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基于组效关系的壮药岩黄连提取物抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性成分辨识研究被引量：7: 2016年; 目的基于高效液相色谱(HPLC)分析方法,结合人肝癌SMMC-7721细胞模型,通过组效关系研究,寻找与药效活性相关的成分。方法通过分析岩黄连正交9个提取物样品,以HPLC对岩黄连提取物进行成分表征,确定了20个共有峰。采用MTT法检测岩黄连提取物抑制人肝癌细胞SMMC-7721活性,以抑制率为评价指标,将其与HPLC图共有色谱峰的相对峰面积进行正交投影的偏最小二乘法(orthogonal partial least squares,OPLS)分析,根据变异权重系数(variable importance in the projection,VIP)辨识显著活性成分。结果结果表明,岩黄连提取物中11个共有峰与其抑制SMMC-7721细胞活性显著相关,贡献较大的共有峰依次为15>12>20>1>17>10>4>2>5>11>3,其中15号与17号共有峰分别为脱氢卡维丁与巴马汀。经细胞试验验证,发现0.20,0.25,0.30mg·ml-1脱氢卡维丁组细胞增殖抑制率分别为(69.67±1.0)%,(72.47±0.3)%,(73.08±1.1)%,0.20,0.30,0.40mg·ml-1巴马汀组细胞增殖抑制率分别为(36.14±2.8)%,(66.03±0.7)%,(70.66±0.6)%。结论通过组效关系研究发现岩黄连提取物中脱氢卡维丁和巴马汀对肝癌SMMC-7721细胞的增殖具有抑制作用,提示这两个化学物质可能是岩黄连抗肝癌作用的潜在活性成分。; 唐超玲郑华王捷宋慧陆世银程邦吴方张洪也阮俊翔梁永红苏志恒; 关键词：人肝癌细胞SMMC-7721 脱氢卡维丁

转移肿瘤干细胞在肿瘤转移中作用机制的研究进展被引量：5: 2009年; 随着肿瘤干细胞学说的提出及其在肿瘤发生中所起重要作用的不断研究,更多学者将目光聚焦在肿瘤干细胞与肿瘤转移的关系上,认为肿瘤干细胞可能是引起肿瘤转移的元凶,并进一步提出了转移肿瘤干细胞的概念。肿瘤转移是一个复杂的多因素参与的病理过程,上皮间质转化机制、基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor1,SDF-1)/趋化因子受体4[chemokine(Cys-X-Cysmotif)receptor4,CXCR4]和肿瘤干细胞及其微环境等都在肿瘤转移的过程中起到了不可低估的作用,肿瘤干细胞与它们的相互作用可能贯穿了肿瘤转移过程的始末。阐明转移肿瘤干细胞在肿瘤转移中的作用机制,将为肿瘤转移的靶向治疗提供理论依据。; 张洪也程勇; 关键词：肿瘤肿瘤干细胞肿瘤转移

白花蛇舌草多糖诱导人胃癌细胞凋亡作用的研究被引量：18: 2014年; 目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养人胃癌7901细胞增殖抑制的影响及其作用机理。方法采用MTT法测定不同浓度白花蛇舌草多糖对人胃癌7901细胞增殖的影响;流式细胞技术检测药物作用后的细胞周期和凋亡率;RT-PCR方法检测药物对人胃癌7901细胞P53和Bcl-2基因表达的影响。结果白花蛇舌草多糖能明显抑制人胃癌7901细胞的增殖,其作用48 h的IC50约为116.52 mg·L-1;流式细胞检测显示40 mg·L-1白花蛇舌草多糖联合5.0 mg·L-1顺铂组总凋亡率为69.42%,明显优于顺铂组的50.85%(P<0.01)和40 mg·L-1白花蛇舌草多糖组的26.41%(P<0.01);PCR结果显示高、中浓度白花蛇舌草多糖可使人胃癌7901细胞的bcl-2 mRNA表达量降低,P53 mRNA表达量增加。结论白花蛇舌草多糖能明显诱导人胃癌7901细胞的凋亡,与顺铂联合可产生协同作用,其作用机制可能与降低细胞bcl-2和增加P53基因表达量有关。; 苏延旭夏爱军苏志恒秦霞阮俊翔张洪也; 关键词：流式细胞技术细胞凋亡 RT-PCR

基于正交投影偏最小二乘法的当归四逆汤谱效关系研究被引量：9: 2015年; 目的:对当归四逆汤化学成分谱和延长小鼠凝血酶时间的药效进行相关谱效分析,寻找与当归四逆汤延长小鼠凝血酶时间药效显著相关的药效成分群。方法:采用正交投影偏最小二乘法(Orthogonal partial least squares,OPLS)对当归四逆汤HPLC图谱数据和凝血酶时间药效数据之间的内在联系进行谱效分析,根据变异权重参数值(Variable importance in projection,VIP)来辨识显著活性成分,并通过高效液相色谱法对相应的活性成分进行单味药材的归属及鉴定。结果:确定了17个对延长凝血酶时间贡献较大的色谱峰,经归属,有6个峰来自于当归,6个峰来自于桂枝,5个峰来自于甘草,5个峰来自于白芍,当归四逆汤中的当归、桂枝、白芍、甘草对延长凝血酶时间贡献较大。从17个色谱峰中鉴定出6个成分,分别为阿魏酸、肉桂酸、芍药苷、甘草酸、甘草苷、异甘草苷。结论:OPLS可用于复方中活性成分群的发现,为解释中药复方多成分协同作用及开发与药效相关的质量控制方法提供科学依据。; 秦霞郑华阮俊翔张洪也张秋杏苏志恒梁永红; 关键词：当归四逆汤谱效关系

广西中华眼镜蛇的蛇毒蛋白natrin对过氧化氢损伤乳大鼠原代心肌细胞钙超载及相关基因表达的影响: 2016年; 目的观察广西中华眼镜蛇（Naja naja atra）的蛇毒蛋白（natrin）对SD大鼠原代心肌细胞钙超载的影响,并探讨natrin对心肌的保护作用及对心肌钙、钾离子通道影响的可能作用机制。方法分别用natrin 5,25和125 mg·L^-1预处理原代SD乳大鼠心肌细胞24 h后,再以H2O20.3 mmol·L^-1诱导损伤,以Fluo-3为Ca^2＋荧光探针,应用激光共聚焦显微镜动态检测细胞内游离钙离子浓度变化;另外用natrin 5,25和125 mg·L^-1及维拉帕米（Ver）5 nmol·L^-1预处理24 h后,再以H2O20.3 mmol·L^-1诱导损伤15 min,FQPCR法检测心肌细胞钙离子通道Cav1.2,Calm,Ry R2和钾离子通道Kir6.2的m RNA表达情况。结果激光共聚焦显微镜检测结果发现,与正常对照组比较,H2O2作用3-15 min心肌细胞内钙荧光平均峰值增强49.37%（P〈0.01）;而给予natrin 5,25,125 mg·L^-1预处理24 h组该平均峰值分别增强27.52%,12.71%和5.15%,显著低于H2O2组（P〈0.01）。PCR结果表明,H2O2损伤组其心肌细胞Cav1.2,Calm,Ry R2及Kir6.2的m RNA表达分别为正常对照组的1.78倍,1.26倍,4.34倍和0.79倍（P〈0.01）;而给予natrin及维拉帕米干预组,细胞Cav1.2,Calm和Ry R2的m RNA表达较H2O2损伤组均显著降低（P〈0.01）,而Kir6.2的m RNA表达较H2O2损伤组显著升高（P〈0.05）。结论广西中华眼镜蛇natrin可明显减轻H2O2所致的心肌细胞钙超载,对心肌细胞过氧化损伤有良好的保护作用,其作用机制可能与降低H2O2损伤的心肌细胞的Cav1.2,Calm和Ry R2的m RNA表达及增加Kir6.2的m RNA表达有关。; 梁永红苏延旭马兴才张洪也蒋兴明陆世银苏志恒郑华宋慧; 关键词：钙超载肌细胞

LoVo细胞系中结肠癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定被引量：2: 2010年; 目的:从结肠癌LoVo细胞系中分离、鉴定具有CD44+/EPCAMhigh特异表型的结肠癌干细胞样细胞,观察其生物学行为,证实该细胞系中结肠癌干细胞样细胞的存在。方法:从普通血清培养的LoVo细胞系中以流式细胞仪分选具有CD44+/EPCAMhigh表型的细胞,接种于添加生长因子的无血清培养基中,观察其增殖过程,继而诱导分化。MTT法、流式细胞术检测CD44+/EPCAMhigh、EPCAMlow和未分选LoVo细胞的增殖能力及细胞周期分布。3种细胞接种裸鼠,比较不同细胞的成瘤率;免疫荧光技术检测小鼠次代CD44+/EPCAMhigh细胞中CD44/EPCAM的表达。结果:LoVo细胞中有17.4%的CD44+/EPCAMhigh细胞,并能在添加生长因子的无血清培养基中呈细胞球样生长,且可连续传代;在血清的诱导下,呈贴壁分化生长,其形态与未分选LoVo细胞无差别。CD44+/EPCAMhigh细胞增殖能力高于EPCAMlow细胞及未分选LoVo细胞,且细胞周期多集中在G0/G1期。以500个CD44+/EPCAMhigh细胞接种裸鼠成瘤率为90%(9/10),而1×104个EPCAMlow细胞成瘤率为0(0/10)。小鼠移植瘤中次代CD44+/EPCAMhigh细胞仍能少量表达CD44和EPCAM。结论:LoVo细胞中存在CD44+/EPCAMhigh结肠癌干细胞样细胞,CD44+/EPCAMhigh可用于结肠癌肿瘤干细胞的深入研究。; 张洪也程勇胡祥吕原武乃金; 关键词：结肠癌 LOVO细胞株肿瘤干细胞干细胞样细胞

基于^1H-NMR的当归四逆汤抗凝血作用的代谢组学研究被引量：21: 2015年; 采用1H-NMR代谢组学技术研究当归四逆汤抗凝血作用机制以及对小鼠血浆内源性代谢产物的影响。当归四逆汤灌胃给药1周后,观察当归四逆汤对小鼠凝血酶时间的影响,并采用1H-NMR技术分析小鼠血浆代谢指纹图谱,采用主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares-discrimination analysis,OPLS-DA),研究给药组与正常组之间的代谢物组差异,筛选与抗凝血作用相关的潜在生物标志物。连续当归四逆汤灌胃给药1周后,能显著延长小鼠凝血酶时间(P<0.05)。代谢组学结果显示空白组和复方组能明显区分,与空白组比较,复方组内源性代谢产物肉碱、苯丙氨酸和异丁酸显著上调(P<0.01),赖氨酸、组氨酸和胆固醇显著下调(P<0.05)。肉碱、苯丙氨酸、组氨酸和胆固醇为当归四逆汤抗凝过程中潜在代谢标志物,当归四逆汤可能通过调节脂质代谢、能量代谢和氨基酸代谢影响血小板聚集功能和组织因子、纤维蛋白酶的表达来发挥抗凝作用。; 郑华秦霞宋慧唐超玲阮俊翔张洪也陆世银梁永红苏志恒; 关键词：当归四逆汤抗凝 1H-NMR 代谢组学

基于组效关系的壮药岩黄连抑制HSC-T6细胞增殖活性成分辨识研究被引量：12: 2017年; 目的建立岩黄连提取物的化学成分与其抑制大鼠肝星状细胞(HSC-T6)作用的组效关系模型,寻找与药效显著相关的活性成分。方法采用正交设计法提取得到9个岩黄连提取物,通过HPLC法对岩黄连提取物进行成分表征,以共有峰的相对峰面积来表征其相对质量分数;MTT法测定岩黄连提取物抑制HSC-T6细胞增殖活性,以抑制率为评价指标;利用SIMCA-P11.5软件的正交投影偏最小二乘法(OPLS)分析,研究共有峰与药效的相关性,根据S-载荷图与变异权重参数(VIP)值辨识显著活性成分;通过MTT法及流式细胞仪验证所筛选成分的活性。采用细胞乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒观察所筛选成分对人正常肝细胞(HL-7702)LDH活性的影响。结果 HPLC法对9个岩黄连提取物进行表征分析结果确定了21个共有峰,其中19、18、13、20、14和16号共有峰(VIP>1)与岩黄连抑制HSC-T6细胞增殖活性显著相关,并鉴定18、19和20号共有峰代表的化合物分别为脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱。MTT结果显示不同质量浓度脱氢卡维丁、巴马汀及小檗碱对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用;流式细胞术检测结果也与MTT结果一致,脱氢卡维丁、巴马汀及小檗碱(0.10 mg/m L)处理HSC-T6细胞后的凋亡率分别为42.12%、42.22%、36.73%,明显高于对照组的1.69%(P<0.01)。细胞毒性实验发现当脱氢卡维丁终质量浓度低于0.15 mg/m L,巴马汀与小檗碱终质量浓度低于0.10 mg/m L时,对HL-7702细胞不具有明显的细胞毒作用。结论通过组效关系研究首次发现岩黄连提取物中脱氢卡维丁、巴马汀与小檗碱在体外能显著抑制HSC-T6细胞增殖并诱导其凋亡,且在有效质量浓度下不具有明显的细胞毒作用,表明这3种化学成分极有可能是岩黄连抗肝纤维化作用的潜在活性成分且在应用中具备一定的安全性;同时也提示基于组效关系的研究思路可为天然植物药活性成分的辨识提供行之有效�; 陆世银郑华程邦吴方吴金霞刘旭文唐超玲梁永红张洪也阮俊翔宋慧苏志恒; 关键词：岩黄连抗纤维化脱氢卡维丁

shRNA抑制Twist表达对结肠癌LoVo细胞系生物学行为的影响: 目的:观察shRNA抑制Twist基因表达后对结肠癌LoVo细胞生物学行为的影响,并探讨Twist与结直肠癌生长转移的关系。方法:采用半定量RT-PCR法和Western blot法从mRNA和蛋白水平分别...; 张洪也; 关键词：TWIST 结肠癌细胞系肿瘤生长; 文献传递

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