张亮亮
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：温州医科大学基础医学院寄生虫学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技厅公益技术研究社会发展项目浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一种新型抗凝剂白纹伊蚊唾液腺aegyptin相似蛋白ALP的表达制备方法和应用
- 本发明涉及一种新型抗凝剂白纹伊蚊唾液腺aegyptin相似蛋白ALP的表达制备方法，步骤如下：(1)优化合成ALP成熟肽DNA；(2)重组质粒pPICZαA-ALP的构建；(3)重组蛋白ALP的表达和纯化。本发明方法利用...
- 梁韶晖李星潘刘文权张亮亮
- 文献传递
- 白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP的制备及抗原性分析被引量：1
- 2014年
- 目的克隆、表达白纹伊蚊唾液腺重组aegyptin相似蛋白alALP编码基因并分析其抗原性。方法运用生物信息学方法分析alALP与aegyptin氨基酸序列(GenBank登录号为ABF18122.1)的同源性、二级结构和抗原肽段。提取白纹伊蚊唾液腺总RNA,根据alALP的基因编码序列(GenBank登录号为AY826121)设计引物,RTPCR扩增目的基因,亚克隆至pGEX-6P-1质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况。重组aegyptin相似蛋白(GST-alALP)经还原型谷胱甘肽(Glutathione Sepharose 4B)亲和层析法纯化后,皮下注射免疫BALB/c小鼠,每次免疫剂量60μg,共免疫3次,每次间隔2周,制备小鼠抗GST-alALP血清。分别以小鼠抗GST-alALP血清和白纹伊蚊叮咬后小鼠血清为一抗,Western blotting分析GST-alALP蛋白的抗原性。结果生物信息学预测结果显示,alALP与aegyptin的氨基酸序列具有65.58%的同源性,二级结构高度相似并具有一段保守的抗原多肽。RT-PCR结果显示,alALP成熟肽基因扩增产物约为762 bp。经双酶切、PCR和测序结果显示,重组质粒pGEX-6p-1-alALP构建成功。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)约56 000的可溶性重组融合蛋白。Western blotting结果显示,GST-alALP蛋白能被该蛋白免疫的小鼠血清和白纹伊蚊叮咬后的小鼠血清识别。结论克隆的alALP成熟肽基因能在原核表达系统中高效表达,且具有抗原性。
- 李星潘曹国梅邢翠翠华倩倩张亮亮梁韶晖
- 关键词：白纹伊蚊原核表达抗原性
- 恶性疟原虫组蛋白甲基转移酶SET7催化结构域的表达及活性鉴定
- 2017年
- 目的:构建杆状病毒昆虫表达质粒pFast-N-set7cd、pFast-C-set7cd和无细胞麦胚表达载体pEUHis-set7cd,表达恶性疟原虫组蛋白甲基转移酶SET7催化结构域(Pf SET7cd),并鉴定PfSET7cd的组蛋白甲基转移酶活性。方法:通过分子克隆技术构建获得pFast-N/C-set7cd以及pEU-His-set7cd表达质粒,尝试通过杆状病毒传代方式与无细胞麦胚表达方式获得重组Pf SET7cd蛋白,以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并进一步检测重组蛋白的酶活性。结果:用于昆虫表达的重组质粒pFast-N-set7cd、pFast-C-set7cd双酶切结果大小与测序结果均正确,但是Western blot并未检测到其在昆虫细胞中的可溶性表达产物;pEU-His-set7cd通过无细胞麦胚表达系统表达获得的蛋白与预测大小一致,经Western blot鉴定正确,并用NTA-Ni2+亲和层析纯化。体外酶活实验显示PfSET7cd具有催化H3第36位赖氨酸上三甲基化(H3K36me3)活性。结论:通过无细胞表达系统获得可溶性的PfSET7cd重组蛋白,PfSET7cd重组蛋白具有介导H3K36me3的活性,但不影响H3K4me3和H3K9me3水平。
- 张亮亮蔡立娅魏启美江陆斌梁韶晖
- 关键词：恶性疟原虫组蛋白甲基转移酶重组蛋白表达活性鉴定
