焦国华
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：深圳市宝安区松岗人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CISD2抑制舌癌AW13516细胞增殖效果的实验研究
- 2015年
- 目的探讨CISD2对人舌鳞状细胞癌AW13516细胞增殖能力的影响及其相关机制。方法采用CISD2-si RNA慢病毒表达载体及空载体对照质粒感染人舌癌AW13516细胞建立SI组、NC组,并设立未感染对照(CTRL)组。蛋白质印迹法(Western blot)检测CISD2、c-myc、Bax、Bcl-2蛋白表达。采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,琼脂集落形成实验检测细胞集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,裸鼠皮下移植瘤模型检测体内增生能力。3组比较采用单因素方差分析。结果 SI组CISD2蛋白的表达量较CTRL组明显降低。SI组24、48、72 h时吸光度(A)值分别为0.258±0.013,0.291±0.022,0.342±0.025,与CTRL组比较差异具有统计学意义(t=13.26,15.84,25.33,P<0.05)。SI组细胞的琼脂集落形成数量为(6.2±0.5)个/孔,明显低于CTRL组的(56.3±2.8)个/孔,差异有统计学意义(t=22.38,P<0.05)。SI组细胞的凋亡率为(53.22±3.13)﹪,高于CTRL组(4.71±0.42)﹪,差异有统计学意义(t=35.71,P<0.05)。SI组与CTRL组比较,c-myc、Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2/Bax比率降低。裸鼠皮下移植瘤生长第30天时,SI组的肿瘤体积(231±15)mm3明显小于CTRL组的(859±42)mm3,差异有统计学意义(t=64.77,P<0.05)。结论下调CISD2后可能通过降低c-myc蛋白表达及下调Bcl-2/Bax比值等机制抑制人舌鳞状细胞癌的增殖能力。
- 焦国华阚智慧高洪丽吴贽张志光
- 关键词：舌肿瘤RNA干扰细胞增殖
- 差速贴壁法体外分离培养小型猪脂肪间质干细胞的实验研究
- 2016年
- 目的探讨差速贴壁法对小型猪脂肪间质干细胞（ADSC）提取和纯化的可行性。方法从两成软骨10月龄的中国实验用I系小型猪皮下脂肪组织获取ADSC，培养4 ~ 6 h倒置显微镜下观察，见少量细胞贴壁，立刻将含有未贴壁细胞的培养基接种到新培养瓶内继续培养，传统培养法不换培养瓶，以后均每3 d换液1次。完全培养基传至第3代MTT法绘制生长曲线，并测定两种培养法获得的细胞不同代数的贴壁时间；诱导培养基向脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞诱导并鉴定。贴壁时间、表面抗原阳性率、分化诱导染色阳性率实验数据比较采用单因素方差分析及t检验。结果采用差速贴壁培养法可分离培养出小型猪ADSC，并可除去部分贴壁的成纤维细胞、上皮细胞和脂滴，传代后培养瓶中脂滴明显减少；差速贴壁培养法获得的ADSC在贴壁时间方面较传统方法获得的ADSC短，前者传代后的贴壁时间（3.5±0.2）h较后者（5.8±0.3）h短，差异具有统计学意义（t = 12.55，P = 0.01）；两种方法获得的ADSC中CD34阳性率：差速法为（1.17±0.01）﹪，传统法为（0.99±0.03）﹪；CD44阳性率：差速法为（88.90±0.03）﹪，传统法为（89.23±0.10）﹪；CD106阳性率：差速法为（1.18±0.05）﹪，传统法为（1.56±0.06）﹪；差异均统计学意义（t = 0.12，1.23，0.37，P = 0.06，0.07，0.06）。油红O、苏丹黑B、Von kossa、茜素红、阿尔新蓝、II型胶原染色结果表明差速贴壁法获得的ADSC可分化为脂肪细胞、成骨细胞和成软骨细胞，且阳性染色率分别为（78±2）﹪、（82±6）﹪、（85±1）﹪、（83±3）﹪、（76±9）﹪、（74±1）﹪，较传统法的（68±1）﹪、（69±2）﹪、（73±0）﹪、（75±1）﹪、（69±3）﹪、（65±4）﹪高，差异具有统计学意义（t = 5.21，12.56，16.27，10.33，17.01，23.97；P = 0.02，0.03，0.01，0.01，0.00，0.00）。结
- 焦国华高洪丽吴贽张志光
- 关键词：间质干细胞细胞培养技术
- NAF1基因对舌鳞状细胞癌细胞增殖转移能力的影响被引量：3
- 2014年
- 目的使用小干扰RNA（si RNA）干扰舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中营养缺乏自噬因子1（NAF1）的表达,观察对NAF1基因的沉默效果,并测定沉默后Tca8113细胞生长增殖侵袭能力的变化。方法建立小干扰RNA（si-NAF1）组、阴性对照（si-NC）组、对照（vector）组。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和Western blotting法检测NAF1、细胞周期素D1（cyclin D1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达。MTT实验检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法观察各组细胞侵袭能力变化。结果与vector组相比,NAF1-si RNA干预Tca8113细胞后,si-NAF1组NAF1的m RNA和蛋白表达水平都明显降低（χ^2=25.65,t=-17.1,P〈0.05）,cyclin D1、MMP-2蛋白表达水平降低（tcyclin D1=-14.7,tMMP -2=-9.6,P〈0.05）,细胞增殖能力明显降低（t=-36.77,P〈0.05）,克隆形成能力明显减弱（t=-12.33,P〈0.05）,侵袭能力明显降低,si-NAF1组穿过Transwell膜的细胞少于vector组。结论通过si RNA技术降低NAF1表达可能通过降低cyclin D1水平抑制舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的增殖能力,通过影响MMP-2蛋白表达水平,抑制Tca8113细胞的侵袭能力。
- 焦国华阚智慧高洪丽张志光
- 关键词：舌肿瘤RNA干扰
