赵晨卉
- 作品数：8 被引量：6H指数：2
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- Sublytic C5b-9刺激上调KLF4促进肾小球系膜细胞生成IL-23的作用被引量：2
- 2018年
- 目的:研究转录因子KLF4调控sublytic C5b-9刺激肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)诱导促炎因子白介素-23(IL-23)生成的作用。方法:构建KLF4的短发夹状小干扰RNA(shKLF4)及过表达质粒(pIRES2-KLF4)。将pIRES2-KLF4或shKLF4转染GMC后再行sublytic C5b-9刺激,用qPCR、Western blot和ELISA法检查沉默或过表达KLF4基因后对GMC产生IL-23的影响。此外,构建IL-23基因近端启动子全长质粒,行荧光素酶报告基因实验测定沉默或过表达KLF4基因后对IL-23启动子活性的影响。结果:(1)Sublytic C5b-9刺激GMC后能明显促进IL-23的生成,而沉默KLF4基因后,由sublytic C5b-9诱导GMC产生的IL-23明显减少,但过表达KLF4后IL-23的水平则显著增加。(2)Sublytic C5b-9刺激GMC能显著上调IL-23的启动子活性,而沉默KLF4基因后由sublytic C5b-9诱导的IL-23启动子活性明显降低,但过表达KLF4后又能显著升高IL-23的启动子活性。结论:Sublytic C5b-9刺激诱导IL-23的生成可通过其刺激上调转录因子KLF4的表达而实现。
- 虞天一赵晨卉何风霞刘玉刘玉赵聃赵聃邱文张婧
- 关键词：C5B-9KLF4IL-23
- 亚溶解型C5b-9刺激GMC诱导KLF4与PCAF结合及结合部位的鉴定
- 2018年
- 目的:鉴定亚溶解型C5b-9刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)诱导Kruppel样因子4(KLF4)与P300/CBP相关因子(PCAF)相互结合以及结合部位。方法:以亚溶解型C5b-9刺激GMC,应用免疫沉淀(IP)和免疫印迹(IB)法检测KLF4与PCAF相互结合情况。另构建KLF4、PCAF过表达和KLF4、PCAF不同结构域的质粒,将质粒转染GMC,应用IP和IB鉴定KLF4与PCAF的结合部位。结果与结论:亚溶解型C5b-9刺激GMC后能够诱导KLF4与PCAF相互结合,KLF4结合于PCAF转录结合结构域,而PCAF则结合在KLF4的转录激活结构域。
- 虞天一何风霞赵晨卉余明皓赵聃刘玉宫雅娟夏露邱文张婧王迎伟
- 关键词：大鼠肾小球系膜细胞
- C5a激活Akt1-ERK1/2通路促进NSCLC细胞的增殖和迁移被引量：2
- 2021年
- 目的:探讨C5a对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖和迁移的影响及其潜在的分子机制。方法:RT-PCR和Western blot检测人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B和3种NSCLC细胞系(H1703、PC9、H1299)中C5a受体(C5aR)的表达;CCK-8和划痕实验检测C5a对PC9细胞增殖和迁移的影响;Western blot检查C5a刺激PC9细胞后蛋白激酶Akt1、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)和蛋白激酶C-α(protein kinase C-α,PKC-α)表达及磷酸化水平;用Akt1抑制剂Perifosine和ERK1/2抑制剂U0126分别处理PC9细胞后再给予C5a刺激,Western blot检测Akt1和ERK1/2的表达和磷酸化及其上下游调控关系,CCK-8和划痕实验检测Perifosine和U0126对细胞增殖和迁移的影响。结果:PC9细胞C5aR的表达水平显著高于其他细胞;C5a可明显促进PC9细胞的增殖和迁移能力;C5a刺激PC9细胞后,可显著增强Akt1和ERK1/2的磷酸化;Akt1和ERK1/2抑制剂均能明显降低C5a刺激PC9细胞后引起的细胞增殖和迁移,且Akt1抑制剂不仅能减弱Akt1的磷酸化,还能减弱ERK1/2的磷酸化,而ERK1/2抑制剂则仅能阻断其自身的磷酸化。结论:C5a刺激NSCLC细胞后可能通过激活Akt1-ERK1/2通路促进细胞的增殖和迁移。
- 何庆玲赵晨卉王伟民葛文李雅张婧王迎伟邱文
- 关键词：C5AAKT1ERK1/2迁移
- 白细胞介素17通过上调肌细胞增强因子2C促进PC9细胞程序性死亡配体1表达
- 2023年
- 目的研究白细胞介素17(IL-17)促进PC9细胞表达程序性死亡配体1(PD⁃L1)的分子调控机制。方法用IL-1750μg·L^(-1)刺激PC9细胞0(细胞对照),1,2,3,6和12 h,用逆转录PCR(RT-PCR)和Western印迹法分别检测PC9细胞肌细胞增强因子2C(MEF2C)和PD-L1 mRNA及蛋白表达。构建pIRES2⁃MEF2C及其对照质粒pIRES2-EGFP和MEF2C短发夹RNA(shMEF2C)及其对照质粒shCTR,分别转染PC9细胞48 h(shRNA质粒转染后加IL-17刺激3 h),即分pIRES2-EGFP和pIRES2-MEF2C组或shCTR,shCTR+IL-17和shMEF2C-4+IL-17组,同上检测MEF2C和PD-L1 mRNA及蛋白表达。另构建PD-L1启动子全长(pGL3-PD-L1-FL)和不同截短的pGL3-PD-L1-1~pGL3-PD-L1-4质粒。先将pGL3-PDL1-FL与pIRES2⁃MEF2C共转染PC9细胞48 h或与shMEF2C-4共转染48 h加IL-17刺激3 h,用双荧光素酶报告基因实验测定PD-L1-FL启动子活性(分组同上)。此外,将对照pGL3-basic和pGL3-PD-L1-FL及pGL3-PD-L1-1~pGL3-PD-L1-4截短启动子质粒分别转染PC9细胞48 h再加IL-17刺激3 h或与pIRES2⁃MEF2C共转染PC9细胞后再测PD-L1启动子活性。结果与细胞对照组相比,IL-17刺激2 h,MEF2C和PD-L1 mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),3 h达峰(P<0.01)。与pIRES2⁃EGFP组相比,pIRES2⁃MEF2C组PD-L1 mRNA(P<0.05)和蛋白表达(P<0.01)及启动子活性(P<0.05)明显升高;与shCTR组相比,shCTR+IL-17组上述指标均显著升高(P<0.05,P<0.01),但shMEF2C-4+IL-17组则明显低于shCTR+IL-17组(P<0.01)。此外,与pGL3-basic组比,IL-17刺激或过表达MEF2C可增加pGL3-PD-L1-FL,pGL3-PD-L1-1,pGL3-PD-L1-2和pGL3-PD-L1-3启动子活性(P<0.05,P<0.01),但pGL3-PD-L1-3和pGL3-PD-L1-4启动子活性则显著低于pGL3-PD-L1-FL组(P<0.05,P<0.01),提示PD-L1启动子这2个区域含有MEF2C的结合部位。结论IL-17通过上调MEF2C表达促进PC9细胞PD-L1表达,其机制可能与MEF2C结合PD-L1启动子的相应部位有关。
- 吴宁霞应帅葛文李雅阮玉婷王伟民李玉张婧邱文王迎伟赵晨卉
- 关键词：非小细胞肺癌白细胞介素17
- ZBTB3表达对胶质母细胞瘤细胞增殖和克隆形成的调控
- 2023年
- 目的:检查人胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)组织和细胞系中ZBTB3的表达,并探讨ZBTB3对GBM细胞增殖和克隆形成的影响及其调控机制。方法:通过GEPIA2数据库分析GBM患者肿瘤组织中ZBTB3的表达情况。RT-PCR、qPCR和Western blot检测GBM细胞系(U251、U373、U87)中ZBTB3的mRNA和蛋白表达水平,筛选出ZBTB3表达最高的U87细胞。CCK-8和克隆形成实验检测沉默ZBTB3基因对U87细胞增殖和克隆形成的影响。用p38MAPK、AMPK、Akt1抑制剂处理U87细胞后,Western blot检测p38MAPK、AMPK、Akt1的磷酸化水平,RT-PCR、qPCR和Western blot测定ZBTB3的mRNA和蛋白表达水平,CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成。结果:GBM患者肿瘤组织中ZBTB3的表达显著高于正常组织。U251、U373和U87细胞中均可见ZBTB3的表达,其中U87细胞表达最高。沉默ZBTB3基因能明显抑制U87细胞的增殖和克隆形成。抑制AMPK既能显著降低U87细胞ZBTB3的表达水平,又可明显减弱U87细胞增殖和克隆形成。结论:GBM组织和细胞系中ZBTB3的表达显著上调,GBM细胞中AMPK活化并上调ZBTB3基因的表达,促进GBM细胞的增殖和克隆形成。
- 王伟民赵晨卉倪思琦何庆玲阮玉婷吴宁霞张婧王迎伟邱文
- 关键词：胶质母细胞瘤AMPK增殖克隆形成
- LINC01518对IL-17诱导非小细胞肺癌细胞增殖的影响被引量：1
- 2023年
- 目的:探讨长链非编码RNA01518(long intergenic non-protein coding RNA 01518,LINC01518)基因过表达或沉默对白介素(interleukin,IL)-17诱导非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖的影响。方法:Western blot检测NSCLC细胞系(PC9、H1299和H1975)IL-17受体A(IL-17 receptor A,IL-17RA)的表达后,用IL-17刺激H1299和PC9细胞不同时间,利用CCK-8实验测定细胞的增殖水平。LncRNA芯片筛查IL-17刺激H1299和PC9细胞3 h后LncRNA上调的结果,从中选取某些上调的LncRNA进行RT-PCR和Real-time PCR验证。此外,将构建的pcDNA3.1/LINC01518或shLINC01518质粒转染H1299细胞,用CCK-8、EdU和克隆形成实验检查细胞的增殖情况。结果:3种NSCLC细胞系均有IL-17RA的表达。实验发现,IL-17刺激H1299和PC9细胞后能提高其增殖水平,同时受刺激的细胞内LINC01518的上调最为显著,且过表达LINC01518可提高H1299细胞的增殖水平,而沉默LINC01518基因则能抑制IL-17诱导的细胞增殖。结论:LINC01518能促进IL-17诱导的H1299细胞增殖。
- 阮玉婷李雅葛文吴宁霞应帅王伟民李玉张婧邱文王迎伟赵晨卉
- 关键词：NSCLCIL-17细胞增殖
- IL-17诱导的p300调控NSCLC细胞迁移、侵袭和MMP2表达的作用
- 2022年
- 目的:探讨IL-17刺激非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞上调腺病毒E1A相关300 kDa蛋白(adenoviral E1A binding protein of 300 kDa,p300)调控其细胞迁移、侵袭及生成基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)的作用。方法:用IL-17刺激NSCLC细胞(H1299)后行划痕和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭的变化。然后用Western blot检查p300和MMP2蛋白的表达。同时,将p300过表达质粒(pcDNA3.1/p300)或shp300干扰质粒分别转染H1299细胞(后者再行IL-17刺激),用前述方法测定细胞迁移、侵袭和MMP2的表达。结果:用IL-17刺激H1299细胞后能显著诱导其迁移和侵袭,并上调p300和MMP2的表达。过表达p300可增强细胞的迁移与侵袭,并提高MMP2的生成,但沉默p300基因后由IL-17诱导的细胞迁移和侵袭能力及MMP2的表达均显著降低。结论:IL-17上调的p300能促进H1299细胞的迁移与侵袭以及MMP2基因的表达。
- 李雅葛文张志伟蒋馨怡何庆玲阮玉婷吴宁霞应帅王伟民张婧邱文王迎伟赵晨卉
- 关键词：IL-17NSCLCP300MMP2
- 表观遗传学修饰与非小细胞肺癌被引量：1
- 2015年
- 在非小细胞肺癌（ NSCLC）中，基因异常甲基化是其主要特征。原癌基因的低甲基化有致癌潜能，而抑癌基因的高甲基化也可诱发肿瘤。此外，组蛋白乙酰化和去乙酰化修饰的平衡与肿瘤的形成密切相关。组蛋白乙酰化酶能直接乙酰化增生相关基因，导致细胞的增殖转化；而组蛋白去乙酰化酶也能改变某些基因组蛋白的乙酰化水平，影响NSCLC的发生与发展。由此可见，这些表观遗传学的异常在NSCLC的形成和发展中起到了极为重要的作用。
- 赵晨卉束永前
- 关键词：DNA甲基化组蛋白类
