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5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素的结合及其影响因素探讨被引量：3: 2013年; 目的:制备5型肺炎链球菌多糖与破伤风类毒素衍化物的结合物,探讨结合过程中多糖分子大小、多糖蛋白投入比、反应时间等因素对结合终产物的影响。方法:应用1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸酯(CDAP)活化剪切后的5型肺炎球菌荚膜多糖,在缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDAC)作用下与连接了二酰乙二腈(ADH)的破伤风类毒素(TT)进行偶联反应,经分子筛层析纯化,得到5型肺炎链球菌多糖与破伤风类毒素的结合物,并检测其生化指标,免疫原性等。结果:剪切后的多糖免疫原性良好,其与TT的结合物在分子筛上可以很好分离;描述了多糖活化时CDAP的投入量,蛋白与多糖投入比,反应时间等对结合效率、结合物分子量、游离糖含量和结合物的多糖蛋白比影响。合成的结合物在免疫小鼠后,多糖特异性IgG抗体几何平均滴度(GMT)较多糖显著提高,显示免疫增强效应。结论:CDAP方法可以应用于PN5型肺炎链球菌荚膜多糖与破伤风类毒素结合疫苗的制备。; 尹丹丹周觉非刘威邹莎莎杨溢尧马诚崔长法江山张雪梅葛永红; 关键词：肺炎链球菌荚膜多糖结合疫苗破伤风类毒素

一种构建大容量同义密码库及优化基因模板的方法: 本发明公开了构建大容量同义密码库及优化基因模板的方法，它是通过优化基因模板,改进蛋白质的理化性质。本发明优化基因的方法可以改进编码目标蛋白的核苷酸密码，并维持目标蛋白的原氨基酸序列不变,进而改进目标蛋白的可溶性、功能、产...; 王明蓉张雪梅葛永红何明跃; 文献传递

检测白喉毒素特异性细胞毒性的Vero细胞/MTT法的建立: 2013年; 目的建立检测白喉毒素（diphtheria toxin,DT）特异性细胞毒性的Vero细胞/MTT法.方法用MEM培养液对DT进行不同倍数的预稀释,用目测法确定DT的最适预稀释倍数.用建立的方法检测以最适预稀释倍数稀释的DT,以确定该法的灵敏度和细胞病变半数抑制浓度（IC50）,同时绘制剂量-反应曲线以验证该法的重复性.用建立的方法于不同pH、盐浓度或蔗糖浓度条件下检测DT,计算DT回收率以验证该法的耐用性.结果目测法确定的DT最适预稀释倍数为106倍.建立的方法的平均检测灵敏度为（6.01±1.44）×10^-5 lf/ml DT,细胞病变半数抑制率对数值（log IC50）范围为5.02 ～ 5.82,变异系数为5.82％,该法具有较好的重复性.用建立的方法检测不同条件下的DT显示,DT的平均回收率为93.7％～ 110.4％,该法具有较好的耐用性.结论 Vero细胞/MTr法可用于检测DT特异性细胞毒性.; 邓杰张珂袁涛张雪梅; 关键词：白喉毒素 VERO细胞特异性细胞毒性

地鼠多瘤病毒PCR检测方法的建立: 2012年; 目的建立地鼠多瘤病毒（hamster polyomavirus，HaPyV）PCR检测方法，并应用于乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中地鼠肾细胞的感染检测。方法设计针对HaPyV衣壳蛋白VP1基因片段的特异引物，以含HaPyV VP1片段的质粒PMDl9T—HaPyV688为模板进行PCR扩增并测序确认扩增产物。以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增，并对扩增产物进行斑点杂交鉴定以验证PCR方法的特异性。将定量的质粒PMD19T-HaPyV68810倍系列稀释后进行PCR敏感性检测。以小鼠多瘤病毒（murinepolyomavirus，MuPyV）检验PCR法对质粒DNA和病毒DNA检测的一致性。应用建立的方法对生产用地鼠肾细胞悬液进行HaPyVDNA检测。结果仅含有质粒PMDl9T—HaPyV688和MuPyVDNA的样品能够扩增出600bp的片段，经斑点杂交及测序证明其分别为HaPyV和MuPyV的VPl特异基因片段。PCR所能检出的PMD19T—HaPyV688和MuPyV的最少DNA拷贝数分别为5300和590。7个亚批生产用地鼠肾细胞悬液的HaPyV检测结果均为阴性。结论建立的PCR方法具有较高的敏感性和特异性，可用于生产用地鼠肾细胞HaPyV感染的检测。; 叶琳张鹏艳曾献武郑庆纹张雪梅姚亚夫; 关键词：聚合酶链反应

19F型肺炎球菌荚膜多糖与载体蛋白P64K结合物的制备及免疫原性被引量：4: 2012年; 目的:采用改良胺化还原法,重组B群脑膜炎球菌外膜蛋白(rP64K)作为载体蛋白,制备19F型肺炎球菌荚膜多糖(PN19F)结合物。方法:在胺化还原法的基础上,以1,6-己二酰肼(ADH)为分子臂,在碳二亚胺(EDAC)作用下衍化rP64K,蛋白衍化后再与多糖上的醛基反应,形成共轭结合。采用HPLC、电泳、免疫印迹等方法分析结合物,并将获得的结合物免疫NIH小鼠,用ELISA方法检测多糖IgG水平。结果:电泳和免疫印迹证明了结合物制备成功。动物免疫产生了高滴度的抗PN19F的抗体,并有免疫记忆发生。结论:新的结合方法和新的载体蛋白能有效提高结合效率,以本工艺制备PN19F蛋白结合疫苗是可行的。; 周觉非姚静尹丹丹陈思杨溢尧代洁张珂饶海林李春阳江山张雪梅; 关键词：结合疫苗免疫原性

金黄色葡萄球菌组分疫苗研究进展被引量：1: 2013年; 临床上,耐药性的金黄色葡萄球菌日益增多,极其耐药的菌株甚至获得了超级耐药细菌的称谓,难以找到有效的抗菌素控制其感染,因而研制有效的疫苗来防治金黄色葡萄球菌感染显得更加重要。对研制开发的金黄色葡萄球菌荚膜多糖疫苗、纤维粘连结合蛋白疫苗、RNAⅢ激活蛋白疫苗以及核酸疫苗等进行了综述。; 谢茂超熊慧玲张雪梅; 关键词：金黄色葡萄球菌荚膜多糖

聚乙二醇化重组人白细胞介素-6工作标准品的制备被引量：3: 2012年; 目的制备重组人白细胞介素-6(Recombinant human interleukin-6,rhIL-6)和聚乙二醇化rhIL-6(PEG-rhIL-6)理化工作对照品和rhIL-6冻干体外生物学活性工作标准品,用于PEG-rhIL-6制备过程中各步样品纯度、理化指标及体外生物学活性测定。方法制备rhIL-6和PEG-rhIL-6,并对其进行全面检定,作为理化工作对照品。另取精确定量的rhIL-6,用含冻干保护剂的缓冲液稀释分装冻干,制成冻干制品后对其进行全面检定及稳定性考察,作为体外冻干生物学活性工作标准品。结果两种理化工作对照品和冻干体外生物学活性工作标准品各项常规检测指标均符合暂定规程要求;两种理化工作对照品结构分析结果证实与理论值相符;冻干体外生物学活性工作标准品加速稳定性试验证明其体外活性稳定。结论制备的两种理化工作对照品和冻干体外生物学活性工作标准品可用于PEG-rhIL-6中试工艺的研究和评价。; 袁涛张珂李征王智杰邓杰周宇赵兆饶海林张雪梅; 关键词：聚乙二醇化白细胞介素6 工作标准品

重组人白细胞介素-6的PEG化学修饰初探: 以PEG2-NHS为修饰试剂对重组人白细胞介素-6(rhIL-6)进行化学修饰,研究了反应时间,修饰试剂浓度,溶液pH等条件对PEG化rhIL-6产率及修饰度之间的影响,初步建立了一种稳定可靠的修饰反应方案.研究发现,反...; 张珂王济源饶海林李征罗亮张雪梅; 关键词：白细胞介素-6 PEG 化学修饰; 文献传递

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张雪梅