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人工养殖对虾肠道内可培养细菌数量及组成分析被引量：8: 2015年; 为深入了解人工养殖条件下养殖对虾肠道内菌群结构和携带病毒情况,应用常规细菌分离、培养与纯化,细菌16S rD NA序列分析的方法分析了我国山东、江苏、韩国不同养殖场的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）和中国明对虾（Fenneorpenaeus chinensis）肠道内可培养细菌的总数、优势菌组成和数量,并用巢式聚合酶链式反应（Nested polymerase chain reaction,Nested PCR）方法检测对虾携带病毒情况。结果显示各批次凡纳滨对虾和中国明对虾样品肠道内的可培养细菌总数在105~109cfu/g之间,并对分离出的优势菌进行属（种）鉴定,结果表明这些优势菌分别属于乳球菌属（Lactococcus sp.）、弧菌属（Vibrio sp.）、芽孢杆菌属（Bacillus sp.）、发光杆菌属（Photobacterium sp.）、希瓦氏菌属（Shewanella sp.）、节杆菌属（Arthrobacter sp.）、微小杆菌属（Microbacterium sp.）。凡纳滨对虾和中国明对虾均有样品检测为WSSV阳性,6批次WSSV阳性对虾样品中均检测到弧菌属细菌,占可培养细菌比例为33%~93.58%。2批次WSSV阳性对虾样品中检测到希瓦氏菌属细菌,占可培养细菌比例为21.67%~34.21%。4批次WSSV阳性对虾样品中检测到发光杆菌属细菌,占可培养细菌比例为21.03%~66.83%。; 张盛静赵小金宋晓玲张晓静万晓媛黄倢; 关键词：对虾肠道可培养细菌优势菌 WSSV

饲料中补充蜡样芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长及其肠道微生物组成的影响被引量：23: 2017年; 为了研究外源补充蜡样芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长及对其肠道微生物组成的影响,以基础饲料为空白组,在基础饲料中添加蜡样芽孢杆菌活菌作为实验组(活菌含量为108 CFU/g),每组4个平行,在养殖场对凡纳滨对虾自幼苗至成虾进行一个完整养殖周期的养殖实验。选取养殖场中8个光照、位置等条件基本相同的养殖池分为2组,空白组投喂基础饲料,实验组投喂免疫饲料,养殖周期95 d。期间在第45、52、59、66、73天采样,称重并计算生长速率,并取其肠道内容物提取DNA,用16S r DNA序列V4区高通量测序方法检测对虾肠道内微生物群落的结构及变化情况。结果显示:(1)投喂免疫饲料的实验组对虾生长速度比空白组平均快15.2%。(2)健康的凡纳滨对虾肠道微生物以变形菌门和拟杆菌门含量高,厚壁菌门、疣微菌门、浮霉菌门、放线菌门含量较低。(3)空白组变形菌门平均含量(68.30%),明显高于实验组平均含量(57.94%);空白组拟杆菌门平均含量(23.58%)明显低于实验组平均含量(30.06%)。(4)变形菌门中以弧菌属、Anaerospora、小红卵菌属为主,空白组弧菌属平均占总含量的5.40%,实验组平均占总含量的1.94%;拟杆菌门中以异养硝化菌属、粘着杆菌属为主,实验组异养硝化菌属平均占总含量的8.12%,空白组平均占含量的5.56%。研究表明,饲料中添加蜡样芽胞杆菌投喂凡纳滨对虾后可改变对虾肠道的微生物组成,提高对虾生长速度。; 唐杨刘文亮宋晓玲张晓静张盛静黄倢; 关键词：凡纳滨对虾蜡样芽孢杆菌肠道微生物高通量测序

牡蛎疱疹病毒魁蚶株交叉引物等温扩增检测方法的建立及初步应用被引量：7: 2015年; 为建立牡蛎疱疹病毒魁蚶株快速、灵敏、准确和操作简便的检测方法,实验根据已测序完成的Os HV-1-SB全基因组序列,选择其保守区域,建立了交叉引物等温扩增检测方法,并对反应温度、d NTPs、Mg2+浓度和反应时间进行了优化。结果显示,最佳温度为63℃,反应时间为60 min,d NTPs浓度为1.4 mmol/L,Mg2+浓度为6 mmol/L。该方法检测灵敏度为30拷贝的质粒DNA,并且特异性较强,与贝类常见病原急性病毒性坏死病毒、鲍鱼疱疹病毒、派琴虫、包纳米虫、马尔泰虫以及对虾白斑综合征病毒和副溶血弧菌均无交叉反应。使用实验建立的CPA检测方法对2012年分别采自韩国庆尚南道、山东长岛、辽宁大连共计22份Os HV-1-SB感染情况未知的魁蚶样品进行了检测。研究表明,实验所建立的Os HV-1-SB的CPA检测方法简单、快速、灵敏且特异性强。由于其检测结果可通过简单离心或者向反应管中加入核酸荧光染料Gene FinderTM进行肉眼观察,所以可以在沿海贝类养殖厂及条件简陋的实验室使用,具有较好的应用前景。; 赵小金张盛静白昌明岳志芹王崇明尹伟力蔡生力黄倢; 关键词：魁蚶

饲料中添加益生菌对凡纳滨对虾抗感染和5种免疫基因表达的影响被引量：14: 2015年; 为研究饲料中添加益生菌对凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染能力和非特异性免疫基因表达水平的影响,以初体质量为（6.95±1.20）g的凡纳滨对虾为研究对象,在室内养殖箱进行3周的养殖实验和2周的副溶血弧菌人工感染实验;其中,对照组每日投喂普通商品饲料,实验组每日投喂在普通商品饲料中添加地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌/枯草芽孢杆菌（1∶1）配制成的3组实验饲料,实验饲料中益生菌的终浓度为107cfu/g。并采用实时荧光定量RT-PCR方法,对保护率最高的地衣芽孢杆菌/枯草芽孢杆菌实验组进行凡纳滨对虾相关免疫基因表达水平的分析。实验结果表明,在饲料中添加单一益生菌或复合益生菌均可显著提高对虾抗副溶血弧菌感染的能力（P〈0.05）,且复合益生菌的保护效果更佳,其相对免疫保护率为31.11%。感染副溶血弧菌后,地衣芽孢杆菌＋枯草芽孢杆菌实验组凡纳滨对虾血淋巴中的先天免疫缺陷基因（innate immune deficiency gene,IMD）、对虾素3a分子（penaiedin3a）、酚氧化酶原（prophenoloxidase,pro PO）、溶菌酶（Lysozyme,LZM）和甲壳素Crustin的mRNA的相对表达量均显著上调,且分别在18~24 h达到最大值。实验结果提示：饲料中添加芽孢杆菌可有效提高凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染的能力,这种能力的提高可能是通过增加抗病相关基因的表达量实现的。; 张盛静宋晓玲赵小金黄倢; 关键词：凡纳滨对虾益生菌抗病力免疫基因副溶血弧菌

饲料添加益生菌对凡纳滨对虾肠道菌群、Toll受体及溶菌酶基因表达及抗感染的影响被引量：17: 2016年; 以初体重为（7.20±1.38）g的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）为研究对象,在室内养殖箱进行3周的养殖实验和2周的哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）人工感染实验,其中对照组每日投喂普通商品饲料,实验组每日投喂在普通商品饲料中添加地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）1.0×10^8 CFU/m L配制成的实验饲料。目的是研究饲料中添加益生菌对凡纳滨对虾肠道菌群、Toll受体及溶菌酶基因表达量和抗哈维氏弧菌能力的影响。实验结果表明,在饲料中添加地衣芽孢杆菌可显著提高对虾抗哈维氏弧菌感染的能力,其相对免疫保护率为22.22%。与对照组相比,实验组可显著降低对虾肠道内弧菌数量（P〈0.05）。感染哈维氏弧菌后,实验组溶菌酶（lysozyme,LZM）m RNA的相对表达量在12 h、18 h、24 h、36 h、48 h、72 h均显著高于对照组（P〈0.05）。实验组感染哈维氏弧菌后在6 h、12 h、18 h、24 h、36 h、48 h、72 h、7 d的Toll受体（Toll receptor）m RNA的相对表达量均显著高于对照组（P〈0.05）。实验结果提示：饲料中添加地衣芽孢杆菌可有效提高对虾抗哈维氏弧菌感染的能力,这种能力的提高可能是通过降低对虾肠道内的弧菌量,并提高抗病相关基因的表达量实现的。; 张盛静赵小金宋晓玲王春迪刘文亮黄倢; 关键词：凡纳滨对虾益生菌免疫基因哈维氏弧菌

养殖水体中添加蜡样芽孢杆菌PC465对凡纳滨对虾抗病力的影响被引量：17: 2016年; 将蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）PC465添加到凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）养殖水体中至终浓度分别为10^4、10^5和10^6CFU／mL，以无益生菌添加的养殖组为对照组，定期检测实验对虾肠道和养殖水体中的细菌总数、弧菌总数以及水体中氨氮含量和亚硝酸氮含量。实验结果表明，水体中添加益生菌能降低凡纳滨对虾肠道内细菌数量，且与对照组相比差异显著（P〈0．05）；高浓度的益生菌处理组可以明显降低养殖水体内弧菌数量（P〈0．05），但是益生菌并没有显著影响水体中的氨氮含量和亚硝酸氮含量。养殖4周后进行WSSV投喂感染实验，感染实验表明，实验组H组（益生菌浓度为10^6CFU／mL）和M组（益生菌浓度为10^5CFU／mL）凡纳滨对虾的累计死亡率分别为63．9％和74．6％，显著低于对照组100％的累计死亡率（P〈O．05）。感染实验期间采用荧光定量PCR方法测定了凡纳滨对虾3种免疫相关基因的表达情况，统计数据显示，益生菌处理组的脂多糖-β-1，3-葡聚糖结合蛋白（1ipopolysaccharide-β-1，3-glucan-binding protein，LGBP）、3-1，3-葡聚糖结合蛋白-脂蛋白（beta-1，3-glucan．bindingprotein-lipoprotein，pGBP-HDL）、热激蛋白70（heatshockproteins，Hsp70）mRNA的表达量在WSSV感染后呈显著上调趋势。实验结果提示，水体中添加蜡样芽孢杆菌PC465可以提高凡纳滨对虾抗WSSV感染能力，其作用机制可能是降低对虾肠道和水体中的细菌和弧菌数量，或调节免疫相关基因的表达水平。; 王春迪宋晓玲张晓静张盛静孙新颖刘宝彬高文辉黄倢; 关键词：凡纳滨对虾蜡样芽孢杆菌 WSSV 肠道菌群抗病力

多抗间接ELISA方法的建立及其在海洋细菌快速检测中的应用被引量：5: 2015年; 为了从对虾体内分离出的菌株中快速筛选出蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌,将蜡样芽孢杆菌与溶藻胶弧菌作为抗原,免疫SPF新西兰大白兔,获得免疫血清,效价均高于1:2000。将免疫兔血清作为一抗,HRP-羊抗兔血清作为二抗,建立了蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌快速检测的间接ELISA方法。此方法中,兔抗血清最佳稀释度为1:10000,菌液最佳包被浓度为106 CFU/ml;HRP-羊抗兔血清最佳稀释浓度为1:1000,可检测细菌最低浓度为104 CFU/ml。抗蜡样芽孢杆菌血清与苏云金芽孢杆菌有交叉反应,抗溶藻胶弧菌血清与其亲缘相近菌株无交叉反应,具有较强的特异性。2012年和2013年,分别从斑节对虾、中国对虾、凡纳滨对虾等9批样本中分离纯化到109株海洋细菌,利用建立的多抗间接ELISA方法对其中部分菌株进行快速检测,共检测出6株溶藻胶弧菌,未检测出蜡样芽孢杆菌。; 职通瑞宋晓玲张晓静张盛静黄倢; 关键词：间接ELISA 蜡样芽孢杆菌对虾

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张盛静

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