李晓燕
- 作品数：39 被引量：218H指数：6
- 供职机构：西北农林科技大学农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目西北农林科技大学唐仲英育种基金更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学生物学医药卫生更多>>
- 黑麦籽粒Waxy蛋白亚基的高效分离与鉴定技术体系的构建被引量：1
- 2013年
- 【目的】构建用于制备级分离及高效鉴定黑麦籽粒Waxy蛋白亚基的技术体系,为该亚基理化特性的分析、功能的发掘及Waxy种质的快速筛选等提供理论参考。【方法】设计特异引物从灌浆期间的奥地利黑麦籽粒cDNA中克隆获得Waxy,并进行体外表达;利用DuoFlow对籽粒蛋白提取物进行纯化,对峰值收集物、原核表达产物及其Ni柱纯化的重组Waxy蛋白进行SDS-PAGE分离,挖取蛋白条带进行MALDI-TOF质谱鉴定,结合经由基因序列所推导的氨基酸序列,确定回收产物的Waxy蛋白属性;在优化电泳条件的基础上构建针对Waxy蛋白的毛细管电泳体系;同时,利用部分黑麦品种对DuoFlow及CE体系的有效性进行验证。【结果】核苷酸序列分析表明,从奥地利黑麦cDNA中克隆获得一条覆盖Waxy全长的编码序列(GenBank登录号:KF559182),其理论编码产物约为60 kD;利用DuoFlow Q1阳离子交换柱,以低浓度Tris-Hcl(20 mmol·L-1Tris-Hcl,pH 9.5)进行蛋白挂柱,高浓度NaCl(20 mmol·L-1Tris+1 mol·L-1NaCl,pH 9.5)进行蛋白洗脱,214 nm波长检测,实现了对籽粒Waxy蛋白的DuoFlow高效分离;纯化产物的SDS-PAGE条带大小、质谱鉴定肽段与黑麦、小麦Waxy蛋白序列相似性的统计结果表明,DuoFlow峰值回收产物具有黑麦Waxy亚基一致的特征序列,故属于Waxy蛋白;以DuoFlow纯化产物为标准样,以0.05 mmol·L-1硼砂+15%乙腈+1%SDS溶液(pH 9.5)为缓冲液,采用分离电压20 kV,温度25℃,检测波长214 nm,压力进样,0.5 psi×5 s,在11—12 min处获得峰值约12 mAU单一主峰,图形清晰,基线水平,从而构建了Waxy蛋白的CE鉴定体系,且籽粒Waxy蛋白提取物能直接用于对该亚基的检测;同时,利用黑麦品种对上述体系的验证结果表明,DuoFlow及CE体系适于对Waxy亚基的高效分离与通量检测。【结论】从奥地利栽培黑麦cDNA文库中克隆获得Waxy完整编码序列,构建了能特异分离黑麦籽粒Waxy蛋白的DuoFlow制备级纯化体系,
- 孟敏董剑高翔赵万春李晓燕陈其皎陈良国石引刚
- 关键词：WAXY蛋白毛细管电泳
- 小麦TaCP3基因的克隆及其参与非生物胁迫的表达分析被引量：4
- 2019年
- 半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease,CP)是植物中重要的蛋白酶家族之一,广泛参与植物的各种生理过程;TaCP3属于papain-like(木瓜蛋白酶)家族的半胱氨酸蛋白酶,在小麦的生长发育及抗逆中起到重要作用。为研究TaCP3基因的结构特征,以及在干旱、高盐、低温和高温胁迫下的表达情况,从小麦抗旱品种西农538中克隆了TaCP3基因,该基因仅含1个1125bp的开放阅读框,编码374个氨基酸,在蛋白氨基端有一个28个氨基酸残基组成的信号肽,羧基端具有木瓜蛋白酶亚家族的保守结构域。生物信息学分析表明,TaCP3与大麦和山羊草半胱氨酸蛋白酶基因相似性最高。同时,本研究构建了pcold-TF/TaCP3原核表达载体,通过转化大肠杆菌BL21(DE3),成功表达了TaCP3重组蛋白,分子量约为40kD。qRT-PCR结果表明,TaCP3的表达对干旱、高盐、低温和高温胁迫均有响应,初始都呈先降后升的趋势;且对干旱胁迫有强烈的正向响应。
- 张炳慧高翔杨明明杨明明王宪国姚晓露李晓燕李晓燕赵万春
- 关键词：小麦基因克隆原核表达非生物胁迫
- 普通小麦TaTFL1基因的克隆及表达特性研究
- 2018年
- TFL1基因是植物花序分生组织特异性基因,其主要功能是维持植物营养生长和花序的无限生长。本研究利用同源克隆技术获得了TaTFL1部分同源基因的cDNA序列和启动子序列,并利用生物信息学技术对其序列组成、结构特征及进化关系进行了初步分析,并对启动子区顺式作用元件进行了预测,进一步通过实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术对该基因在中国春不同组织以及各组织不同发育阶段的表达情况进行分析。结果表明,TaTFL1蛋白为疏水性蛋白,无信号肽,定位于细胞质中;进化分析显示,TaTFL1与单子叶植物的亲缘关系较近;在启动子中存在着大量的光响应元件,以及分生组织表达相关的顺式调控元件(CAT-box)。qRT-PCR结果表明,TaTFL1基因在各组织中皆有表达,且均表现为花前表达量明显高于花后;在叶片中表达量较低,而在花前的穗下茎中表达量最高,在幼芽、颖壳和籽粒中也有微弱的表达;不同发育阶段的幼穗中,TaTFL1在1～2cm的幼穗中表达量最高,随着幼穗的发育呈现出下降的趋势,且与其他组织相比始终维持着较高的表达水平。综上所述,TaTFL1蛋白具有TFL1家族的典型结构,在小麦幼穗发育初期发挥重要作用。
- 何庆梦高翔杨明明杨明明李晓燕董剑
- 关键词：小麦基因克隆
- 低分子量谷蛋白亚基在小麦品种形成过程中的变化特征被引量：1
- 2013年
- 【目的】研究普通小麦品种选育过程中低分子量谷蛋白亚基(LMW-GS)的变化特性,理解该基因家族成员多样性的起源,并为小麦品质改良提供参考。【方法】以3套小麦高代杂交品系(F5/F6)为材料,利用毛细管电泳(CE)技术从储藏蛋白水平鉴定LMW-GS亚基的变化;根据GenBank中已公布的LMW-GS编码序列设计特异性引物,进行PCR扩增、克隆、测序及序列分析。【结果】毛细管电泳结果表明,与亲本相比,高代供试品系均保持了相对稳定的LMW-GS数目,但多个亚基在籽粒中的最终含量却发生明显变化;同时,测试品系还产生了亲本所不具有的新条带。对克隆获得的54条序列(GenBank登录号KC222070-KC222121和KC478714-KC478715)进行序列分析,均具有LMW-GS的典型结构,包括相对保守的信号肽、存在丰富变异的中间重复区及保守的C-端,因此属于LMW-GS基因家族成员;子代与对应亲本的相似性分析表明,3套材料中均存在极端保守序列,子代序列与其相应父本序列完全一致,且都属于LMW-m型亚基;相对保守序列所占比例最大,由于微弱的SNPs,双亲都充当变异序列的供体;蛋白质序列分析还揭示了额外Cys亚基的产生过程。此外,还发现含10个或11个半胱氨酸(Cys)残基的LMW-GS。Cys残基的变异主要发生在C-端Ⅲ区,只有1条序列的Cys变异发生在C-端Ⅱ区。【结论】小麦品种选育过程,父源性的LMW-m型低分子量谷蛋白亚基较其它类型亚基更趋于序列的保守,SNPs则是产生LMW-GS多样性的主要动力。
- 杨芮高翔陈其皎李晓燕董剑孟敏赵万春石引刚陈良国
- 关键词：小麦毛细管电泳多样性
- 陕北白绒山羊常用饲料干物质和粗蛋白质瘤胃降解特性研究被引量：3
- 2013年
- 本试验旨在研究陕北白绒山羊常用4种精料和5种粗饲料的瘤胃降解特性。选用3只装有永久性瘤胃瘘管的陕北白绒山羊,采用尼龙袋法测定9种饲料原料的干物质(DM)和粗蛋白质(CP)瘤胃消失率与有效降解率。结果表明:豆腐渣在48 h的DM降解率显著高于其他3种精料(P<0.05),谷糠和豆腐渣DM有效降解率显著高于其他2种精料(P<0.05);粗饲料在72 h的DM降解率和有效降解率均以柠条最高,醋糟最低。精料CP有效降解率从大到小依次是谷糠>酵母>棉籽粕>豆腐渣,且差异显著(P<0.05)。粗饲料在72 h的CP消失率和CP有效降解率以柠条最高。综合来看,精料中谷糠的降解性能最高;粗饲料中柠条的降解性能最高。
- 李晓燕雷耀庚李占臻屈雷陈玉林杨雨鑫
- 关键词：饲料原料瘤胃降解陕北白绒山羊
- 水稻阶段性返白突变体的鉴定和候选基因分析被引量：10
- 2010年
- 从粳稻品种中花11的后代中发现了一个叶色突变体sgra,该突变体幼苗期叶色正常,而6~8叶期以后新生叶白化,随后白化叶转绿.突变体的遗传分析表明,该突变体表型受1对隐性核基因控制.利用籼粳杂交F2群体对突变位点进行了基因定位,将其定位于水稻第11染色体的2个标记ID343-11和PSM415之间,遗传距离分别为0.9和1.0cM.随后,利用已公布的水稻序列和SSR标记,在两标记间发展了9对新的标记,进一步将SGRA基因定位在IDM-2和RM26739之间,物理距离约为17.6kb.对野生型和突变体候选区段基因组DNA测序分析表明,候选基因编码一个ABC转运蛋白.
- 张向前李晓燕朱海涛王涛解新明
- 关键词：水稻叶色突变体ABC转运蛋白INDEL标记
- 小麦NAC转录因子的基因克隆与序列分析被引量：6
- 2011年
- 为了深入研究小麦中NAC家族转录因子基因,针对NAC基因家族成员,设计了覆盖其全长编码区的1对特异引物,从陕253小麦品种中克隆了2条大小分别为1 463、1549 bp的片段,命名为TaNAC2、TaNAC4(GenBank登录号为HQ872050-HQ872051)。序列分析表明,这2个序列包含典型NAC的完整编码序列,包括两个内含子,具有完整的开放阅读框;推导的氨基酸序列分别为383、405个,这2个基因在N-端均具有NAC基因的典型DNA结合结构域,即NAC结构域,且氨基酸序列在该结构域的A、B、C、D、E5个亚区高度保守,仅在C亚区出现一个氨基酸的差异L-M,而且在C-D区出现罕见的半胱氨酸变异,此发现对于小麦品质的研究非常重要。同时发现这2个NAC类转录因子都不含有核定位信号(NLS),但是有相关的转录调控功能区域。通过系统进化树分析,证实克隆序列属于NAC基因家族成员,并且发现的TaNAC4属于NAC转录因子家族的NAM亚组,TaNAC2属于NAC转录因子家族的CUC亚组。
- 史红飞高翔陈其皎董剑赵万春李晓燕王延鹏臧闻李志业
- 关键词：小麦陕253NAC转录因子基因克隆
- 小麦PPO基因等位变异及面粉白度特性分析被引量：4
- 2012年
- 利用分子标记PPO18和STS01对173份供试小麦品种Ppo2-A和Ppo2-D位点的等位基因变异进行分子检测,并根据品种间不同PPO等位基因组合类型将供试小麦品种进行分类,同时对多酚氧化酶PPO活性进行生化测定及面粉白度测定分析。结果表明,173份小麦品种共检测出Ppo-A1b/Ppo-D1a、Ppo-A1b/Ppo-D1b、Ppo-A1a/Ppo-D1a和Ppo-A1a/Ppo-D1b4种等位基因组合类型,且各基因组合类型出现的频率分别为38.7%、13.9%、35.8%和11.6%;供试小麦品种不同位点PPO等位基因出现的频率差异较大,2A位点等位基因Ppo-A1a、Ppo-A1b出现频率相近,而2D位点等位基因Ppo-D1a出现频率是Ppo-D1b的3倍;所测定的173份小麦品种PPO活性均值为117.3A475/(min.mg),其中低PPO品种所占比例较高;4种基因组合类型PPO活性顺序为Ppo-A1a/Ppo-D1b>Ppo-A1a/Ppo-D1a>Ppo-A1b/Ppo-D1b>Ppo-A1b/Ppo-D1a,且彼此间差异均达到显著水平(P<0.05);供试小麦的面粉白度均值为73.0%,达到国家面粉白度等级一级标准的品种38份,占供试小麦总数的22.0%;其中基因组合为Ppo-A1a/Ppo-D1b的品种面粉白度显著低于其他3种基因组合。总体来看,供试的小麦品种间面粉白度及籽粒PPO活性变异范围较广,面粉白度与PPO活性呈显著负相关,且控制PPO的主效基因的等位变异对PPO活性及面粉白度均有显著影响。对供试小麦品种的面粉白度、PPO活性表现及PPO等位基因组合类型进行综合考察,筛选出23份具有高白度低PPO活性的小麦品种,可以作为高白度低PPO活性小麦育种的亲本材料。
- 王蕾高翔陈其皎李晓燕董剑赵万春魏慧石引刚陈良国
- 关键词：小麦品种PPO活性面粉白度
- 簇毛麦——用于小麦改良的一种野生植物被引量：4
- 2012年
- 将小麦野生近缘属的有益性状基因导入普通小麦(Triticum aestivum)已成为目前小麦品种改良的重要而有效的途径之一。簇毛麦(Dasypyrum villosa)常被用作改良小麦的一种有效的基因资源,其具有耐寒、分蘖力强、生长繁茂、多小花、籽粒蛋白质含量高、耐盐抗旱和抗多种小麦主要病害等特性。本研究对簇毛麦染色体及其组型和带型、簇毛麦与小麦属的亲缘关系、簇毛麦与小麦属的杂交以及簇毛麦在普通小麦改良中的应用等方面的研究进展进行回顾总结,以期为更好地对簇毛麦的开发利用提供依据。
- 赵万春董剑陈其皎李晓燕高翔石引刚陈良国
- 关键词：贮藏蛋白基因资源抗病虫
- 反向遗传技术在禽流感发病机制研究中的应用
- 2009年
- 禽流感是禽流行性感冒的简称，它是一种由甲型流感病毒的一种亚型（也称禽流感病毒）引起的传染性疾病，被国际兽疫局定为甲类传染病，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟。按病原体类型的不同．禽流感可分为高致病性、低致病性和非致病性禽流感三大类。非致病性禽流感不会引起明显症状，仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状，
- 张媛李晓燕赵光辉
- 关键词：禽流感反向遗传技术发病机制
