张少妮
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺炎链球菌 ciaH 基因与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性研究被引量：6
- 2015年
- 目的：构建肺炎链球菌ciaH基因敲除（ΔciaH）突变株，了解肺炎链球菌二元信号系统CiaH／CiaR中ciaH基因与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性。方法采用PCR 扩增肺炎链球菌ATCC6306株ciaH基因片段，T-A克隆后测序。构建用于敲除ciaH基因的自杀质粒pEVP3ciaH ，CaCl2法将其转化入肺炎链球菌ATCC6306株，通过同源重组、插入失活及氯霉素筛选获得肺炎链球菌ATCC6306株ciaH基因敲除突变株ΔciaH。采用PCR、测序及激光共聚焦显微镜法对ΔciaH突变株进行鉴定。采用二倍琼脂稀释法测定并比较青霉素G（ PCN）或头孢噻肟（ CTX）对ΔciaH突变株和野生株最低抑菌浓度（ MIC）及其差异。采用实时荧光定量RT-PCR（ qRT-PCR）检测1／4 MIC PCN或CTX作用前后ciaH-mRNA水平变化。结果 PCR和测序结果显示，所构建的ΔciaH突变株染色体DNA中ciaH基因被插入失活；免疫荧光法检测结果显示，ΔciaH突变株不表达CiaH蛋白。 PCN和CTX对ΔciaH突变株MIC分别为32μg／ml 和64μg／ml，明显高于野生株的0．06μg／ml 和1μg／ml （ P＜0．01）。1／4 MIC PCN或CTX作用后，肺炎链球菌ciaH-mRNA水平显著升高（P＜0．01）。结论肺炎链球菌CiaH／CiaR二元信号系统中CiaH与其对β-内酰胺类抗生素耐药性有关。
- 张少妮孙颜红楼永良严杰孙爱华
- 关键词：肺炎链球菌Β-内酰胺类抗生素耐药性
- 肺炎链球菌临床菌株PBPs突变及表达水平与耐药相关性研究
- 背景:肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是常见人类致病菌，感染后可引起肺炎、中耳炎、脑膜炎等疾病。近年来，肺炎链球菌临床菌株耐药率不断上升，导致肺炎链球菌感染性疾病的发病率逐年升高。临床上主要...
- 张少妮
- 关键词：肺炎链球菌Β-内酰胺类抗生素血清分型青霉素结合蛋白
- 文献传递
- 人乙酰肝素酶的原核表达及重组表达产物的免疫原性鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的重组并原核表达人乙酰肝素酶(HPA),并对重组产物r HPA进行免疫原性鉴定,获得足够的乙酰肝素酶为其功能研究奠定基础。方法利用包含HPA全长序列质粒为模板,扩增肝素酶c DNA片段,将其插入表达载体p ET42a,转化到大肠杆菌BL21DE3中,0.5 mmol/L的IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测目的重组蛋白表达情况,NiNTA亲和层析法提纯r HPA,Western Blot和ELISA检测r HPA的免疫原性。结果成功构建了人乙酰肝素酶原核表达系统,r HPA表达量为细菌总蛋白的23.4%,SDS-PAGE显示提纯后的r HPA为单一的蛋白条带。鼠抗人HPA能有效识别r HPA。结论所构建的人乙酰肝素酶原核表达系统能高效表达r HPA,表达的产物有良好的免疫原性。
- 陈士华褚美芬张少妮孙爱华
- 关键词：乙酰肝素酶免疫原性
- 肺炎链球菌phpP基因重组表达及其产物PP2C型磷酸酶活性的研究被引量：2
- 2014年
- 目的：构建肺炎链球菌StkP／PhpP信号偶联中磷酸酶编码基因phpP原核表达系统，了解表达产物rPhpP磷酸酶活性及类型。方法采用PCR扩增肺炎链球菌ATCC6306株phpP基因并测序。采用常规基因工程技术构建phpP基因原核表达系统。采用SDS-PAGE及凝胶图像分析系统检查rPhpP表达情况及其可溶性，Ni-NTA亲和层析法提纯rPhpP。实时荧光定量RT-PCR检测亚致死量青霉素和头孢噻肟药物作用后phpP基因转录水平变化。采用专业生物信息学软件分析phpP基因序列中磷酸酶功能结构域及其类型。采用丝／苏氨酸磷酸酶检测试剂盒检测rPhpP水解PP2C型磷酸酶活性并测定其酶动力学参数。结果克隆的phpP基因序列与GenBank报道序列完全相同。所构建的phpP基因原核表达系统表达可溶性rPhpP。亚致死量青霉素和头孢噻肟药物作用后phpP-mRNA水平升高。 phpP基因序列中含有PP2Cc磷酸酶结构功能域。提纯的rPhpP能水解PP2C型磷酸酶底物磷酸肽[RRA（pT）VA]且活性随rPhpP浓度增加而升高，其Km 和Kcat值分别为277．35μmol／L和0．71 S－1。结论肺炎链球菌phpP基因表达产物为PP2C型磷酸酶，亚致死量青霉素和头孢噻肟可诱导phpP基因表达上调。
- 孙颜红张少妮楼永良严杰孙爱华
- 关键词：肺炎链球菌Β-内酰胺类抗生素
