李剑琦
- 作品数：16 被引量：101H指数：4
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- 5-氮杂-2-脱氧胞苷对母系表达基因3启动子超甲基化的逆转作用及其对卵巢癌细胞增殖活性的抑制作用被引量：6
- 2015年
- 目的探讨不同浓度DNA甲基化抑制剂5-氮杂。2．脱氧胞苷对母系表达基因3（MEG3）基因启动子超甲基化的逆转作用，以及恢复MEG3表达对上皮性卵巢癌细胞增殖活性的影响。方法以0、1、5、10、20μmol／L的5-氮杂-2-脱氧胞苷作用上皮性卵巢癌OVCAR3细胞6d后，采用甲基化特异性PCR（MSP）检测MEG3启动子的甲基化状态，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测MEG3mRNA的表达水平，采用四甲基偶氮唑蓝（MrIT）比色法和5-乙炔基-2-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）掺人实验检测细胞增殖活性的变化。结果MSP检测显示，0μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组（对照组）、1p,mol／L5-氮杂-2一脱氧胞苷组、5μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组、10μmoL／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组和20μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组的甲基化水平分别为1．00±0．00、0．79±0．00、0．67±0．00、0．65±0．03和0．61±0．01，各组间差异均有统计学意义（均P〈0．05）。RT-PCR检测显示，对照组、1μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组、5IxmoL／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组、10μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组和20μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组MEG3mRNA的相对表达水平分别为1．00±0．00、2．04±0．16、2．44±0．17、3．19±0．34和5．34±0．39，各组间差异均有统计学意义（均P〈0．05）。MTT比色法检测显示，与对照组比较，1μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组、5μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组、10μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组和20μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组OVCAR3细胞的增殖活性受到明显抑制，5-氮杂-2-脱氧胞苷作用2、4、6d时，各组间细胞抑制率差异均有统计学意义（均P〈0．01）。EdU掺人实验显示，对照组、1p,mol／L5-氮杂-2一脱氧胞苷组、5μmoL／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组、10μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组和20μmol／L5-氮杂-2-脱氧胞苷组OVCAR3细胞中的EdU阳性细胞率分别为（40．78＋0．80）％、（35．65±0．33）�
- 李剑琦周冬梅汪志辉谭琳玉周艳清李娟生秀杰
- 关键词：甲基化5-氮杂-2-脱氧胞苷
- LncRNA MALAT1通过调控上皮间质转化促进上皮性卵巢癌的迁移与侵袭
- 徐霞英生秀杰吕华兵温启荣吴清霞银琪刘妮刘艳李剑琦
- 宫颈癌Siha细胞miR21基因表达与顺铂敏感相关性研究被引量：3
- 2015年
- 目的探讨miR21基因表达改变对宫颈癌Siha细胞顺铂敏感性的影响。方法采用脂质体介导法分别以micrOFFTMmiR21inhibitor、micrONTMmiR21mimic、miR21阴性对照试剂转染Siha细胞,实验分为miR21下调组、miR21上调组、阴性对照组及空白对照组。实时荧光定量PCR检测转染后各组细胞中miR21基因的表达水平;CCK-8比色法检测各组细胞对顺铂的半抑制率浓度(50%inhibitory concentration,IC50值);AnnexinⅤ/PI法检测顺铂处理后各组细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法,分别从mRNA和蛋白水平检测顺铂对各组细胞中PTEN、PDCD4基因表达的影响。结果实时荧光定量PCR检测miR21基因的表达结果显示,miR21下调组的表达明显低于阴性对照组,miR21上调组的表达明显高于阴性对照组,F=255.525,P<0.001。CCK-8比色法检测结果显示,顺铂对miR21下调组的IC50值为(2.44±0.69)μg/mL,阴性对照组为(3.96±0.07)μg/mL;miR21上调组为(6.93±0.07)μg/mL,空白对照组为(4.05±0.03)μg/mL,F=870.118,P<0.001。AnnexinⅤ/PI检测结果显示,5μg/mL顺铂诱导miR21下调组的凋亡率为(64.36±2.47)%,阴性对照组为(4.2±0.17)%;miR21上调组为(0.06±0.03)%,空白对照组为(4.14±0.25)%,χ2=10.385,P=0.016。实时荧光定量PCR检测PTEN和PDCD4结果显示,miR21下调组PTEN的mRNA表达相较于阴性对照组显著增加,miR21上调组PTEN的mRNA表达相较于阴性对照组降低,F=174.057,P<0.001;miR21下调组PDCD4的mRNA表达相较于阴性对照组显著增加,miR21上调组PDCD4的mRNA表达相较于阴性对照组降低,F=491.283,P<0.001。蛋白质印迹法检测结果显示,miR21下调组PTEN蛋白表达量为8.845±0.062,阴性对照组7.695±0.056;miR21上调组为6.908±0.058,空白对照组为1,F=16.036,P<0.01。miR21下调组PDCD4蛋白表达量为9.936±0.036,阴性对照组为8.728±0.019;miR21上调组为7.838±0.066,空白对照组为1,F=55.323,P<0.001。结论下调miR21基因可能增加宫颈癌Siha细胞对顺铂的敏感性,上
- 李娟周艳清谭琳玉赵琴李剑琦徐霞英吕华兵温启荣生秀杰
- 关键词：宫颈肿瘤抗肿瘤药物化疗敏感性
- 长链非编码RNA LINC00467在卵巢癌的表达及其临床意义被引量：2
- 2022年
- 目的通过检测卵巢癌(ovarian cancer,OC)组织和卵巢癌细胞系中长链非编码RNA LINC00467的表达情况,探讨其与卵巢癌临床病理特征的关系及生物学特性,初步探讨LINC00467可能的调控机制。方法首先基于癌症基因组图谱(TCGA)的基因表达谱交互分析数据库,通过生物信息学分析评估LINC00467在卵巢癌组织中的表达水平,使用Starbase数据库预测LINC00467可能的miRNA作用靶点。再采用定量实时PCR(qPCR)检测66对卵巢癌组织和正常卵巢组织中LINC00467和miR-302a-3p的表达情况,分析其与卵巢癌临床病理特征的关系。进一步通过基因沉默技术,降低LINC00467的表达后,再采用CCK-8实验、集落形成实验、Transwell迁移和侵袭实验测定LINC00467对卵巢癌细胞的生物学特性的影响;使用双荧光素酶报告基因检测LINC00467和miR-302a-3p的结合关系,降低LINC00467的表达后检测miR-302a-3p的表达量。结果生物信息学分析提示癌症基因组图谱(TCGA)数据库中卵巢癌组织LINC00467表达明显高于正常对照组;实时定量PCR(qPCR)提示66例OC组LINC00467的表达明显高于正常卵巢组,差异有统计学意义(P<0.001),卵巢癌细胞系中LINC00467的表达亦明显高于人卵巢上皮细胞系(HOSEpiC),差异有统计学意义(P<0.001),验证了生物信息学分析揭示的结果。LINC00467高表达组和低表达组卵巢癌的病理分级、淋巴结转移情况以及FIGO分期差异有统计学意义(P<0.05)。生存分析结果表明低表达LINC00467的卵巢癌患者总生存期优于高表达LINC00467的卵巢癌患者,差异有统计学意义(P<0.01)。沉默LINC00467表达后,卵巢癌细胞的增殖活性、集落形成能力、迁移和侵袭能力都受到明显抑制,反而miR-302a-3p的表达量明显提高,差异有统计学意义(P<0.01),LINC00467与miR-302a-3p可以直接结合。结论长链非编码RNA LINC00467在卵巢癌组织及细胞中高表达,与卵巢癌细胞的增殖、转移能力相关,与卵巢癌患
- 李剑琦生秀杰
- 关键词：长链非编码RNA卵巢癌
- 上皮性卵巢癌患者血清无细胞DNA MEG3甲基化状态及临床意义被引量：1
- 2022年
- 目的 通过检测上皮性卵巢癌患者血清无细胞DNA中MEG3基因的甲基化状态,分析MEG3基因的甲基化状态在上皮性卵巢癌诊断中的临床意义。方法 通过甲基化特异性PCR(MSP)检测60例上皮性卵巢癌(实验组)和30例非肿瘤患者(对照组)血液标本中血清无细胞DNA MEG3基因启动子甲基化状态,分析浆液性癌、黏液性癌、子宫内膜样癌和透明细胞癌4种不同病理类型上皮性卵巢癌的无细胞DNA MEG3基因启动子甲基化率;分析不同临床分期、不同分化程度、有无淋巴结转移的上皮性卵巢癌的无细胞DNA MEG3基因启动子甲基化率的差异。对60例上皮性卵巢癌病例甲基化状态分两组进行生存分析。结果 上皮性卵巢癌组MEG3基因启动子甲基化率为80%,而对照组甲基化率为13.3%;>60岁与≤60岁两组间甲基化率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);浆液性癌、黏液性癌、子宫内膜样癌和透明细胞癌4种不同病理类型的甲基化率分别是84.0%、91.7%、53.8%、81.8%,差异无统计学意义(P>0.05)。临床分期Ⅰ~Ⅱ期的MEG3基因启动子甲基化率为30.8%,Ⅲ~Ⅳ期的甲基化率为91.5%;中高分化的MEG3基因启动子甲基化率为72.0%,低分化MEG3基因启动子甲基化率为82.9%;有淋巴结转移组的MEG3基因启动子甲基化率为90.5%,无淋巴结转移组的甲基化率为50.0%。生存分析显示甲基化组(M组)的5年生存率为19.6%,非甲基化组(U组)的5年生存率为59.8%;M组的中位生存期为33个月。结论 血清无细胞DNA MEG3基因启动子甲基化有望成为诊断上皮性卵巢癌的潜在标志物。
- 李剑琦生秀杰
- 关键词：甲基化上皮性卵巢癌
- 长链非编码RNA MEG3靶向调控Rb1抑制上皮性卵巢癌细胞增殖研究
- 2021年
- 目的研究母系表达基因3(MEG3)对上皮性卵巢癌细胞埴殖影响及其作用机制。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测67例人上皮性卵巢癌组织和20例正常卵巢组织中MEG3表达。实验设置MEG3过表达质粒组(MEG3组)和空质粒pcDNA3.1对照组(NC组)。过表达MEG3质粒转染卵巢癌细胞OVCAR3和SKOV3,MTT实验、细胞周期和细胞凋亡实验检测MEG3对卵巢癌细胞生长的影响;双荧光素酶报告系统检测MEG3靶基因Rb1的转录活性;RT-PCR和蛋白质印迹法检测Rb1 mRNA和蛋白表达水平。结果正常卵巢组织中MEG3表达量为3.32±0.25,上皮性卵巢癌组织为0.35±0.11,差异有统计学意义,t=10.932,P<0.001.转染MEG3过表达质粒后,12、24、36和48 h的OVCAR3和SKOV3细胞生长抑制率分别为(37.26±2.21)%和(23.06±1.67)%、(38.19±1.98)%和(42.71±2.36)%、(44.30±2.14)%和(44.31±3.38)%、(47.67±4.32)%和(50.36±2.76)%,差异有统计学意义,F值分别为131.203和353.782,均P<0.001;转染MEG3过表达质粒后OVCAR3和SKOV3细胞S期比例下降.差异有统计学意义(t=7.471,P<0.001;t=5.197,P<0.001);OVCAR3和SKOV3细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(t=6.820,P=0.029,t=4.235,P<0.001)。对比NC组.MEG3组Rb1转录活性增加,OVCAR3和SKOV3细胞RB1 mRNA表达分别增加(1.74±0.54)和(1.95±0.72)倍,差异有统计学意义(t=24.504,P<0.001,t=28.276.P<0.001);OVCAR3和SKOV3细胞Rb1蛋白表达分别增加(1.92±0.32)和(1.75±0.25)倍,差异有统计学意义(t=10.500.P<0.001,t=9.375,P<0.001)。结论MEG3在上皮性卵巢癌组织和细胞中表达降低,推测可能与上皮性卵巢癌的发生发展相关。MEG3可能通过调控Rb1抑制上皮性卵巢癌细胞增殖并促进凋亡。
- 李剑琦刘艳周冬梅汪志辉生秀杰
- 关键词：上皮性卵巢癌长链非编码RNA
- 肺癌肿瘤抑制因子1和程序性死亡配体1在宫颈脱落细胞中的表达及意义被引量：4
- 2015年
- 目的探讨检测不同级别宫颈脱落细胞中肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC-1)及程序性死亡配体1(PDL1)的表达在筛查宫颈癌前病变及宫颈癌中的价值,分析这两个指标的表达与高危HPV DNA负荷量的关系。方法收集宫颈脱落细胞129例,细胞石蜡包埋,采用免疫细胞化学法检测TSLC-1、PD-L1的表达,采用杂交捕获法(HC-Ⅱ)检测高危HPV DNA病毒负荷量,并分析三者之间的关系。结果 (1)TSLC-1在正常宫颈细胞(NILM)、不典型鳞状上皮细胞(ASC)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、宫颈鳞癌(SCC)和腺癌中的阳性表达率分别为92.00%(23/25)、72.72%(24/33)、85.19%(23/27)、26.47%(9/34)、0(0/6)、0(0/4),各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);PD-L1蛋白在NILM、ASC、LSIL、HSIL、SCC和腺癌中阳性表达率分别为20.00%(5/25)、51.51%(17/33)、70.37%(19/27)、100.00%(34/34)、100.00%(6/6)、50.00%(2/4),各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);TSLC-1表达强度与病变级别呈负相关(r=-0.55,P<0.05),而PD-L1的表达强度与宫颈病变的程度呈正相关(r=0.63,P<0.05);(2)TSLC-1的表达与高危HPV DNA病毒负荷量呈负相关(r=-0.463,P=0.000),而PD-L1的表达与高危HPV DNA病毒负荷量呈正相关(r=0.499,P=0.000)。结论 TSLC-1异常可能是宫颈癌进展的早期事件,TSLC-1和PD-L1均与高危HPV感染有关,TSLC-1和PD-L1可作为宫颈癌及癌前病变的筛查指标。
- 李文香李剑琦刘少颜黄凯清
- 关键词：HPV宫颈癌宫颈上皮内瘤变
- Maternally expressed gene 3, a long non-coding RNA,inhibits the proliferation of epithelial ovarian cancer cells by targeting Rb1
- 李剑琦生秀杰
- 长链非编码RNA MEG3对上皮性卵巢癌细胞增殖的影响及其作用机制的研究
- 研究背景：卵巢癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其病死率高居妇科恶性肿瘤之首，由于起病隐匿、早期缺乏特异性症状与体征及有效的医学筛查手段，约70/%卵巢癌患者就诊时已发生局部或远处转移，失去了手术的最佳时期，结果导致5年的总...
- 李剑琦
- 关键词：长链非编码RNA甲基化上皮性卵巢癌
- 文献传递
- 长链非编码RNA-MEG3调控Rb1抑制上皮性卵巢癌细胞增殖的研究
- 李剑琦
