郑海燕
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
- 供职机构：河南科技大学医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种用于DNA甲基化分析的改进型亚硫酸氢盐转化法被引量：3
- 2007年
- DNA甲基化分析是认识生理、病理条件下基因表达变化的重要途径.亚硫酸氢盐转化是DNA甲基化分析的瓶颈.本文旨在改进琼脂糖-亚硫酸氢盐DNA处理方案(agarose bisulfite method),建立一种简便稳定、适合常规甲基化分析的亚硫酸氢盐转化法.把DNA包入普通琼脂糖,以饱和亚硫酸氢盐在较高的温度下快速处理,然后用离心柱型琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒,集DNA凝胶回收、脱盐、脱磺基和纯化于一体,完成整个转化过程.Bisulfite-PCR、克隆测序和酶切法分析转化率、转化特异性和转化物的质量.用该方案处理的HeLa细胞DNA,多个片段的转化率均大于98%,甲基化片段96.2%的CpG保持不变,可以扩增605bp的较大片段,灵敏度介于普通法和琼脂糖亚硫酸氢盐法之间,而重复性较二者都好.改良后的方案简化了操作流程,快速稳定,易学易用,可实现高效特异转化,适合于一般实验者对常规检材进行DNA甲基化分析.
- 赵贵森郑海燕莫耀南冯文芳杨渝珍
- 关键词：DNA甲基化亚硫酸氢钠琼脂糖
- 以心力衰竭课件制作为例谈谈如何收集多媒体素材
- 随着多媒体技术在医学教育中的广泛开展和应用,多媒体课件制作已成为广大教师必须掌握的基本技能。素材的收集和制作是课件制作的基础,是影响课件质量的关键。制作高质量的课件离不开多媒体素材(图形、图像、音频、视频、动画)。
- 郑海燕张中乐王向红王颖
- 镁可防治哮喘豚鼠气道重塑
- 2008年
- 目的探讨镁对哮喘豚鼠气道重塑的防治作用。方法豚鼠分为正常对照组、哮喘模型组、哮喘模型延续组、高镁组、低镁组。生化分析仪测血清镁的浓度;图像分析系统测定气道壁平滑肌厚度;取肺、心、肝、脾、肾、肾上腺、脑称重,计算出脏器重量/体重。结果哮喘模型组镁低于正常对照组(P<0.05),而气道壁平滑肌厚度明显高于正常对照组(P<0.01);哮喘模型延续组血清镁低于哮喘模型组,而气道壁平滑肌厚度明显高于哮喘模型组(P<0.01);高镁组血清镁高于哮喘模型延续组,而气道壁平滑肌厚度明显低于哮喘模型延续组(P<0.01),低镁组血清镁低于而气道壁平滑肌厚度明显高于哮喘模型延续组(P<0.01);哮喘模型组肺重/体重、脑重/体重明显高于正常对照组(P<0.01);高镁组脏器重量/体重低于哮喘模型延续组(P<0.05),而低镁组脏器重量/体重高于哮喘模型延续组(P<0.05)。示豚鼠慢性哮喘时存在气道重塑和血清镁降低以及肺、脑变化,低镁可加重这些变化,高镁可缓解之。结论镁可能在哮喘气道重塑中起调节作用,镁对防治哮喘气道重塑及保护重要脏器有一定作用。
- 王向红王红伟张中乐郑海燕王颖赵云华
- 关键词：镁哮喘气道重塑
- Rotor-Gene链融解曲线法甲基化标记筛选技术的建立被引量：1
- 2008年
- 目的:建立基于Rotor-Gene的链融解曲线法的甲基化标记筛选技术,分析各种影响因素,评估其实用性。方法:克隆Hela细胞雄激素受体基因外显子-1的Bisulfite-PCR产物,挑出经测序证实的可以代表不同甲基化程度的一组质粒,并以之为模板,在Rotor-Gene3000实时定量PCR仪进行扩增和链融解,分析融链温度、链融解曲线与甲基化程度、甲基化模式的相关性及各种影响因素。结果:基于Rotor-Gene的链融解曲线法,不仅可以区分甲基化与非甲基化,而且能够鉴别片段内细微的甲基化差异;主要的影响因素有升温幅度、缓冲液离子强度、产物浓度等。结论:基于Rotor-Gene的链融解曲线法,可以集扩增和链融解于一体,是一种经济简便的甲基化分析技术,可用于样品的甲基化筛选。
- 莫耀南赵贵森郑海燕刘良杨渝珍
- 关键词：DNA甲基化雄激素受体
- 以心力衰竭课件制作为例谈谈如何收集多媒体素材
- 2009年
- 郑海燕张中乐王向红王颖
- 关键词：多媒体素材课件制作心力衰竭课件质量多媒体技术医学教育
- 亚硫酸氢盐测序法DNA甲基化标记筛查技术的改进研究被引量：1
- 2008年
- 目的改进DNA亚硫酸氢盐测序法（bisulfite genomic sequencing，BGS），建立一种简便快速的甲基化标记筛查技术。方法基因组DNA在亚硫酸氢盐处理、脱盐纯化后直接进入碱性的PCR体系，通过延长预变性时间完成修饰过程，然后进行常规亚硫酸氢盐PCR（bisulfite-PCR，BSP）扩增；首轮扩增产物再用5′端加有高GC标签序列的引物进行2次扩增，达到调整GC含量和直接测序的目的。同时用传统和改进BGS法检测3T3-L1细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因和Hela细胞雄激素受体基因启动子的甲基化情况，以评估改进方案的可行性。并用Alu序列实时定量BSP技术比较传统和改进BGS法的灵敏度。结果无论是高甲基化还是低甲基化片段，改进的BGS法均可实现BSP产物的直接测序，结果与传统法一致。改进法修饰的DNA转化率达到100％，特异度〉93．75％，灵敏度显著高于传统方法（t=2．9782，P〈0．05），并有良好的重复性。结论改进后的BGS方法简单灵敏，可用于甲基化标记的快速筛查。
- 赵贵森李凡郑海燕薛小琦艾红伟黄代新
- 关键词：DNA甲基化聚合酶链反应
- ATP敏感钾通道参与大鼠前脂肪细胞增殖和分化(英文)
- 2007年
- 为了探讨ATP敏感钾通道在前脂肪细胞增殖分化中作用,本实验用逆转录实时定量PCR方法检测大鼠前脂肪细胞和诱导5 d获得的脂肪细胞中该通道磺脲类受体2(sulphonylurea receptor 2,SUR2)mRNA表达,探讨该通道阻滞剂格列本脲和激动剂二氮嗪对前脂肪细胞中SUR2 mRNA表达的影响;MTT检测前脂肪细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;油红O染色法检测细胞内脂质含量;Image-Pro Plus 5．0软件测量细胞直径;逆转录PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)mRNA表达。结果显示:前脂肪细胞及诱导5 d获得的脂肪细胞均有SUR2 mRNA表达,且后者明显高于前者;格列本脲抑制前脂肪细胞SUR2 mRNA表达,剂量依赖性地促进前脂肪细胞增殖,增加G2／M +S期细胞百分比,增加细胞脂质含量,使脂肪细胞直径增大,增加PPAR-γmRNA的表达;二氮嗪在这些方面的作用与格列本脲相反。以上结果提示,ATP敏感钾通道在前脂肪细胞增殖和分化中可能起调节作用,PPAR-γ可能参与这些作用。
- 王曜晖郑海燕秦娜琳余上斌刘声远
- 关键词：脂肪细胞肥胖症
- Mena、Her-2蛋白在乳腺癌组织中的表达和意义
- 2011年
- 目的:探讨乳腺癌组织中Mena和人表皮生长因子受体2(Her-2)蛋白的表达和意义。方法:采用免疫组化方法检测60例乳腺癌组织和15例正常乳腺组织中Mena和Her-2蛋白的表达,同时分析其与临床病理资料的关系。结果:Mena蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为73.3%(44/60),Her-2蛋白的阳性表达率为38.3%(23/60),均明显高于在正常乳腺组织中(0.0%)的表达(P<0.05),且均与临床分期及腋淋巴结转移密切相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤大小、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)无关(P>0.05);Mena与Her-2蛋白的表达有相关性(r=0.398,P<0.01)。结论:Mena和Her-2可能在乳腺癌细胞的浸润和转移中起重要作用;检测Mena和Her-2蛋白的表达可能对判断乳腺癌的恶性程度、浸润转移潜能及预后判断有重要参考价值。
- 张青山徐正顺郑海燕
- 慢性哮喘豚鼠气道重塑血清电解质及主要脏器/体重的变化被引量：5
- 2006年
- 目的探讨慢性哮喘豚鼠气道重塑对电解质及机体主要脏器的影响。方法20只健康雄性豚鼠随机分为正常对照组、慢性哮喘气道重塑组。全自动生化分析仪测血清K、Na、C l、Ca、Mg、P浓度;取肺脏、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、肾上腺、脑组织称重,计算出脏器重量/体重。结果慢性哮喘气道重塑组血清Ca浓度高于正常对照组(P<0.05),Mg、P浓度低于正常对照组(P<0.05);肺脏重量/体重、脑重量/体重明显高于正常对照组(P<0.01)。结论慢性哮喘气道重塑时可出现血清Ca浓度升高,Mg、P浓度降低,并对肺组织、脑组织影响最大。
- 王向红张中乐郑海燕王颖
- 关键词：哮喘气道重塑电解质
- 改进的“天花板”组织块培养法与消化培养法培养前脂肪细胞的对比研究
- 2010年
- 目的:对比改进的"天花板"组织块培养法与消化培养法培养前脂肪细胞的优劣。方法:两种方法获得的前脂肪细胞,培养3天,显微镜下检测自分化情况,MTT、流式细胞仪检测其增殖情况和细胞周期。培养9天,绘制生长曲线。使用含胰岛素、甲状腺素T3和转铁蛋白(ITT)的无血清培养基诱导获得的前脂肪细胞5天,拍照测细胞直径,油红染色法检测其分化情况。结果:改进的"天花板"组织块培养法培养的第一代自分化存在,但是发生自分化的细胞很少。增殖和分化结果均无显著性差异。但是此法在同等情况下获得细胞较多,所需经费较少。结论:与消化培养法相比较而言,改进的"天花板"组织块培养法是一种更加简单、经济的获得大鼠前脂肪细胞的方法。
- 王曜晖秦娜琳郑海燕刘声远
- 关键词：前脂肪细胞脂肪细胞
