马诚
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
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- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 肺炎球菌1型荚膜多糖多克隆抗体制备与夹心ELISA法建立及其在多糖浓度测定中的应用
- 2013年
- 目的：利用肺炎球菌1型全菌体制备多克隆抗体，并且利用该抗体建立肺炎1型荚膜多糖夹心酶联免疫吸附分析法（ Enzyme-linked immunosorbent assay ，ELISA），用于检测发酵和纯化过程中的多糖浓度。方法用灭活的1型肺炎链球菌免疫家兔6周，获得高滴度的抗多糖血清，经过亲和层析纯化，获得高纯度的兔抗肺炎1型多糖抗体IgG。以纯化IgG作为包被抗体，加入多糖样品，再以生物素化的抗体作为检测抗体，建立夹心ELISA法检测肺炎1型多糖浓度。确定标准曲线的最佳线性范围，并对该方法进行特异性、准确性和精密度验证。结果兔免疫血清经过双向免疫扩散检测抗体滴度可达1∶32；该方法的线性检测范围为1．56～50 ng/mL；最低检测限为3．13 ng/mL。在标准品中混入其他型别多糖或培养基，回收率分别为102％和108％；该方法批内精密度和批间精密度分别为6．08％和7．01％。结论建立的夹心ELISA方法，其特异性、准确性和精密度均良好，可以特异地检测肺炎球菌1型多糖浓度。
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- 关键词：夹心ELISA
- 5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素的结合及其影响因素探讨被引量：3
- 2013年
- 目的:制备5型肺炎链球菌多糖与破伤风类毒素衍化物的结合物,探讨结合过程中多糖分子大小、多糖蛋白投入比、反应时间等因素对结合终产物的影响。方法:应用1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸酯(CDAP)活化剪切后的5型肺炎球菌荚膜多糖,在缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDAC)作用下与连接了二酰乙二腈(ADH)的破伤风类毒素(TT)进行偶联反应,经分子筛层析纯化,得到5型肺炎链球菌多糖与破伤风类毒素的结合物,并检测其生化指标,免疫原性等。结果:剪切后的多糖免疫原性良好,其与TT的结合物在分子筛上可以很好分离;描述了多糖活化时CDAP的投入量,蛋白与多糖投入比,反应时间等对结合效率、结合物分子量、游离糖含量和结合物的多糖蛋白比影响。合成的结合物在免疫小鼠后,多糖特异性IgG抗体几何平均滴度(GMT)较多糖显著提高,显示免疫增强效应。结论:CDAP方法可以应用于PN5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备。
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- 关键词：肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗破伤风类毒素
- 响应面法优化检测己二酸二肼衍化后破伤风类毒素纯度的排阻型高效液相法
- 2016年
- 目的响应面法优化检测己二酸二肼(adipate hydrazine,ADH)衍化后破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)纯度的排阻型高效液相(SEC-HPLC)法。方法 SEC-HPLC层析柱Superdex 200 increase 3.2/300流动相为:20 mmol/L Na_2CO_3/NaHCO_3,150 mmol/L NaCl,pH 9.0,柱温25℃,单针检测时间60 min。采用响应面法及中心复合表面设计模型(Central Composite Face-centred,CCF)对层析柱的流速、进样量、样品浓度进行优化,通过分离度、峰对称性、峰理论塔板数、单针进样时间等评价指标,确定最优色谱参数,并在最优色谱参数下连续进样100针,验证其分离效果。结果色谱柱的最优色谱条件为:流速50μl/min,进样量5μl,样品浓度1.0 mg/ml,连续进样100针各响应量均满足优化目标。结论成功采用响应面法优化了检测ADH衍化后TT纯度的SEC-HPLC法,且优化后的方法具有良好的稳定性。
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- 关键词：响应面法破伤风类毒素纯度
