刘晓芬
- 作品数：6 被引量：4H指数：2
- 供职机构：广东药科大学基础学院更多>>
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- 一种新型抗体导向核酸转移系统关键组分的制备及鉴定被引量：3
- 2015年
- 目的制备并鉴定葡萄球菌A蛋白-多聚赖氨酸交联物(SPA-PLL交联物),以此交联物为"接头",构建一种新型的抗体导向核酸转移系统。方法采用SPDP化学偶联法制备SPA-PLL交联物;采用SDSPAGE电泳法测定SPA-PLL交联物的纯度;采用酶联法或DNA凝胶阻滞实验分别测定SPA-PLL交联物与IgG或DNA片段的结合;将SPA-PLL交联物与Tfr抗体和p EGFP-C1质粒以适宜的质量比混合即可组装成Tfr抗体导向pEGFP-C1质粒转移系统;将该抗体导向的pEGFP-C1质粒转染人肝癌HepG2细胞,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达。结果 SPA-PLL交联物纯度较高,能良好地结合多种Ig G抗体,同时也能较好地结合pEGFP-C1质粒、中和其负电荷;Tfr抗体导向pEGFP-C1质粒转移系统能特异性地转染Hep G2细胞,并使pEGFP-C1质粒在细胞中有效表达。结论 SPA-PLL交联物能与核酸片段和IgG抗体非共价结合,并具有良好通用性;以此制备抗体导向核酸转移系统的过程简单方便。
- 刘晓芬刘云张萃吴强肖笑荣刘晓波
- 关键词：核酸
- 新型抗体靶向性核酸转移系统关键组分SPA-PEI交联物的生物学功能研究
- 2017年
- 目的考察新型抗体靶向性核酸转移系统的关键组分葡萄球菌A蛋白-聚乙烯亚胺交联物(SPA-PEI)的生物学功能,即结合IgG与压缩、复合DNA的能力。方法采用酶联免疫吸附试验和中和抑制实验测定SPA-PEI交联物与多种来源IgG的结合能力;采用DNA凝胶阻滞实验测定SPA-PEI交联物与DNA片段的结合;采用溴化乙啶拒掺实验测定SPA-PEI交联物压缩DNA的能力。结果 SPA-PEI交联物可与多种种属来源的IgG良好结合;SPA-PEI交联过程对SPA的结合特性无明显影响,SPA活性保持较好;SPA-PEI交联物能较好地中和质粒DNA或脱氧核酶(DzTi)的负电荷,压缩DNA片段能力接近游离PEI。结论制备的SPA-PEI交联物保持了SPA和PEI的生物学活性;SPA-PEI交联物可用于抗体靶向性核酸转移系统的构建。
- 刘云刘晓芬翟源慧吴强刘晓波
- 关键词：DNA结合
- 靶向性聚乙烯亚胺作为基因载体的研究现状被引量：4
- 2015年
- 聚乙烯亚胺(yethylenimine,PEI)是目前比较有前途的非病毒基因载体之一。载体靶向性或特异性是理想基因载体系统的主要特性,但是高相对分子质量的PEI毒性较大且缺乏肿瘤靶向性,因此,需要对PEI进行改造,使其成为一种具有靶向性的低毒性基因载体。目前关于PEI被修饰成为靶向性基因导入载体已有许多研究,主要包括:1以转铁蛋白、RGD肽等内源性配体的修饰;2以半乳糖等碳水化合物的修饰;3特异性抗体修饰。其中,以抗体作为靶向元件进行修饰,构建抗体靶向的PEI具有独特优势和发展前景。本文综述近年来国内外关于靶向性PEI基因导入载体的研究现状。
- 刘晓芬刘晓波
- 关键词：聚乙烯亚胺靶向性基因载体
- 葡萄球菌A蛋白-聚乙烯亚胺交联物的制备及其理化特性观察
- 2016年
- 目的制备葡萄球菌A蛋白-聚乙烯亚胺交联物(SPA-PEI交联物),并观察其理化性状。方法采用异型双功能交联剂N-琥珀酰亚胺基3-(2-吡啶二硫基)丙酸酯(SPDP)化学偶联法将葡萄球菌A蛋白(SPA)与聚乙烯亚胺(PEI)化学交联,用Sephadex G75柱层析法纯化SPA-PEI交联物。采用SDS-PAGE法鉴定交联物的纯度;紫外分光光度法测定交联物的吸收峰;采用粒度及Zeta电位分析仪测定交联物的粒径及表面Zeta电位、酸碱滴定法测定交联物的质子缓冲能力。结果 SPA与PEI共价结合形成SPA-PEI交联物,且交联物的纯度较高。SPA-PEI交联物在280 nm处有一吸收峰,其吸收曲线与SPA类似。SPA-PEI交联物粒径为(185.0±28.5)nm,表明Zeta电位为(38.0±6.6)m V,提示其粒径范围合理,带有较强的正电荷,可结合带负电荷的核酸片段。SPA-PEI交联物的酸碱滴定曲线与PEI类似,均有一个明显的缓冲平台,提示该交联物具有较强的质子缓冲能力。结论成功地制备出纯度良好的SPA-PEI交联物。SPA-PEI交联物粒度分布较合理、表面带较强正电荷、并且具有较强的质子缓冲能力。
- 刘云刘晓芬翟源慧张萃刘晓波
- 关键词：葡萄球菌A蛋白聚乙烯亚胺化学交联ZETA电位
- 一种肿瘤治疗的新型制剂DNCB/无水乙醇溶液
- 本发明公开了一种肿瘤治疗的新型制剂DNCB/无水乙醇溶液。本发明的肿瘤治疗的新型制剂DNCB/无水乙醇溶液，其特征在于，由2,4-二硝基氯苯（DNCB）和无水乙醇组成。本发明将DNCB溶于无水乙醇制备DNCB/无水乙醇溶...
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- 文献传递
- 人转铁蛋白受体特异性单克隆抗体的研制及其初步鉴定
- 2017年
- 目的建立能分泌人转铁蛋白受体(TfR)特异性抗体的杂交瘤细胞株,并对其分泌的抗体进行初步鉴定。方法将人肝癌细胞株HepG2分离纯化的TfR蛋白,采用常规法免疫BALB/C小鼠;采用间接ELISA法测定免疫血清抗体效价;采用常规聚乙二醇(PEG)介导法,将免疫小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0融合,用含HAT培养基筛选杂交瘤细胞;采用间接ELISA和Cell-ELISA法筛选TfR抗体阳性的杂交瘤细胞;采用有限稀释法进行克隆和多次亚克隆以建立稳定分泌TfR抗体的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注射经石蜡油致敏的小鼠腹腔以产腹水抗体,采用硫酸-辛酸法纯化腹水抗体;采用秋水仙素处理,计数细胞染色体数以进行杂交瘤细胞鉴定;采用免疫荧光染色法和Western blot法初步鉴定抗体与细胞表面或细胞总蛋白中TfR的结合。结果提取纯化的人TfR蛋白免疫小鼠获得成功,其1∶5 000稀释的血清抗体光吸收值(A_(490))是对照小鼠血清(1∶200稀释)的16倍以上;细胞融合率为42.22%,其中TfR抗体阳性孔20个,抗体阳性率为13.16%;抗体阳性孔B6和孔E8中杂交瘤细胞经克隆和亚克隆后建立起稳定分泌抗体的细胞株;B6杂交瘤细胞染色体数量位于56~60条之间,应为B细胞和SP2/0细胞融合而来;腹水抗体染色使HepG2细胞表面出现明亮荧光,并且能使HepG2细胞提取的总蛋白电泳图谱在95 000处出现清晰条带,表明该杂交瘤细胞分泌的抗体能特异性结合TfR蛋白。结论分泌抗人TfR抗体的小鼠杂交瘤细胞株已被筛选和建立;其分泌的抗体能与HepG2细胞的TfR特异性结合。
- 翟源惠刘云刘晓芬张萃吴强汪琦刘晓波
- 关键词：单克隆抗体
