顾玲玲
- 作品数：18 被引量：35H指数：3
- 供职机构：江苏农牧科技职业学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目江苏省“青蓝工程”基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 番鸭细小病毒样颗粒的制备与鉴定被引量：4
- 2019年
- 为在昆虫细胞中表达番鸭细小病毒主要结构蛋白VP3,并探讨重组蛋白VP3能否在昆虫细胞中自动组装成病毒样颗粒,高保真扩增VP3基因,克隆入杆状病毒转移载体pFastBac1中,获得重组转移质粒pFB-VP3,转化DH10Bac感受态细胞,经抗性、蓝白斑筛选及PCR鉴定,得到重组Bacmid DNA。将其转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒rBac-VP3,利用SDS-PAGE、Western-blot、间接免疫荧光试验对重组蛋白的表达情况进行检测,负染电镜观察病毒样颗粒,并通过Western-blot对病毒样颗粒进行鉴定。SDS-PAGE和Western-blot结果表明重组蛋白大小正确。间接免疫荧光试验结果显示,重组蛋白获得了成功表达。利用负染电镜可观察到直径约20 nm的典型二十面体病毒样颗粒。Western-blot结果显示该病毒样颗粒由VP3蛋白组成。本研究首次成功利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统制备了番鸭细小病毒样颗粒,为番鸭细小病毒病新型基因工程疫苗的研制奠定了基础。
- 王安平吴萌吴海涛顾玲玲朱善元
- 关键词：番鸭细小病毒病毒样颗粒
- Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒3C基因在昆虫细胞的表达与检测
- 2017年
- 利用杆状病毒表达系统进行Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒蛋白水解酶3C基因的表达研究。首先通过PCR方法扩增出3C基因,亚克隆至杆状病毒转移载体p Fast Bac1中,获得重组转座载体p FB-3C,随后将该重组质粒转化感受态细胞DH10Bac进行同源重组,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后,获得重组杆状病毒穿梭质粒r Bacmid-3C,将其在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒r Bac-3C,并进行重组蛋白表达的检测。间接免疫荧光结果,鸭抗全病毒阳性血清能够与重组蛋白发生特异性结合。结果表明,DHAV-Ⅰ3C蛋白在sf9昆虫细胞中获得了成功表达。
- 吴植顾玲玲朱善元王安平
- 关键词：C基因昆虫细胞
- 新型鹅星状病毒ORF2基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2021年
- 以新型鹅星状病毒(goose astrovirus, GAstV)ORF2基因为序列设计1对特异性引物,利用PCR方法进行扩增,将其克隆到原核表达载体pET-30a中,转化DH5α感受态细胞,经酶切鉴定及测序后,获得重组质粒pET30a-ORF2。随后转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western blot检测重组蛋白。将鉴定正确的重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗鹅星状病毒衣壳蛋白的多克隆抗体。结果:成功获得ORF2基因,构建的原核表达重组质粒成功表达预期的重组蛋白,大小约84 kDa,且均能与His单抗和鹅阳性血清特异反应。制备的多克隆抗体,Western blot检测能与重组蛋白发生特异性反应,间接免疫荧光试验(IFA)检测也能与新型鹅星状病毒发生特异性反应。本试验结果表明,原核表达的新型鹅星状病毒结构蛋白ORF2及制备的多抗均具有良好的免疫原性和反应原性,为新型鹅星状病毒检测方法的建立及ORF2基因功能研究奠定了基础。
- 张硕谢军顾玲玲方馨慧嵇珊珊陶静朱善元陈丽王安平
- 关键词：ORF2基因原核表达多克隆抗体
- 鸭坦布苏病毒E蛋白的原核表达
- 2018年
- 在大肠杆菌中表达鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)奉贤株的主要结构蛋白E。本研究利用RT-PCR方法扩增出E基因,将其克隆至原核表达载体p ET-30a,构建重组质粒p ET-E。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导培养下重组蛋白成功获得了表达。SDS-PAGE结果显示,表达的重组蛋白分子量为63 ku。Western blot分析表明,该蛋白能与抗His标签的鼠单克隆抗体发生特异性反应。以上结果表明,在大肠杆菌中成功表达了DTMUV主要结构蛋白E。
- 顾玲玲朱善元王安平
- 关键词：E基因原核表达
- 重组禽腺联病毒介导的人溶菌酶在蛋清中的表达
- 2018年
- 为在鸡蛋清中表达人溶菌酶(hLYZ),将含有hLYZ输卵管特异表达盒的重组禽腺联病毒以每只鸡2×10^(11)经翅静脉注射正常产蛋母鸡,收集蛋清对重组蛋白的表达情况进行检测。RT-PCR结果显示,hLYZ只在输卵管部位表达,Western blot结果显示重组蛋白大小正确,抑菌活性表明注射重组病毒后的蛋清的抑菌活性明显优于正常蛋清的。动态表达水平检测结果显示,注射病毒后第1周即可以检测到重组hLYZ的表达,第5周时表达量最高,达68.3μg/mL,表达时间持续3个月之久。以上结果表明,重组禽腺联病毒能介导人溶菌酶在蛋清中的高效、长时表达,为人溶菌酶的开发应用提供了新途径。
- 吴植朱善元顾玲玲张继玲吴萌崔潇婷王安平
- 关键词：人溶菌酶蛋清
- 龙胆草及其提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的研究被引量：8
- 2019年
- 为研究龙胆草水提取物、龙胆草总黄酮、龙胆草总苷体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用,本试验建立Marc-145细胞模型,在研究其对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上,结合细胞病变形态观察和MTT法,设立药物组、利巴韦林阳性对照组、病毒对照组和细胞对照组,对病毒进行阻断、抑制和直接灭活3种作用方式的测定。结果显示,龙胆草水提取物、龙胆草总黄酮、龙胆草总苷和利巴韦林的最大安全浓度分别为6.250、0.020、0.630和0.016 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中,龙胆草水提取物对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为43.1%、57.4%和56.4%,均低于阳性对照利巴韦林,且各作用方式下细胞均发生了明显病变。龙胆草总黄酮对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为66.1%、41.1%和42.7%,其抑制作用和直接灭活作用的抑制率均低于阳性对照利巴韦林,阻断作用下细胞轻微病变。龙胆草总苷对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为33.4%、78.2%和81.9%,其抑制和直接灭活作用较强,远高于阳性对照利巴韦林,且在这两种作用方式下细胞基本保持单层完好。综合3种作用方式,3种龙胆草提取物中龙胆草总苷抗PRRSV的效果最好,其次是龙胆草水提取物和龙胆草总黄酮。
- 刘云朱善元朱善元龚祝南秦枫顾玲玲
- 关键词：细胞病变抗病毒活性龙胆草
- 环介导等温扩增技术的研究进展被引量：2
- 2015年
- 环介导等温扩增(LAMP)技术是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有高特异性、高灵敏度、简便快捷、成本低等特点,受到越来越多兽医工作者的关注。目前,该方法已被广泛应用于各种病原微生物的检测。文章对LAMP技术的原理、方法、应用等方面进行了简单论述,最后指出LAMP技术目前还存在一些不足,并对其发展前景进行了展望。
- 胡成成大荣赵方余树培蔡树东顾玲玲朱善元
- 关键词：分子生物学动物疫病病原微生物
- 一种表达鸭肝炎病毒VP1基因的重组禽腺联病毒活载体疫苗及其制备方法和应用
- 本发明提供了一种表达鸭肝炎病毒VP1基因的重组禽腺联病毒活载体疫苗及其制备方法和应用。该疫苗由DHAV‑1主要保护性抗原基因VP1和重组禽腺联病毒载体rAAAV组成，所述VP1是DHAV的致病决定基因。本发明的疫苗操作简...
- 王安平朱善元顾玲玲吴双郭长明秦枫张继玲吴萌
- 文献传递
- 环介导等温扩增技术及其在动物疫病检测中的应用被引量：2
- 2015年
- 环介导等温扩增(LAMP)是一门新兴的分子生物学检测技术,因其具有高特异性、高灵敏度、简便快捷、成本低廉等特点,受到越来越多兽医工作者的关注。目前,该方法已经广泛应用于各种病原微生物的检测。本文就环介导等温扩增技术的原理、方法、应用等方面进行简述,最后指出LAMP当前存在的一些不足之处,并对其发展前景进行了展望,以期为其临床应用提供理论依据。
- 胡成成大荣余树培赵方苏玲玲蔡树东顾玲玲王永娟
- 关键词：动物疫病
- Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2017年
- 根据已经发表的Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因序列,设计1对特异性引物(上下游分别插入Bam H I和Sac I酶切位点),利用PCR技术扩增出VP1基因,经Bam H I和Sac I双酶切后,将其克隆至原核表达载体p ET-32a上,获得重组表达质粒p ET-VP1。重组质粒转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),重组蛋白经IPTG诱导成功表达。将重组蛋白切胶免疫6周龄的BALB/c小鼠,3次免疫后采血,制备DHV-Ⅰ的多克隆抗体。SDS-PAGE结果显示,成功表达出的重组蛋白分子量约为46 000。Western-blotting分析结果表明,该重组蛋白可与His组氨酸鼠单克隆抗体发生特异性反应,Western-blotting检测抗鼠DHV多抗的结果显示,DHV多抗能与目的蛋白发生特异性反应。以上结果表明,DHV的VP1蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的DHV多抗能用于VP1蛋白表达的检测。
- 顾玲玲朱善元成大荣左伟勇洪伟鸣蔡树东王安平
- 关键词：VP1基因原核表达多克隆抗体
