王蒙蒙
- 作品数：11 被引量：31H指数：4
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- 高糖诱导的Erk1/2激活调节人卵巢颗粒细胞周期的表达研究
- 相丽王永峰王蒙蒙李昕马璐王燕蓉裴秀英马会明徐仙
- BMSCs移植对大鼠卵巢早衰的修复及TGF-βRⅡ表达的影响被引量：7
- 2017年
- 目的通过移植鼠源骨髓间充质干细胞(BMSCs)对SD大鼠卵巢早衰(POF)进行治疗,探讨BMSCs移植对卵巢中转化生长因子β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)表达的影响。方法将正常动情周期的SD雌性大鼠48只随机分为对照组、模型组(环磷酰胺致POF)、造模后自然恢复组和BMSCs移植组(尾静脉移植)。分别于建模后、BMSCs移植后取各组卵巢组织,VG染色和HE染色,光镜下观察卵巢组织形态和计数各组卵泡数。免疫组织化学法和Western blot检测各组卵巢组织TGF-βRⅡ的表达情况。结果 HE染色可见对照组有初级卵泡、次级卵泡和成熟卵泡;模型组存在闭锁卵泡,卵巢组织纤维化;自然恢复组可见闭锁卵泡和初级卵泡;BMSCs移植组可见原始卵泡、次级卵泡。BMSC移植组各级卵泡计数均高于模型组和自然恢复组(P<0.05),与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化学可见TGF-βRⅡ在模型组与自然恢复组的卵巢组织呈弱表达或未表达,BMSCs移植组卵巢组织TGF-βRⅡ阳性表达增强,Western blot检测也显示TGF-βRⅡ表达高于模型组和自然恢复组(P<0.05),与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BMSCs移植可改善由化疗导致卵巢早衰的功能部分恢复,TGF-βRⅡ可能参与了移植BMSCs修复化疗后POF的过程。
- 王永峰马会明相丽梁蕾王蒙蒙王燕蓉裴秀英徐仙
- 关键词：SD大鼠卵巢早衰骨髓间充质干细胞移植
- α-硫辛酸对小鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤和凋亡的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨α-硫辛酸对小鼠颗粒细胞培养过程中抗氧化水平和抗凋亡水平的影响。方法收集经PMSG处理的小鼠卵巢颗粒细胞,经原代培养24h后,添加终浓度为100μmol/L的α-硫辛酸继续培养24h,测定氧化水平SOD、MDA和GSH-Px参数,评价抗氧化能力,采用Trizol法提取各组细胞的RNA,进行RT-PCR法检测α-硫辛酸对caspase-3和caspase-9基因的表达情况的影响,同时利用细胞免疫荧光和ELISA法检测caspase-3和caspase-9蛋白表达,并分析α-硫辛酸降低细胞凋亡的作用。结果分离培养的小鼠卵巢颗粒细胞α-硫辛酸添加后,SOD和GSH-Px活性升高,MDA含量降低(P<0.05);经过RT-PCR扩增技术获得长度为180bp的特异性caspase-3产物,获得长度为152bp的特异性caspase-9产物,α-硫辛酸添加可显著性降低caspase-3和caspase-9mRNA的表达(P<0.05);免疫荧光细胞化学染色显示颗粒细胞caspase-3和caspase-9蛋白阳性染色定位于细胞胞质,分别呈现绿色荧光和红色荧光,细胞核呈蓝色荧光;ELISA结果显示α-硫辛酸添加后caspase-3和caspase-9酶活性显著下调(P<0.05)。结论小鼠颗粒细胞培养过程中添加α-硫辛酸可明显改变细胞抗氧化能力,对卵巢颗粒细胞培养过程中的氧化应激诱导的细胞凋亡起到一定的保护作用。
- 马会明张永芳王蒙蒙李昕王永峰田洪成裴秀英王燕蓉
- 关键词：Α-硫辛酸氧化应激卵巢颗粒细胞小鼠
- 单次热应激对小鼠睾丸增殖细胞的影响被引量：2
- 2015年
- 目的明确单次热应激对小鼠睾丸增殖细胞的影响。方法 6周龄雄性C57小鼠36只,随机分为热处理组和对照组。小鼠热处理组单次43℃水浴,干预15 min,于1、7和14 d取材,HE染色观察睾丸结构形态,免疫组织化学染色检测增殖细胞定位及变化,Western Blot检测Ki67蛋白表达,并进行统计学分析。结果应激处理组生精小管排列疏松,曲细精管中细胞数量明显减少甚至消失,细胞散落在曲细精管中;免疫组化可见,增殖细胞呈现动态变化过程,单次热应激处理后1 d增殖细胞显著减少,第7、14天增殖细胞数量开始慢慢恢复;Western Blot可见KI-67表达量在热应激处理后7 d表达量显著降低,第14天表达量慢慢恢复,且各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠睾丸经43℃水浴单次热应激15 min后,增殖细胞的动态恢复是后期精子生成的结构基础。
- 田洪成马文智马会明蒲静杨晓霞张永芳王永峰王蒙蒙李昕马良宏裴秀英王燕蓉
- 关键词：热应激睾丸增殖细胞
- 生长分化因子-9下调对小鼠卵巢颗粒细胞增殖能力的影响被引量：5
- 2016年
- 目的探讨生长分化因子-9(GDF9)对小鼠卵巢颗粒细胞增殖能力基因周期蛋白A(cyclin A)、周期蛋白D1(cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶抑制因子27(p27kip1)表达的影响。方法利用CCK-8检测法检测细胞的增殖能力;使用流式细胞术、Real-time PCR和Western blot法验证GDF9 siRNA的干扰效率;采用Real-time PCR和Western blot法检测细胞增殖cyclin A、cyclin D1和p27kip1 mRNA和蛋白表达情况。结果 GDF9 siRNA显著抑制颗粒细胞增殖活力,其中72 h抑制最明显(P<0.05);Real-time PCR和Western blot法检测结果显示GDF9 siRNA显著下调小鼠卵巢颗粒细胞中GDF9 mRNA及蛋白的表达(P<0.01);Realtime PCR法检测结果显示,细胞cyclin A、cyclin D1 mRNA表达降低,p27kip1 mRNA表达增强;Western blot法结果显示,GDF9 siRNA可促进细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p27kip1的表达,同时下调G2/M期调控蛋白cyclin A、cyclin D1的表达。结论靶向抑制小鼠卵巢颗粒细胞中GDF9的表达,下调细胞cyclin A、cyclin D1的表达,上调P27 kip1的表达,显著抑制细胞的增殖。
- 马会明张永芳王蒙蒙李昀伽蒲静于佳王燕蓉裴秀英徐仙
- 关键词：GDF9SIRNA卵巢颗粒细胞小鼠
- 小鼠Akt基因真核表达载体的构建及鉴定
- 2018年
- 目的构建含有小鼠Akt基因以及绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pDoubleEx-EGFPAkt1。方法以小鼠卵巢RNA为模板,通过RT-PCR扩增Akt,并将其克隆到pDoubleEx-EGFP载体中。通过酶切和测序鉴定,构建真核表达载体pDoubleEx-EGFP-Akt1。之后转染人卵巢癌上皮细胞SKOV-3。结果经测序鉴定,构建的Akt基因序列与野生型Akt序列完全相符。将pDoubleEx-EGFP-Akt1转染进入人卵巢癌上皮细胞SKOV-3,观察到稳定转染后的细胞有明显绿色荧光蛋白表达。结论成功构建含有小鼠Akt基因的真核表达载体pDoubleEx-EGFP-Akt1,为进一步研究Akt基因的功能提供初步的实验基础。
- 蒲静俞晓丽马会明李昕王蒙蒙
- 关键词：真核表达载体转染
- 雌激素对卵巢颗粒细胞雌激素受体-β和转录因子叉头蛋白3表达的影响被引量：6
- 2016年
- 目的探讨雌激素(E2)对雌激素受体-β(ER-β)与转录因子叉头蛋白3(FoxO3)的表达及其对卵巢颗粒细胞增殖与凋亡的影响。方法利用添加1μmol/L的E2或100 nmol/L ICI182.780的TCM199培养基体外培养卵巢颗粒细胞;采用WST比色法检测不同培养条件下卵巢颗粒细胞的增殖;RT-PCR和Real-time PCR检测ER-β与FoxO3 mRNA的表达,采用细胞免疫荧光和Western blotting检测ER-β与FoxO3的表达。结果 E2能促进卵巢颗粒细胞增殖,而ICI182.780抑制卵巢颗粒细胞增殖;RT-PCR扩增结果与理论值符合,Real-time PCR结果显示,ICI182.780与E2比较,ER-βmRNA表达下调,FoxO3 mRNA表达上调(P<0.05);Western blotting法结果显示,ER-β和FoxO3蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05),灰度值分析显示添加E2中ER-β蛋白表达升高,FoxO3蛋白下降(P<0.05),添加ICI182.780中的ER-β表达下调,FoxO3表达上调,与E2比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 E2可提高ER-β的表达,降低FoxO3的表达,影响卵巢颗粒细胞的增殖与凋亡。
- 马会明张永芳王蒙蒙李昕王永峰田洪成胡蓉王燕蓉裴秀英徐仙
- 关键词：雌激素雌激素受体-Β卵巢颗粒细胞
- 二甲双胍通过抑制核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6)调节体外人颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达被引量：5
- 2015年
- 目的:探讨二甲双胍对核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6k)及胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其ser307位点磷酸化表达的影响。方法:利用0.1 mmol/L二甲双胍体外连续作用多囊卵巢综合症(PCOS)患者黄素化颗粒细胞24 h为实验组,设未加二甲双胍培养的颗粒细胞为对照组。通过RT-PCR和Real-time PCR检测P70S6k和IRS-1的表达,细胞免疫荧光化学和Western blotting的方法检测P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白的表达。结果:Real-time PCR结果显示实验组P70S6k和IRS-1m RNA水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光化学检测IRS-1和p-ser307-IRS-1蛋白在颗粒细胞胞质表达,P70S6k和p-thr389-P70S6k蛋白在细胞核表达。Western blotting法结果显示二甲双胍作用24 h前、后卵巢颗粒细胞P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达有统计学差异(P<0.05),灰度值分析显示添加二甲双胍组P70S6k、p-thr389-P70S6k蛋白表达显著升高,IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论:二甲双胍可抑制人颗粒细胞P70S6k的表达,并通过Akt/P70S6k/IRS途径调节IRS-1的表达,从而增加颗粒细胞胰岛素的敏感性。
- 张永芳王蒙蒙李昕王永峰裴秀英王燕蓉马会明徐仙
- 重组蛋白GDF-9对卵巢黄素化颗粒细胞增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2016年
- 目的探讨重组生长分化因子-9(GDF-9)对人卵巢黄素化颗粒细胞周期及细胞增殖、凋亡的影响。方法收集因输卵管和(或)男性因素而接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗患者的卵泡液进行密度梯度离心,收集黄素化颗粒细胞,接种于M199培养基进行原代培养,实验组在M199培养基中添加100ng·m L-1GDF-9因子,对照组未添加GDF-9因子;培养48h后,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖情况;用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡;Western blot法检测裂解的半胱氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase-3)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及其磷酸化表达水平。结果原代培养的人黄素化颗粒细胞在培养第2~4天时处于分裂增殖高峰期,贴壁培养24h再添加GDF-9因子作用48h后,细胞周期检测结果显示,GDF-9使颗粒细胞周期表现为GO/Gl期的比例明显减少,S+G2/M期的比例明显增高(P<0.05)。细胞凋亡检测结果显示,颗粒细胞凋亡率显著减少(P<0.05)。Western blot检测发现,添加GDF-9使cleaved-caspase-3蛋白的相对表达量降低,磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的相对表达量显著增高(P<0.05)。结论重组GDF-9因子可促进颗粒细胞增殖,抑制颗粒细胞凋亡,其机制可能与活化ERK和抑制cleaved-caspase-3途径、调节细胞周期有关。
- 马会明李昕王蒙蒙王永峰田洪成王飞苗王燕蓉裴秀英
- 关键词：生长分化因子-9细胞外信号调节激酶1/2颗粒细胞卵巢
- 适用于各种细胞培养的全自动调速换液装置
- 本实用新型公开了一种适用于各种细胞培养的全自动调速换液装置，包括立式基座板，所述立式基座板上固定安装有调速控制器、细胞培养液箱、两个液体吸取装置、新鲜培养液瓶和废液收集瓶，所述调速控制器同时与两个所述液体吸取装置电连接，...
- 马会明陈冬梅裴秀英王燕蓉徐仙胡蓉王飞苗马文智杨延周俞晓丽于佳蒲静孙苗王蒙蒙李昕王永峰马璐田洪成相丽张宁曹秀琴
- 文献传递
