朱晓丽
- 作品数：7 被引量：20H指数：2
- 供职机构：石河子大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞体外分离培养方法的优化被引量：11
- 2015年
- 目的优化SD乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的体外分离培养的条件和方法。方法分别用胰酶、Ⅱ型胶原酶依次消化分离心肌组织,再通过两次差速贴壁分离法分别收集、培养乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞。光学显微镜下分别观察心肌细胞和心肌成纤维细胞的基本形态特征的变化,原代心肌细胞行心肌肌钙蛋白免疫荧光鉴定,而心肌成纤维细胞则用第2代行波形蛋白免疫荧光鉴定。结果心肌细胞在2~4 h开始贴壁生长,12~24 h贴壁速率大幅增加,并出现自发性搏动,48~72 h心肌细胞粘合成簇,细胞成活率,纯度均达95%以上;心肌成纤维细胞第2~4代细胞生长良好,纯度高达98%以上。结论此种方法可得到产量大,纯度高,活力好的心肌细胞和心肌成纤维细胞,为心血管疾病的基础与临床研究提供了理想的实验模型。
- 朱晓丽王丽马依彤杨毅宁陈邦党马苗苗
- 关键词：心肌细胞心肌成纤维细胞原代培养
- β3肾上腺素能受体对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响被引量：6
- 2015年
- 目的:分别应用选择性β3肾上腺素受体(β3-adrenoceptor,β3-AR)阻断剂及激动剂对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)致慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)模型大鼠进行干预,观察β3-AR是否在CHF进展中介导心肌纤维化。方法:90只健康雄性Wistar大鼠随机分为4组:1正常对照组:腹腔注射0.9%氯化钠;2 CHF组:腹腔注射ISO+0.9%氯化钠;3β3-AR激动剂干预心衰组(BRL组):腹腔注射ISO+尾静脉注射BRL37344;4β3-AR抑制剂干预心衰组(SR组):腹腔注射ISO+SR59230A。干预结束后检测血流动力学指标,心肌病理学变化,胶原容积分数(CVF),心肌羟脯氨酸(Hyp)含量等。结果:1模型组大鼠在12周后心功能明显下降,出现心肌重构,CHF模型成功建立。2BRL组大鼠较CHF组LVSP、±dp/dtmax降低,LVEDP、LVW/BW升高(P<0.05或P<0.01),心肌出现明显变性及纤维化改变,CVF升高(P<0.05),心肌Hyp含量升高(P<0.05);SR组较CHF组HR、LVEDP下降(P<0.05或P<0.01),LVSP显著升高(P<0.05)。结论:1腹腔注射ISO可成功复制CHF大鼠模型。2β3-AR激动后可促进心肌纤维化,提示β3-AR可能通过介导心肌重构参与CHF进展。
- 胡小芳李娜王丽马苗苗朱晓丽王忠赵瑾
- 关键词：心力衰竭Β3肾上腺素能受体心肌纤维化
- 心肌细胞的培养鉴定及β3-AR蛋白提取方法的比较
- 2015年
- 目的优化培养乳鼠心肌细胞的技术,筛选出简便、准确、特异的提取心肌细胞β3-肾上腺素能受体(β3-AR)膜蛋白的方法。方法使用Ⅱ型胶原酶和差速贴壁法收集心肌细胞,分别用总蛋白法、超速离心法、试剂盒法提取心肌细胞β3-AR膜蛋白;BCA法进行蛋白定量;Western blot法检测蛋白样品中β3-AR和GAPDH相对含量及提取蛋白的特异性。结果优化心肌细胞的培养方法可以使所得细胞产量大、浓度高,满足后续实验。试剂盒法提取蛋白的浓度(8.26±0.29)g/L>总蛋白法提取法的(5.12±0.47)g/L>超速离心法的(3.20±0.37)g/L,差异均有统计学意义。Western blot检测结果示,试剂盒提取法所得β3-AR膜蛋白含量(0.22±0.05)>超速离心法(0.09±0.03)>总蛋白提取法(0.01±0.01),差异均有统计学意义。结论优化培养心肌细胞的方法可获得高产量、高纯度的细胞。试剂盒提取法可有效提高β3-AR膜蛋白的浓度和特异性。
- 马苗苗胡小芳朱晓丽王丽马依彤杨毅宁陈邦党
- 关键词：细胞培养技术
- 慢病毒转染的β3-AR基因对心肌肥厚的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨β3肾上腺素能受体(β3-AR)对SD大鼠乳鼠心肌肥大的影响及其机制。方法:体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,用携带β3-AR基因的慢病毒转染细胞后,用去甲肾上腺素(NE)诱导细胞48h,建立心肌细胞肥大模型。实验分4组:空白对照组(Control组)、心肌肥厚组(NE组)、β3-AR基因转染+NE组(β3-AR组)、空病毒转染+NE组(空病毒组)。用免疫荧光法鉴定心肌细胞,倒置荧光显微镜观察病毒转染组绿色荧光蛋白(GFP)表达,免疫印迹法(Western Blot)检测β3-AR、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)、细胞外信号调控激酶(ERK1/2)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)和ERK(p-ERK1/2)及原癌基因c-myc、c-fos蛋白水平的表达。结果:(1)慢病毒介导β3-AR基因转染心肌细胞,β3-AR表达较空白对照组明显升高。(2)用Western Blot检测各实验组细胞原癌基因c-myc、c-fos表达,其中NE组、β3-AR组、空病毒组表达均高于空白对照组,其中β3-AR组cmyc、c-fos表达明显高于NE组。(3)NE组、β3-AR组、空病毒组p38MAPK及ERK1/2的磷酸化水平较空白对照组明显上调,其中β3-AR组表达最高。结论:慢病毒介导的β3-AR基因转染使心肌细胞有效高表达β3-AR,β3-AR可能通过MAPK通路促进心肌肥厚。
- 张慧王丽张源马依彤杨毅宁马苗苗朱晓丽
- 关键词：Β3肾上腺素能受体心肌细胞慢病毒心肌肥厚
- β3肾上腺素能受体对心肌成纤维细胞纤维化的作用及其机制被引量：2
- 2016年
- 目的观察β3肾上腺素能受体（β3-AR）对心肌成纤维细胞（CFB）纤维化的作用，并探讨其机制。方法分离Sprague-Dawley（SD）大鼠乳鼠的CFB体外培养，CFB分为4组，即阴性对照组、β3-AR激动剂处理组（BRL组）、β3-AR拮抗剂处理组（SR组）和阳性对照组。阴性对照组CFB的培养基中不加任何药物干预；BRL组和SR组，在CFB培养基中分别先加入10^-6mol／L的血管紧张素Ⅱ（AngⅡ），1h后再分别加入β3-AR激动剂BRL3734410^-5mol／L或β3-AR拮抗剂SR59230A10^-5mol／L；阳性对照组，CFB培养基中仅加入10^-6mol／L的AngⅡ。水溶性四唑盐-1（WST-1）法检测CFB增殖情况。蛋白印迹法检测β3-AR、转化生长因子β1受体（TGF-β1-R）、转化生长因子β（TGF-β）1、TGF-β受体激酶底物Smad-2、磷酸化Smad-2（p-Smad-2）、I型胶原以及Ⅲ型胶原蛋白的表达水平。结果（1）各组乳鼠CFB增殖情况的检测结果：BRL组乳鼠CFB增殖强度明显大于阴性对照组、SR组和阳性对照组（1．08±0．01比0．97±0．03、1．03±0．01和1．05±0．01，P均〈0．05）。阳性对照组乳鼠CFB增殖强度明显大于SR组和阴性对照组（P均〈0．05）。SR组乳鼠CFB增殖强度明显大于阴性对照组（P〈0．05）。（2）各组乳鼠CFBβ3．AR蛋白表达水平的检测结果：BRL组乳鼠CFBβ3-AR蛋白表达水平明显高于阳性对照组、SR组和阴性对照组（0．246±0．004比0．078±0．006、0．054±0．001和0．015±0．003，P均〈0．05）。阳性对照组乳鼠CFBβ3-AR蛋白表达水平明显高于SR组和阴性对照组（P均〈0．05）。SR组乳鼠CFBβ3-AR蛋白表达水平则明显高于阴性对照组（P〈0．05）。（3）各组乳鼠CFBTGF-β1-R蛋白表达水平的检测结果：BRL组乳鼠CFBTGF-β1-R蛋白表达水平明显高于阳性对照组、SR组和阴性对照组（0．60±0．01比0．31±0．02、0．28±0．02和0．06±0．01，P均〈0．05）。阳性对照组乳鼠CFBTGF
- 张源王丽张慧马依彤杨毅宁陈邦党马苗苗朱晓丽
- 关键词：心肌纤维化
- 去甲肾上腺素对心肌成纤维细胞增殖及凋亡的影响
- 2015年
- 目的 探讨去甲肾上腺素（NE）对体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞（CFB）增殖和凋亡的影响及其机制.方法 分离Sprague-Dawley （SD）大鼠乳鼠CFB,体外培养,设对照组（未给予任何干预）和NE不同浓度（0.1、1、10、50和100 μmol/L）处理组.水溶性四唑盐-1（WST-1）法测定CFB增殖情况,原位末端转移酶标记（TUNEL）法检测细胞凋亡情况,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和原癌基因c-myc mRNA的表达水平.蛋白印迹（Western blot）法检测磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38（p-p38MAPK）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase3）的表达水平.结果 NE 1 μmol/L处理组和NE 10μmol/L处理组CFB增殖数量明显高于对照组（1.05 ±0.05和1.09±0.02比1.00±0.03,P均＜0.05）.NE 50 μmol/L处理组和NE 100 μmol/L处理组CFB凋亡率明显高于对照组[（22.69±2.18）％和（36.40±6.80）％比（4.50±1.08）％,P均＜ 0.05].在NE10 μmol/L处理组中Ⅰ型胶原的mRNA表达水平最高,Ⅲ型胶原和c-myc mRNA的表达水平随着NE浓度增加而增高,均明显高于对照组（P均＜ 0.05）.NE 1μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L处理组p-p38MAPK及caspase3蛋白表达水平逐渐增高,均明显高于对照组（P均＜0.05）.结论 低浓度NE可诱导CFB增殖,高浓度NE可促进CFB凋亡.p38MAPK磷酸化可能介导了NE对CFB增殖和凋亡的调控.
- 马苗苗王丽马依彤杨毅宁陈邦党朱晓丽
- 关键词：心肌成纤维细胞去甲肾上腺素细胞增殖
- 建立β_3肾上腺素能受体过表达的心肌成纤维细胞模型方法的比较
- 2016年
- 目的用两种不同的方法构建β3肾上腺素能受体(β3-AR)过表达的SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFBs)模型,并对两种方法的效果进行比较,为今后在细胞水平观察β_3-AR对心功能,尤其是对慢性心力衰竭(CHF)的影响提供新的实验方法。方法 2015年3—6月,选取出生1~3 d的SFP级SD乳鼠8只。分离SD乳鼠CFBs并体外培养,随机分为3个感染复数(MOI)组,分别为MOI 50组、MOI 100组、MOI 200组,采用β_3-AR基因过表达的慢病毒载体感染CFBs,利用流式细胞仪检测感染率,确定最佳MOI。将SD乳鼠CFBs随机分为4个β_3-AR激动剂干预组,分别为正常对照组、10^(-6)mol/L组、10^(-5)mol/L组、10^(-4)mol/L组,采用不同浓度β_3-AR激动剂干预CFBs,利用Western blotting法检测β_3-AR表达水平,挑选出β_3-AR激动剂干预CFBs的最适浓度。结果普通光学显微镜下观察CFBs,无搏动性,大多数呈梭形,其细胞核较大,胞质透明。倒置荧光显微镜下观察感染24、48、72、96h时CFBs状态及荧光表达情况,感染72 h时,各MOI组CFBs生长状态较好,细胞大多数呈梭形,无搏动性,细胞核较大,且肉眼观察荧光表达最佳。MOI 100组、MOI 200组感染率高于MOI 50组(P<0.05);MOI 200组感染率低于MOI 100组(P<0.05)。10-6mol/L组、10^(-5)mol/L组、10-4mol/L组β_3-AR表达水平高于正常对照组(P<0.05);10^(-5)mol/L组β_3-AR表达水平高于10^(-6)mol/L组、10^(-4)mol/L组(P<0.05)。10^(-5)mol/L组、MOI 100组β_3-AR表达水平高于正常对照组(P<0.05);MOI 100组β_3-AR表达水平高于10^(-5)mol/L组(P<0.05)。结论使用β_3-AR过表达的慢病毒载体感染CFBs与β_3-AR激动剂干预CFBs均可使其β_3-AR过表达,且前者效果优于后者。
- 张源王丽张慧马依彤杨毅宁马苗苗朱晓丽
- 关键词：心肌慢病毒载体
