宋鹏
- 作品数：5 被引量：9H指数：3
- 供职机构：东南大学医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生环境科学与工程交通运输工程化学工程更多>>
- 人老化椎间盘髓核细胞体外老化模型的建立与细胞老化表型的初步研究
- 康新桂王锋宋鹏时睿蔡峰吴小涛
- 人老化椎间盘髓核细胞体外老化模型的建立与细胞老化表型的初步研究被引量：3
- 2017年
- [目的]构建人椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)老化模型,探讨老化NPCs中生长因子的表达差异及其与椎间盘退变(intervertebral disc degeneretion,IDD)的关系。[方法]体外单层培养人正常NPCs系(Scien Cell 4800),连续1:2传代培养,诱导建立NPCs复制性老化(replication senescence cells,RS)模型;不同浓度双氧水作用于未老化细胞,模拟椎间盘氧化应激微环境,诱导建立应激诱导过早老化(stress induced premature senescence cells,SIPS)模型。细胞衰老β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色检测NPCs阳性表达率。流式细胞仪检测G1期细胞比例及细胞凋亡率。CCK-8检测不同代次细胞增殖活性。应用Agilent表达谱芯片初步筛选出正常与老化NPCs中差异性表达的生长因子,实时荧光定量PCR进一步验证所筛选生长因子的表达差异。[结果]NPCs经连续传代、双氧水诱导可分别构建RS模型及SIPS模型。两种老化模型SA-β-Gal阳性表达的细胞比例均高于70%,G1期细胞比例均高于80%,凋亡率均低于10%。Agilent表达谱芯片筛选出的碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF)与血管内皮生长因子a(vascular endothelial growth factor a,VEGF-a)在不同老化模型中,表达差异有统计学意义(P<0.05),特别是b FGF在SIPS模型中的表达显著高于RS模型(P<0.05)。两种老化模型中的b FGF表达量显著高于正常组(P<0.05)。[结论]双氧水诱导所引起的氧化应激可促进细胞过早老化。老化NPCs上调b FGF,且SIPS模型中的上调幅度显著高于RS,SIPS可能比RS更加上调b FGF。不同老化诱导条件下,生长因子的表达可能存在差异,b FGF可能参与椎间盘再血管化及自我修复。
- 康新桂吴小涛王锋宋鹏时睿蔡峰闫凯
- 关键词：细胞老化椎间盘退变髓核细胞
- 微环境刺激与细胞连续分裂导致体外人髓核细胞老化中部分MMPs改变的初探
- 宋鹏王运涛洪鑫缪凤琴王小虎王锋蔡峰史航吴小涛
- 未成年人腰椎间盘突出症的研究与治疗进展被引量：3
- 2015年
- 腰椎间盘突出症在未成年人中较为少见,在诊断与治疗方面具有一定难度。本文从患病率、发病机理与危险因素、病理改变、临床表现以及主要治疗方式与疗效方面对未成年人LDH进行综述,以利于临床诊断与治疗。
- 宋鹏王运涛吴小涛
- 关键词：腰椎间盘突出症未成年人
- 大鼠不同节段椎间盘髓核细胞分离鉴定及生物特性的对比研究被引量：3
- 2015年
- 目的 对大鼠腰椎及尾椎间盘髓核细胞（nucleus pulposus cells,NPCs）进行体外分离培养、形态学鉴定,并对比研究细胞生长特性。方法 分别取8周龄SD大鼠腰段（L1、2-L6、S1）及尾段（C1、2-C17、18）椎间盘,采用组织贴壁法分离培养NPCs;倒置相差显微镜观察细胞形态变化,行HE、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察;分别取两组第1-5代细胞测定细胞活力（锥虫蓝染色）、总蛋白含量（BCA法）及衰老水平[衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidas e,SA-β-gal）染色];取第1代细胞行增殖能力（细胞计数试剂盒8法）测定。结果 成功分离培养各节段椎间盘NPCs。尾段原代NPCs贴壁时间及生长达90%融合时间显著少于腰段原代NPCs（P〈0.05）。HE染色示NPCs细胞质呈粉色,细胞核呈卵圆形,均一蓝黑色;甲苯胺蓝染色示NPCs细胞质呈蓝色;Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示细胞质见黄褐色颗粒沉着核周区显著,细胞核呈蓝黑色。腰段组细胞以长梭形为主,尾段组以多角形、不规则形为主。细胞活力测定示腰段及尾段两组间及两组内各代次间NPCs活力比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。增殖能力检测示,腰段细胞培养4-5 d后进入对数生长期,尾段细胞培养3 d后即进入对数生长期;培养3-9 d尾段细胞吸光度（A）值高于腰段细胞（P〈0.05）。总蛋白合成检测示,尾段及腰段NPCs总蛋白含量组内各代次间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）,尾段各代NPCs总蛋白含量均显著高于同代腰段NPCs（P〈0.05）。衰老水平检测示,两组间第1、2、3代比较老化细胞阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）,腰段组第4、5代老化细胞阳性率较同代尾段细胞高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 与同时间点大鼠腰椎间盘NPCs相比,尾椎间盘NPCs生长状态更佳,更适宜作为研究椎间盘退变的种子细胞。
- 朱厚毅王运涛王锋时睿宋鹏康新贵
- 关键词：椎间盘髓核细胞细胞特性尾椎
