周健
- 作品数：15 被引量：24H指数：2
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- 降钙素基因相关肽通过ERK1/2信号通路对人血管内皮细胞增殖的影响
- 目的:探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,并从ERK1/2信号通路角度初步探讨其可能的机制.
方法:实验分为4组,分别为空白对照组、CGRP组、CGRP+ CGRP...
- 周健陀泳华夏立恒张永涛郭小磊王钊梅刚金丹
- 关键词：脐静脉血管内皮细胞增殖降钙素基因相关肽蛋白激酶信号通路
- 文献传递
- 降钙素基因相关肽对人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的影响及机制研究被引量：9
- 2012年
- 目的组织工程骨的神经化能有效促进支架材料内血管生成,修复骨缺损。研究降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖与迁移的作用,进一步揭示组织工程骨的神经化促血管生成机制。方法体外分离获取HUVECs,并通过血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)与CD31抗原鉴定,取第1代细胞用于实验。实验分为6组,分别以0(A组)、1×10—12(B组)、1×10—11(C组)、1×10—10(D组)、1×10—9(E组)、1×10—8mol/L(F组)浓度CGRP干预HUVECs。采用细胞免疫荧光观察HUVECs的CGRP1受体(CGRP1 receptor,CGRP1R)表达情况,AlarmarBlue法动态检测各组HUVECs增殖率,Transwell小室检测各组HUVECs的迁移能力,ELISA法检测HUVECs分泌VEGF的水平,Westernblot法检测其局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达。结果分离的细胞通过形态学及vWF、CD31免疫荧光鉴定为HUVECs,并可见CGRP1R在细胞质和细胞膜表达。CGRP呈时间-浓度依赖性刺激HUVECs增殖;B～F组各时间点细胞增殖能力均高于A组(P<0.05),F组各时间点细胞增殖能力最高。B～F组迁移细胞数均显著高于A组(P<0.05),最大增幅达3倍以上。B～F组VEGF分泌量均显著高于A组(P<0.05);C、D组促进细胞分泌VEGF的能力最强。Western blot检测示,与A组相比,B～F组CGRP刺激HUVECs 3、7、10 d后,FAK表达明显增加(P<0.05)。结论 CGRP对HUVECs的增殖和迁移有直接促进作用,可能作用机制为CGRP能促进VEGF分泌和增加FAK的表达。
- 陀泳华郭小磊张鑫鑫王钊周健张永涛夏立恒文军金丹
- 关键词：降钙素基因相关肽血管生成细胞迁移细胞增殖骨组织工程
- 双环路振荡灌注式生物反应系统
- 本发明涉及应用于种子细胞与生物材料共培养的双环路振荡灌注式生物反应系统。该生物反应系统包括：支架灌注培养装置，其内部容纳有多个用于种子细胞和生物材料共培养的支架；储液瓶，用于将瓶内的培养液通过输液管输送到支架；回收瓶，用...
- 金丹夏立恒余斌郭小磊王磊周健张永涛梅刚
- 文献传递
- 神经肽Y促进大鼠骨髓间充质干细胞分化过程中成骨特异性蛋白的表达
- 王钊金丹陀泳华郭小磊文军夏立恒周健张永涛
- 神经肽Y受体与成骨分化的研究进展
- 2012年
- 创伤、感染等各种原因造成的骨缺损、骨不连等一直是威胁人类生命健康的医学难题，因此，明确骨再生、重塑过程的生理学机制是解决这一难题的基础和出发点。近年来随着此方面研究的深入，逐渐发现神经因素在骨组织再生中起到非常重要的作用。
- 周健金丹
- 关键词：神经肽Y受体成骨分化生理学机制骨组织再生人类生命神经因素
- 降钙素基因相关肽通过ERKl/2信号通路对人血管内皮细胞增殖的影响被引量：1
- 2013年
- [目的]探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,并从ERK1/2信号通路角度初步探讨其可能的机制。[方法]实验分为4组,分别为空白对照组、CGRP组、CGRP+CGRP8-37组、CGRP+PD98059组。AlarmarBlue法检测各组人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的增殖变化情况;免疫印迹技术观察CGRP诱导后ERKl/2的磷酸化,及CGRP8-37、PD98059对ERK1/2磷酸化的影响。[结果](1)CGRP可诱导HUVECs细胞增殖,该作用可被CGRP8-37和PD98059阻断;(2)CGRP可时间依赖性地诱导HU-VECs细胞ERKI/2的磷酸化,CGRP8-37和PD98059可减弱其作用。[结论]CGRP可诱导HUVECs细胞增殖,ERK1/2信号通路参与其调控机制。
- 周健陀泳华夏立恒张永涛郭小磊王钊梅刚金丹
- 关键词：降钙素基因相关肽细胞增殖ERK1/2通路
- 降钙素基因相关肽促进大鼠BMSCs迁移及VEGF的表达被引量：11
- 2011年
- 目的观察外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在大鼠BMSCs迁移中的作用及对VEGF、血管黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)表达的影响,探讨CGRP通过BMSCs促进血管生成的作用机制。方法全骨髓法分离、培养SD大鼠BMSCs,采用Western blot法于传代培养1、2、3周时检测BMSCs中CGRP受体(CGRP receptor,CGRPR)蛋白的表达。使用浓度为1×10-8 mol/L的CGRP作用于BMSCs作为实验组,单纯BMSCs作为对照组,在培养72 h时采用细胞趋化实验检测CGRP对BMSCs迁移的影响;在培养1、3、5、7 d采用实时荧光定量PCR检测CGRP作用后VCAM-1 mRNA的表达变化,采用免疫细胞化学染色、Western blot法检测CGRP作用后VEGF的表达变化。结果 Western blot检测示BMSCs稳定表达CGRPR,2周时表达最高。细胞趋化实验显示,实验组CGRP刺激后穿膜迁移细胞数(3.20±1.77)个/HP,较对照组(1.11±0.49)个/HP明显增多(t=4.230,P=0.001)。实时荧光定量PCR检测示,实验组VCAM-1 mRNA表达随时间延长逐渐增加,7 d时最高;实验组3、5、7 d的VCAM-1 mRNA表达量与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。免疫细胞化学染色示,培养1、3 d两组均无阳性染色;培养5、7 d实验组VEGF染色呈阳性,对照组无阳性染色。Western blot检测示,培养1、3 d两组均未检测到VEGF蛋白表达;培养5、7 d实验组VEGF蛋白表达量均明显高于对照组(P<0.05);实验组5 d的VEGF蛋白表达量明显高于7 d(P<0.05)。结论 CGRP能促进BMSCs迁移及VEGF表达,这可能是CGRP调节骨内部血流变化而影响骨代谢的机制之一。
- 王钊金丹陀泳华郭小磊文军周健夏立恒张永涛
- 关键词：降钙素基因相关肽BMSCS细胞迁移VEGF
- CGRP与VEGF对内皮细胞成血管的作用比较研究被引量：1
- 2012年
- [目的]比较降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)与血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对血管内皮细胞增殖、迁移、体外成血管作用的大小。[方法]体外分离培养获取脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)。并通过血管性血友病因子(von Willebrandfactor,Vwf)与CD31抗原鉴定。实验分9组,(10-12～10-8)CGRP,(5～20 ng/ml)VEGF165,另设置一个空白对照组。采用细胞免疫荧光观察HUVECs的CGRP受体(calcitonin gene-related peptide receptors,CGRPR)表达情况,alar-mar Blue法动态检测各组HUVECs的增殖率,Transwell小室检测各组HUVECs的迁移能力,采用体外成管实验检测各组促血管生成作用大小。Q-PCR检测CGRP和VEGF165刺激细胞时,CGRP受体的mRNA表达情况。[结果]CGRP及VEGF165时间-浓度依赖性促进HUVECs增殖,VEGF165促内皮细胞增殖的能力强于CGRP,差异有显著性。CGRP及VEGF165都能明显促进HUVECs迁移及促进HUVECs在基质胶中形成毛细血管样结构。并且两者的最大作用基本相当。CGRP与VEGF165都能促进内皮细胞中CGRP受体表达水平增加。但是CGRP促CGRP受体的生成作用明显强于VEGF165。[结论]CGRP是强的促血管生成因子,其促血管生成的作用与低浓度(5～20 ng/ml)VEGF165相当。
- 陀泳华郭小磊文军周健夏立恒张永涛金丹
- 关键词：降钙素基因相关肽血管内皮生长因子细胞迁移血管生成
- P物质对骨髓基质干细胞增殖分化的影响及其与Wnt/β-链蛋白信号转导通路关系的初步研究被引量：2
- 2014年
- 目的 探讨P物质（SP）对骨髓基质干细胞（BMSCs）增殖、分化的影响,并从Wnt/ β-链蛋白信号转导通路角度探讨其可能机制. 方法 取SD大鼠第3代BMSCs,根据加入的刺激物不同将其分为4组（n=3）：SP组、SP ＋SP受体拮抗剂组、SP＋ Wnt/ β-链蛋白信号转导通路抑制剂1（DKK1）组、对照组（加入等量磷酸盐缓冲液）.培养1、3、5、7、9 d采用Alarmar Blue法检测各组BMSCs的增殖情况;于培养7、14d应用荧光定量核酸扩增（Q-PCR）法检测各组碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素基因的表达;于培养1、3、5、7 d采用Western blot法检测各组Wnt/β-链蛋白信号转导通路相关蛋白β-链蛋白、C-myc的表达;于培养3d应用免疫荧光法检测各组β-链蛋白的核转移情况.结果 于培养l、3、5、7、9d,SP组细胞数量大于SP＋ SP受体拮抗剂组、SP＋ DKK1组和对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.于培养14d,SP＋ SP受体拮抗剂组、SP＋ DKK1组和对照组的ALP、骨钙素基因表达量均明显低于SP组,差异有统计学意义（P＜0.05）.于培养1、3、5、7 d,SP＋ SP受体拮抗剂组、SP＋ DKK1组及对照组的C-myc蛋白的表达量均低于SP组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;培养3、5d,SP＋SP受体拮抗剂组、SP＋ DKK1组和对照组的β-链蛋白的表达量均低于SP组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.于培养3d,SP＋ SP受体拮抗剂组、SP＋ DKK1组和对照组β-链蛋白入核量均少于SP组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 SP可促进BMSCs的增殖与分化,Wnt/β-链蛋白信号转导通路可能参与调控.
- 金丹梅刚付苏邹振吕夏立恒张永涛周健
- 关键词：P物质骨髓细胞细胞增殖
- 双环路振荡灌注式生物反应系统
- 本实用新型涉及应用于种子细胞与生物材料共培养的双环路振荡灌注式生物反应系统。该生物反应系统包括：支架灌注培养装置，其内部容纳有多个用于种子细胞和生物材料共培养的支架；储液瓶，用于将瓶内的培养液通过输液管输送到支架；回收瓶...
- 金丹夏立恒余斌郭小磊王磊周健张永涛梅刚
- 文献传递
