苗苗
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：山西医科大学第二医院更多>>
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- 20S蛋白酶体β5亚单位基因沉默对人骨髓间充质干细胞增殖能力的影响被引量：4
- 2015年
- 目的：应用基因沉默技术,观察下调20S蛋白酶体β5亚单位（PSMB5）对人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）增殖能力的影响及其潜在机制,寻求调节干细胞活力的关键靶点.方法：构建PSMB5-shRNA慢病毒载体感染早期hBMSCs,根据感染条件不同将细胞分为绿色荧光蛋白（GFP）对照组和shRNA组.倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR和免疫印迹检测PSMB5沉默效率,荧光分光光度法检测蛋白酶体活性;BrdU掺入实验观察PSMB5基因沉默对早期hBMSCs增殖潜能的影响,流式细胞术检测细胞周期分布,免疫印迹检测细胞周期相关蛋白1（cyclin D1）及其激酶CDK4的表达变化.结果：慢病毒感染早期hBMSCs 72 h可见约95％以上细胞表达绿色荧光蛋白.shRNA组PSMB5 mRNA和蛋白表达水平较GFP对照组分别降低93.31％＆#177;0.59％和56.83％＆#177;13.31％,且蛋白酶体活性较对照组降低37.47％＆#177;0.41％.此外,shRNA组BrdU阳性率26.14％＆#177;8.13％较对照组49.53％＆#177;11.18％显著降低,G1期细胞较GFP对照组增多,而S期和G2/M期细胞却较对照组减少,Cyclin D1和CDK4的表达水平分别下降54.55％＆#177;7.76％和63.26％＆#177;15.76％.结论：PSMB5基因沉默能够下调Cyclin D1和CDK4的表达,导致细胞G1/S转换停滞,影响hBMSCs增殖潜能.
- 张伟刘雪芹苗苗宋慧芳杨桂姣陆利
- 关键词：人骨髓间充质干细胞基因沉默增殖
