吸链复合物Ⅰ的活性;对线粒体呼吸链相关基因的转录组进行测序,并采用实时荧光定量PCR法检测组织中线粒体复合物关键酶NADH脱氢酶(辅酶)1α亚基12[NADH dehydrogenase(ubiquinone)1 alpha subcomplex 12,Ndufa12]、NADH脱氢酶(辅酶)铁硫蛋白6[NADH dehydrogenase(ubiquinone)Fe-S protein 6,Ndufs6]、泛醌细胞色素C还原酶结合蛋白(ubiquinol-cytochrome C reductase binding protein,Uqcrb)和细胞色素C氧化酶7a2(cytochrome C oxidase subunitⅦa polypeptide 2,Cox7a2)m RNA的表达水平以及Bcl-2和解偶联蛋白2(uncoupling protein2,Ucp2)m RNA的表达水平;免疫荧光法检测组织中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。结果 :与正常健康雄性小鼠肝组织相比,H-ras12V转基因雄性小鼠肝癌组织和癌旁组织中线粒体呼吸链复合物Ⅰ的活性均显著降低(F=14.26,P=0.003);转基因小鼠肝癌组织和癌旁组织中Ndufa12、Ndufs6、Uqcrb和Cox7a2 m RNA的表达水平均显著降低(F=18.55,P=0.001;F=7.06,P=0.014;F=12.81,P=0.002;F=10.51,P=0.004)。免疫荧光检测结果显示,与正常对照组和转基因小鼠肝癌组织相比,转基因小鼠癌旁组织中ROS的水平显著升高(F=31.35,P=0.001);Bcl-2和Ucp2m RNA表达水平均显著升高(F=20.29,P=0.002;F=15.51,P=0.001)。结论 :癌基因Ras的表达直接下调了肝组织线粒体呼吸链复合物关键酶的表达,进而导致线粒体功能障碍并上调细胞内ROS的水平。肝癌细胞通过促进Bcl-2和Ucp2的表达降低线粒体产生的ROS,进而促进肝癌的发生和发展。
- 庄云芳李慧玲姚亮崔海鹏董建一陈军王福金王爱国王靖宇
- 关键词：活性氧
- mTOR与ERK对Hep3B细胞cyclin D1表达的协同调控分子机制被引量：3
- 2015年
- 目的探讨Hep3B细胞中调控cyclinD1过表达的分子机制。方法提取正常肝细胞LO2和肝癌细胞Hep3B的总RNA和蛋白，RT—qPCR和蛋白质印迹法检测cyclinD1的mRNA和蛋白表达水平以及细胞外信号调节激酶1／2（extracellular signal—regulated kinase1／2，ERK1／2）、磷酸化ERK1／2（phosphorylation-ERK1／2，p-ERK1／2）、磷酸化雷帕霉素靶蛋白（phosphorylation mammalian target of rapamycin，p-mTOR）和核因子-κB抑制蛋白α亚基（nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor alpha，IκBα）的蛋白表达水平。ERK、mTOR和NF-KB抑制剂处理Hep3B细胞，检测cyclinD1的mRNA和蛋白表达变化。结果与LO2相比，Hep3B中cyclinD1的mRNA和蛋白表达水平分别升高115．73（t=36．617，P=0．009）和22．60倍（t=8．457，P〈0．001），p-ERK1、ERK1和p—mTOR的蛋白表达水平分别升高10．87（t=5．903，P=0．004）、24．77（t=23．284，P=0．002）和20．60倍（t=24．492，P〈0．001），IKBd的蛋白表达水平差异无统计学意义，t=35．923，P=0．058。ERK抑制剂PD184352处理Hep3B细胞，对p-mTOR蛋白表达水平没有明显影响，但cyclinD1的mRNA表达水平显著下降，F=52．53，P〈0．001；其蛋白表达水平也随之在6～24h显著降低，F=5．285，P=0．009。mTOR抑制剂Rapamycin处理Hep3B细胞，显著提升了p-ERK蛋白的表达水平，F=0．004，P〈0．001；也显著升高了cyclinD1mRNA的表达水平，F=587．47，P=0．002；但cyclinD1的蛋白表达水平在6～24h显著降低，F=0．002，P〈0．001。同时用ERK和mTOR的抑制剂处理Hep3B细胞，与ERK抑制剂的处理结果相同。NF-κB抑制剂BAY11—7082处理Hep3B细胞对cyclinD1的mRNA和蛋白表达水平没有显著影响。结论mTOR和ERK1是调控Hep3B细胞cyclinD1表达主要信号分子，mTOR对ERK的抑制作用可能是维持适当cyclinD1蛋白水平的重要调控机制。
- 崔海鹏董建一姚亮李慧玲陈军王福金王爱国王靖宇
- 关键词：CYCLIND1ERKMTOR
- 低水平活性氧对Ras癌基因诱导肝肿瘤发生的影响被引量：5
- 2015年
- 目的探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)在Ras癌基因诱导体内肝肿瘤发生中的作用。方法采用H-ras12V转基因肝癌小鼠模型,原位灌流法分离3个月龄雄鼠肝细胞和DCF-DA染色,流式细胞术检测肝细胞中的ROS水平;免疫荧光测定试剂盒检测7个月龄雄鼠肝组织ROS水平。对3和7个月龄雄鼠肝组织及肝肿瘤组织进行总蛋白提取,蛋白质印迹法检测ERK、p-ERK、p53、p21和Caspase-3的表达水平。结果流式细胞检测结果表明,3个月龄转基因雄鼠肝细胞中的ROS水平为7.81±0.53,比非转基因雄鼠肝细胞的1.00±0.16显著升高,t=21.31,P<0.001。免疫荧光检测表明,7个月龄转基因雄鼠肿瘤周围(P)组织中的ROS水平为18.25±4.41,比非转基因雄鼠肝(Wt)组织的2.42±0.61显著升高,t=6.16,P=0.004;比转基因雄鼠肿瘤(T)组织的3.18±1.75也显著升高,t=5.50,P=0.005。蛋白质印迹法检测表明,3个月龄转基因雄鼠肝组织中的p-ERK水平为5.36±0.32,比非转基因雄鼠肝组织的0.08±0.04显著升高,t=16.55,P=0.003。7个月龄转基因雄鼠肿瘤组织中p-ERK蛋白水平为22.09±6.57,比非转基因雄鼠肝组织的0.08±0.02显著升高,t=5.80,P=0.004;比转基因雄鼠肿瘤周围组织的8.60±3.23也显著升高,t=3.19,P=0.033;7个月龄转基因雄鼠肿瘤组织中p53蛋白水平为4.86±2.18,比非转基因雄鼠肝组织的39.23±13.43显著降低,t=-3.31,P=0.046;比转基因雄鼠肿瘤周围组织的31.09±7.60也显著降低,t=-3.32,P=0.029。7个月龄转基因雄鼠肿瘤组织中p21蛋白水平为4.38±3.28,比非转基因雄鼠肝组织的33.47±8.04显著降低,t=-5.95,P=0.010;比转基因雄鼠肿瘤周围组织的24.02±10.18也显著降低,t=-3.18,P=0.034。7个月龄转基因雄鼠肿瘤组织中的Caspase-3活化片段所占比例(17×103/35×103)为0.09±0.05,比非转基因雄鼠肝组织的0.22±0.04显著降低,t=-3.84,P=0.018;转基因雄鼠肿瘤周围组织的活化片段为0.10±0.05,比非转基因雄鼠肝组织的也显著降低,
- 姚亮李慧玲董建一崔海鹏王福金王爱国王靖宇
- 关键词：肝肿瘤活性氧转基因小鼠
- Ras/MAPK/ERK通过协同NF-κB促进肝癌细胞中cyclinD1的表达被引量：9
- 2014年
- 目的探讨Ras癌基因在体内诱导肝肿瘤发生过程中促进cyclin D1表达的分子机制。方法利用H-ras12V转基因雄鼠肝肿瘤组织、肿瘤周围组织以及非转基因雄鼠肝组织进行病理分析和总RNA及蛋白质的提取。应用qRT-PCR和Western blot方法检测cyclin D1的表达以及调控cyclin D1表达的相关信号通路激活状态。采用miRNA测序、生物信息学分析和qRT-PCR验证方法检测miR-5102基因的表达水平。结果与非转基因雄鼠肝组织和肿瘤周围组织相比,肿瘤组织中cyclin D1基因的mRNA和蛋白表达水平显著升高。与非转基因雄鼠肝组织和肿瘤周围组织相比,在肿瘤组织中MAPK信号转导通路中的ERK信号分子的蛋白表达水平和磷酸化水平都显著升高,在肿瘤组织中成高激活状态,NF-κB信号通路中的抑制因子IκB蛋白水平显著降低。miR-5102的表达水平没有显著变化。结论在Ras癌基因诱导的肝肿瘤发生过程中,主要通过激活MAPK/ERK和NF-κB信号通路促进cyclin D1的表达。
- 崔海鹏董建一李慧玲姚亮王福金王爱国王靖宇
- 关键词：肝癌CYCLIND1ERKNF-ΚB
