张悦
- 作品数：14 被引量：31H指数：4
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生化学工程生物学更多>>
- CXCR4基因修饰骨髓间充质干细胞体外迁移实验
- 本文旨在构建一种高表达CXCR4的大鼠骨髓间充质干细胞/(MSCs/),考察CXCR4对细胞定向迁移能力的影响。
MSCs常用于心肌梗死后的心肌修复,研究表明损伤的心肌组织高表达SDF-1,而MSCs表面表达...
- 张悦
- 关键词：骨髓间充质干细胞CXCR4SDF-1逆转录病毒
- 文献传递
- 原生质体电融合法构建葡萄酒降酸酵母的研究被引量：4
- 2008年
- 以发酵性能优良的葡萄酒酵母F83和具有降解苹果酸能力的酒类酒球菌作为亲本菌株,进行电融合,构建发酵性能良好且具有降解苹果酸能力的葡萄酒酵母菌株。结果表明,两亲本菌株原生质体电融合的最佳条件为:交变电压55 V,交变电场频率1000 kHz,脉冲宽度30μs,脉冲个数5个。共获得13株融合株,其中10号融合子发酵、降酸性能较佳。
- 许俊艳高年发张悦孙晓雯
- 关键词：微生物葡萄酒酵母酒类酒球菌降酸融合子
- 重组大肠杆菌生产多形拟杆菌肝素酶I的发酵优化
- 2019年
- 以实验室前期构建的N端融合SUMO标签的多形拟杆菌肝素酶Ⅰ(SUMO-Bt-Hep Ⅰ)生产菌株重组大肠杆菌Rosetta(DE3)/pE-SUMO-Bt-HepⅠ为研究对象,通过单因素确定其最佳表达条件:诱导温度25℃、诱导剂浓度0.4mmol/L、诱导时间12 h;首先通过Plackett-Burman试验,筛选出培养基中3个主要影响酶活的因素:葡萄糖、酵母提取物和蛋白胨。并通过响应面试验确定最佳培养基为:葡萄糖9.52g/L,酵母提取物9.61g/L,蛋白胨19.92g/L,硫酸铵4g/L,磷酸氢二钠18g/L,磷酸二氢钾3g/L,硫酸镁5g/L。在此最佳培养基下发酵酶活预测可达55133IU/L,3次验证试验获得的SUMO-Bt-HepI酶活力平均为56961 IU/L,与理论预测值接近,比优化前(24215.9 IU/L)提高了2.3倍。通过5L发酵罐的分批补料扩大培养得到的最高发酵酶活为3.937×10^5IU/L,比摇瓶提高了6.91倍,这是目前报道发酵生产肝素酶I的最高水平,对工业化应用具有一定的指导意义。
- 张川刘敏敏刘耀天张悦李中媛宋亚囝罗学刚
- 关键词：重组大肠杆菌响应面发酵优化
- 聚合物纳米体系在药物和基因载体中的应用被引量：4
- 2008年
- 聚合物纳米体系在药物传递和基因载体方面具有重要的科研价值和广阔的应用前景,这方面的研究已成为当今生物医学材料界最活跃的领域之一。本文对聚合物纳米体系在药物传递和基因载体方面的应用做了综述,介绍了其中具有代表性的几种应用体系,如聚合物药物、聚合物-药物偶联体、聚合物-蛋白质偶联体、连接药物的聚合物胶束以及聚合物-基因复合物等,对当前研究的热点以及研究中存在的问题和不足进行了评述。
- 张悦于奡王永健
- 关键词：药物释放癌症治疗基因治疗
- 多形拟杆菌肝素酶Ⅰ的SUMO融合表达及酶学特性分析被引量：2
- 2019年
- 【目的】克隆多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron) Heparinase I基因,在大肠杆菌(Escherichiac。")中进行基因工程表达获得重组酶SUMO-Bt-HepI和Bt-HepI,并研究其酶学特性。【方法】对B.thetaiotaomicron肝素酶I (Bt-HepI)的基因序列进行密码子优化,PCR扩增得到目的基因,构建表达载体pET-28a-Bt-HepI和pE-SUMO-Bt-HepI,并转化至E. colt Rosetta (DE3)进行表达,分别得到重组产物Bt-HepI和SUMO-Bt-HepI,以肝素钠为底物研究两者的酶学性质。【结果】SDS-PAGE检测显示Bt-HepI和SUMO-Bt-HepI的分子量大小分别约为42.5 kDa和55 kDa。与Bt-HepI相比,融合SUMO-Tag后的肝素酶I比酶活提高了 48.9%。酶学性质表明:Bt-HepI和SUMO-Bt-HepI的最适pH和温度均为pH 9、45℃,二者在pH 5-9都具有很好的稳定性,但pH<5时,SUMO-Bt-HepI的耐酸性明显高于Bt-HepI0同时,在温度低于50 ℃时,SUMO-Bt-HepI的比酶活高于Bt-Hepl。此外,Ca^2+和Mg^2+对重组肝素酶I具有明显的促进作用,而CU^2+、Mr^2+、Zt^2+则表现出一定的抑制作用,提示在多形拟杆菌肝素酶I的结构中除了存在已知的Ca2+结合位点外,可能还存在Mg2+的结合位点。【结论】本研究首次将多形拟杆菌来源的肝素酶I和SUMO-Tag进行了融合表达,使其比酶活得到了显著的提高,为其生产应用奠定了基础。
- 张川张悦张悦李中媛宋亚囝李中媛
- 关键词：酶学性质
- 铁皮石斛多糖与Toll样受体4互作机制的计算模拟
- 2024年
- 为研究铁皮石斛多糖(Dendrobium officinale polysaccharide,DOP)具有免疫活性片段的结构特征及与Toll样受体4(Toll⁃like receptor 4,TLR4)的相互作用机制,基于对TLR4结合腔的亲疏水性分析,将DOP寡糖的分为疏水片段筛选和亲水片段筛选,通过分子对接和分子动力学模拟,分析作用最强的DOP片段的结构特征及与TLR4的相互作用机制。结果表明,找到作用最强的DOP七糖片段,具有与经典底物脂多糖相似的结合模式,其中疏水性四糖片段结合在疏水结合腔,亲水性三糖片段结合在电正性区域。具有潜在免疫活性的铁皮石斛多糖可以由乙酰基修饰的疏水四糖片段和没有乙酰基修饰的亲水三糖片段组成,主要通过氢键和疏水作用与TLR4进行相互作用,发挥免疫活性。
- 崔萌菲张悦张志宇许慧敏刘翠成颖李居行刘欢欢贺超郭庆彬刘岯
- 关键词：TOLL样受体4分子对接分子动力学模拟互作机制
- 木糖和葡萄糖共发酵生产L-组氨酸被引量：2
- 2020年
- 以1株L-组氨酸生产菌Escherichia coli HIS1为研究对象,优化其L-组氨酸合成关键酶His G*的诱导条件。通过摇瓶发酵的方式确定诱导剂木糖的最适质量浓度为10 g/L;通过5 L发酵罐发酵的方式确定最佳诱导时间为发酵8 h时诱导;因发酵过程中木糖会被消耗,故通过多次添加木糖或敲除xyl A基因阻断木糖代谢途径保持发酵液中的木糖浓度,以稳定诱导条件。结果表明,木糖同时作为诱导剂和碳源更有利于L-组氨酸的发酵生产,为此摸索出了木糖和葡萄糖共发酵生产L-组氨酸的发酵工艺。该工艺主要控制要点为发酵8 h之后添加质量浓度为10 g/L的木糖,发酵过程中流加木糖和葡萄糖质量比为1∶5的糖溶液。最终L-组氨酸的产量可达56.5 g/L,是纯葡萄糖发酵时的2倍。
- 吴鹤云张悦蒋帅田道光谢希贤陈宁
- 关键词：L-组氨酸发酵优化混合碳源大肠杆菌
- CXCR4基因修饰骨髓间充质干细胞体外迁移实验被引量：9
- 2009年
- 构建一种高表达基质细胞衍生因子受体(CXCR4)的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),考察CXCR4对细胞定向迁移能力的影响。实验构建了pMSCV-CXCR4-IRES-GFP基因质粒,并通过逆转录病毒将其转入预先培养的MSCs中。分别采用流式细胞分析仪、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色法检测CXCR4在MSCs中的表达,并利用Transwell方法检测基质细胞衍生因子(SDF-1)对MSCs体外定向迁移的影响。流式细胞仪分析显示,转基因MSCs表面CXCR4的阳性率为46%,绿色荧光蛋白(GFP)阳性率为57%。RT-PCR进一步证实了CXCR4的表达。细胞迁移实验结果表明,CXCR4基因修饰促进了MSCs向SDF-1的定向迁移,当SDF-1浓度为50 ng/ml时,这种定向迁移能力较之对照组提高了近5倍。通过以上结果可以初步证实,MSCs表面CXCR4表达量在SDF-1/CXCR4介导的细胞迁移通路中发挥着重要作用,这为进一步研究MSCs的体内迁移和归巢提供了依据。
- 张悦欧来良程兆康贾小花高年发孔德领
- 关键词：间充质干细胞基质细胞衍生因子-1
- 谷氨酸棒杆菌人工核糖体结合位点(RBS)文库的建立与应用
- 2023年
- 核糖体结合位点(ribosome binding site,RBS)是一种重要的生物控制元件,是实现基因表达精细调控的重要工具,在微生物代谢工程和合成生物学中具有广泛的应用。谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)是一种重要的工业微生物,被广泛应用于多种氨基酸和有机酸的工业化发酵生产。然而目前,关于谷氨酸棒杆菌RBS元件文库的报道仍然较少。该研究基于谷氨酸棒杆菌RBS序列基本特征,设计构建了一个随机RBS文库。利用流式细胞分选技术和96孔板筛选技术,建立了RBS文库高通量筛选方法。通过2步筛选,构建了一个调控范围广,覆盖范围均匀的人工RBS元件文库,调控范围达到29.04倍。利用α-淀粉酶表达系统对构建的人工RBS文库进行测试和表征,结果表明人工RBS文库具有较高的稳定性和通用性。随后该研究将人工RBS文库应用于L-高丝氨酸生物合成途径的调控优化。利用不同强度RBS元件对L-高丝氨酸合成途径关键酶LysCr和Homr进行精细表达调控,获得了具有高效L-高丝氨酸合成能力的最佳组合,L-高丝氨酸产量到达12.7 g/L,比野生型菌株高丝氨酸含量提高了3.6倍。综上所述,该研究构建了一个调控范围广、稳定性高的谷氨酸棒杆菌人工RBS文库,为谷氨酸棒杆菌代谢工程改造和基因精细表达调控提供了有效的控制元件。
- 张悦张继伟吴硕徐宁徐宁刘君
- 关键词：谷氨酸棒杆菌高通量筛选
- 增强ATP供应提高大肠杆菌合成L--组氨酸
- L-组氨酸是人体的一种半必需氨基酸，广泛应用于医药、食品和饲料行业，还用于烟草制品和化妆品的生产中。目前L-组氨酸的生产以蛋白质水解法为主，但此法存在操作步骤繁琐、环境污染大、生产成本高等问题。微生物发酵法已成功应用于多...
- 张悦
- 关键词：L-组氨酸发酵工艺大肠杆菌三磷酸腺苷
- 文献传递
