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一种超耐Mn2+的细菌漆酶、重组载体、重组菌、酶制剂、复合酶系及其制备方法与应用: 本发明涉及一种超耐Mn2+的细菌漆酶、重组载体、重组菌、酶制剂、复合酶系及其制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明来源于宏基因组的细菌漆酶lac1542，编码该漆酶的基因核苷酸序列如SEQ ID ...; 董冰雪张磊张伟夏敏李鹏蔡心清吴倩倩

突变灰盖鬼伞过氧化物酶、制备方法和应用: 本发明公开了一种突变灰盖鬼伞过氧化物酶、制备方法和应用，属于基因工程及环境技术领域。本发明利用基因合成定点突变平台合成CIPmt4，经3轮易错PCR，抗性筛选得到含5个氨基酸突变(I49S、V53A、T121A、M166...; 董冰雪张磊方金涛张伟石建州李玉英夏敏

一种无辅基氯过氧化物酶CPO822的基因、蛋白及其应用: 本发明公开了一种具有多种功能尤其是可以降解苯并芘的具有过氧化物酶、过氧化氢酶酶、卤代酶和酯酶活性的无辅基氯过氧化物酶CPO822的基因、蛋白及其应用。本发明的有益效果为：本发明通过宏基因组技术，从土壤宏基因组中得到一种新...; 董冰雪毛润乾张磊张伟夏敏李彩彩

定向进化提高灰盖鬼伞过氧化物酶染织废水脱色效率被引量：3: 2017年; 【目的】获得染织废水脱色能力增强的灰盖鬼伞过氧化物酶。【方法】使用基因合成及定点突变平台合成突变灰盖鬼伞过氧化物酶基因CIPmt4(I49S、V53A、M166F和M242I),并调整密码子至毕赤酵母偏好性。以CIPmt4为模板进行定向进化,经过三轮易错PCR和高通量筛选得到一个酶学性质显著改善的突变体(CIPmt5)。通过3D建模和分子动力学模拟分析蛋白的结构及热稳定性,并进一步研究CIPmt5和野生型CIP对刚果红、氨基黑、甲基橙、次甲基蓝、苯胺蓝、结晶紫、溴酚蓝共7种染料的脱色能力。【结果】序列分析显示该突变体积累了I49S、V53A、T121A、M166F和Y272F共5个氨基酸突变,与野生型灰盖鬼伞过氧化物酶相比,以ABTS为底物酶活性是野生型的2.01倍(24.44 U/mg),最适反应p H由5.0提高到6.5,最适反应温度由25°C提高到45°C。除次甲基蓝外对其它染料脱色的最适p H都往中、碱性方向偏移,脱色率普遍高于野生型。模型分析显示CIPmt5活性中心更开放,热稳定性增强。【结论】突变体酶CIPmt5能够更好地替代野生型灰盖鬼伞过氧化物酶应用于染织业染料脱色、化工废水和染织废水的生物修复。; 张磊张伟方金涛董冰雪黄林娜吴倩倩押玉柯张建丰张格格郑路; 关键词：定向进化酶学特性染料脱色

一种无辅基氯过氧化物酶CPO822的基因、蛋白及其应用: 本发明公开了一种具有多种功能尤其是可以降解苯并芘的具有过氧化物酶、过氧化氢酶酶、卤代酶和酯酶活性的无辅基氯过氧化物酶CPO822的基因、蛋白及其应用。本发明的有益效果为：本发明通过宏基因组技术，从土壤宏基因组中得到一种新...; 董冰雪毛润乾张磊张伟夏敏李彩彩; 文献传递

灰盖鬼伞过氧化物酶功能表达及部分酶学特性被引量：1: 2015年; 【目的】旨在用毕赤酵母高效表达灰盖鬼伞过氧化物酶。【方法】借助DNAworks 3.1软件设计、优化引物,用自己构建的基因合成、定点突变平台合成了毕赤酵母密码子偏好性的灰盖鬼伞过氧化物酶基因,测序后构建在表达载体pPICZαA上,整合于巴斯德毕赤酵母GS115染色体,来自酿酒酵母的α因子作为信号肽序列指导重组蛋白的分泌表达。从82个PCR检测为阳性的酵母转化子中筛选出6株高Zeocin抗性的菌进行表达,选表达酶活性最高的作为实验菌株命名为CIP/GS115。【结果】以ABTS为底物时,CIP/GS115在甲醇诱导第4天酶活最高达到487.5U/mL,是目前摇瓶培养诱导表达灰盖鬼伞过氧化物酶活性最高报道。纯化后的酶最适反应温度为25℃,45℃酶反应速度是最适温度时的61.5%,在低于40℃时比较稳定,超过45℃稳定性迅速下降。最适反应pH为5.0,在p H 4.5-6.5之间比较稳定。以不同的底物研究纯酶底物特异性发现最适底物的顺序是:ABTS>愈创木酚>2,6-二甲氧苯酚>2,4-二氯苯酚>苯酚。【结论】灰盖鬼伞过氧化物酶在毕赤酵母中的高效分泌表达和高的特殊活性为该酶在废水处理、染料脱色等方面的工业化应用奠定了一定基础。; 董冰雪牛秋红张伟耿三春李鹏远万里贡一峰梁珂维; 关键词：基因合成毕赤酵母表达

突变灰盖鬼伞过氧化物酶、制备方法和应用: 本发明公开了一种突变灰盖鬼伞过氧化物酶、制备方法和应用，属于基因工程及环境技术领域。本发明利用基因合成定点突变平台合成CIPmt4，经3轮易错PCR，抗性筛选得到含5个氨基酸突变(I49S、V53A、T121A、M166...; 董冰雪张磊方金涛张伟石建州李玉英夏敏; 文献传递

一种超耐Mn2+的细菌漆酶、重组载体、重组菌、酶制剂、复合酶系及其制备方法与应用: 本发明涉及一种超耐Mn2+的细菌漆酶、重组载体、重组菌、酶制剂、复合酶系及其制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明来源于宏基因组的细菌漆酶lac1542，编码该漆酶的基因核苷酸序列如SEQ ID ...; 董冰雪张磊张伟夏敏李鹏蔡心清吴倩倩; 文献传递

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张伟

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