朱霞霞
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- RPB5介导蛋白与HBx蛋白共表达对肝癌HepG2细胞凋亡的影响被引量：3
- 2015年
- 目的通过乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与RPB5介导蛋白(RMP)在肝癌Hep G2细胞中的共表达,探索RMP与HBx对肝癌细胞凋亡的影响。方法脂质体介导瞬时转染细胞;实时荧光定量RT-PCR和western blot分别检测RMP与HBx在肝癌Hep G2细胞中的表达量;流式细胞仪检测细胞凋亡率;逆转录PCR检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase3、P53、Bcl-2 mRNA相对表达水平,western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与未经任何处理的Hep G2细胞比较,转染RMP质粒的稳定表达HBx的Hep G2细胞中RMP、HBx在基因及蛋白质水平表达均显著升高(P<0.01);细胞凋亡率显著降低;促凋亡基因Bax、Caspase3和P53 mRNA相对表达水平均显著下调(P<0.01),凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA相对表达水平显著上调(P<0.01);促凋亡蛋白Bax表达量明显降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显升高。结论 RMP与HBx共表达可降低肝癌Hep G2细胞凋亡率,提示RMP和HBx可能在肝癌发生和发展过程中起着重要的作用。
- 朱霞霞王琦李帅何峰魏文祥
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白肝癌
- Elongator复合物在60Coγ射线诱导的肝癌细胞DNA损伤修复中的作用
- 目的：研究Elongator复合物对60Coγ射线辐照诱导的肝癌细胞DNA损伤修复的影响，探讨在肝癌发生和发展过程中Elongator对肝癌细胞基因组发挥保护作用的分子机制。 方法：⑴RT-PCR检测肿瘤细胞中内源性e...
- 朱霞霞
- 关键词：肝脏肿瘤基因损伤蛋白表达病理细胞学
- 文献传递
- RGD修饰的腺病毒介导LIF和IL-24双基因共表达对MEG01白血病细胞的抑制作用被引量：1
- 2015年
- 目的利用RGD修饰改造白血病抑制因子(LIF)和白细胞介素-24(IL-24)双基因共表达腺病毒载体,以提高感染效率,探讨其对人白血病MEG01细胞的抑制作用。方法同源重组法构建RGD修饰的表达LIF、IL-24的腺病毒载体Ad.RGD-LIF、Ad.RGD-IL24和Ad.RGD-LIF-IL24。在QBI-293A细胞中扩增腺病毒,检测病毒滴度。流式细胞仪检测各组腺病毒载体对MEG01细胞的感染效率。应用Western blotting检测目的基因LIF、IL-24在MEG01细胞中的表达。CCK-8法检测各组腺病毒载体Ad.RGD-LIF、Ad.RGD-IL24、Ad.RGD-LIF-IL24感染MEG01细胞后对细胞增殖的影响。PE-Anexin V/7-AAD双染后,经流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。PI染色后,流式细胞仪检测目的基因表达对MEG01细胞周期的影响。实时定量PCR检测细胞周期调控基因p21和E2F1的表达。结果成功构建了RGD修饰的腺病毒载体Ad.RGD-LIF、Ad.RGD-IL24和Ad.RGD-LIF-IL24。RGD修饰后的腺病毒能够显著增强对MEG01细胞的感染效率。CCK-8检测显示,与PBS组比较,携带单个目的基因的腺病毒载体Ad.RGD-LIF和Ad.RGD-IL24在第5 d对细胞生长的抑制率分别为29.2%和31.5%,均能够显著抑制MEG01细胞的生长;携带Ad.RGD-LIF-IL24双基因组的抑制率达42.5%,优于单基因组,差异均有统计学意义(P<0.05)。凋亡检测显示,与PBS组(4.5%)和空病毒组Ad.RGD(7.4%)比较,Ad.RGD-IL24(20.9%)、Ad.RGD-LIF(17.8%)均能够显著促进细胞凋亡,且Ad.RGD-LIF-IL24双基因组(29.7%)的促凋亡作用更强。Western blotting显示,LIF和IL-24能够提高促凋亡蛋白p53、Bax的表达,同时抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达。目的基因LIF、IL-24过表达会影响MEG01细胞周期的进程,使细胞阻滞在G2期。实时定量PCR显示,LIF和IL-24能够上调细胞周期调控基因p21的转录,抑制E2F1的表达。结论 LIF和IL-24过表达的腺病毒载体在体外通过调节p53、Bax、Bcl-xl的表达,影响白血病细胞MEG01�
- 李帅郁心何峰朱霞霞杨吉成盛伟华缪竞诚
- 腺病毒介导ING4或/和P53基因表达对人肺腺癌细胞的生长抑制作用被引量：2
- 2015年
- 目的在本室已构建Ad.RGD空载体和Ad.RGD-ING4腺病毒基础上,再构建Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53单双基因重组腺病毒,研究其对人肺腺癌细胞的生长抑制作用。方法 PCR克隆P53基因,构建pAd.RGD-P53和pAd.RGD-ING4-P53同源重组腺病毒质粒,用QBI-293A细胞进行包装扩增和检测效价。将Ad.RGD、Ad.RGD-ING4、Ad.RGD-P53、Ad.RGD-ING4-P53分别感染A549细胞后,流式细胞仪检测各组重组腺病毒对A549细胞的感染效率。Western blotting检测A549和PC-9细胞中ING4或/和P53蛋白的表达。MTT法检测A549细胞生长,流式细胞仪检测各组A549和PC-9细胞的凋亡率。real-time PCR检测A549细胞内凋亡相关基因Caspase-3、BAX及BCL-2 mRNA的表达水平。结果 PCR和酶切鉴定结果表明：成功构建了pAd.RGD-P53和pAd.RGD-ING4-P53同源重组腺病毒质粒,包装扩增后经效价检测可达1×109~1×1010pfu/m L;各组重组腺病毒感染A549细胞后,感染效率可达90%~95%。Western blotting检测结果表明ING4或/和P53蛋白可在A549和PC-9细胞中成功表达。MTT法检测发现ING4或/和P53单双基因重组腺病毒均能明显抑制A549细胞生长,流式细胞仪检测表明ING4或/和P53基因表达均可诱导A549和PC-9细胞凋亡,且Ad.RGD-ING4-P53双基因重组腺病毒组较Ad.RGD-ING4和Ad.RGD-P53单基因组更为明显（P〈0.05）。real-time PCR检测表明腺病毒介导的ING4或/和P53基因表达能够上调A549细胞内Caspase-3、BAX mRNA表达,下调BCL-2 mRNA的表达,且双基因组较单基因组更为明显（P〈0.05）。结论成功构建了Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53重组腺病毒。各重组腺病毒目的基因表达均能明显抑制人肺腺癌细胞的生长,诱导细胞凋亡,且双基因组较单基因组效果更优,其分子机制可能与细胞内凋亡相关基因Caspase-3、BAX表达上调及BCL-2表达下调有关。
- 何峰李帅朱霞霞杨吉成盛伟华缪竞诚
- 关键词：ING4基因P53基因人肺腺癌细胞
