李飞
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 金黄色葡萄球菌肠毒素B基因在大肠杆菌中的克隆及表达被引量：5
- 2016年
- 目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增后,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切,并与做相应酶切的pET-28α(+)连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序,用IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot印迹鉴定表达产物。结果成功扩增出SEB基因,基因大小为801bp,重组PET-28α(+)-SEB双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEB在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99%。经IPTG诱导后,pET-28α(+)-SEB/BL21在相应的相对分子质量(35×103)可见融合蛋白以包涵体形式表达,免疫印迹在相应分子量检测到目的蛋白。结论克隆了SEB基因,并成功在大肠杆菌BL21中以包涵体形式表达,为肠毒素B应用研究奠定了基础。
- 李飞周帅董慧黄艳梅梁秉绍李娟龙燕王洁琳谢永强杨镒宇周珍文
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B克隆
- 金黄色葡萄球菌LDH多克隆抗体制备及其交叉反应性被引量：3
- 2016年
- 目的:在原核载体中表达、纯化金黄色葡萄球菌乳酸脱氢酶,免疫小鼠获得多克隆抗体,使用多克隆抗体分析与其它菌种的交叉反应性。方法:复苏p ET28a-ldh/Bl21重组菌,IPTG诱导重组融合蛋白表达、以抗HIS标签的单克隆抗体进行western-blot鉴定重组蛋白。使用纯化的重组蛋白以及相应的佐剂免疫小鼠,利用ELISA测定血清抗体效价,并使用小鼠抗血清进行免疫印迹法鉴定重组蛋白的反应原性及其与金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌的交叉反应性。结果:SDS-PAGE电泳在39 KDa处可见目的条带,免疫印迹法验证了重组LDH的表达,纯化后获得2.8 mg重组蛋白。纯化蛋白免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫应答,ELISA检测特异性Ig G效价为1:50000,western-blot鉴定显示所制备的多克隆抗血清能分别识别金黄色葡萄球菌重组及天然乳酸脱氢酶,但不识别表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌中天然乳酸脱氢酶。结论:纯化的LDH具有良好的免疫活性,免疫小鼠获得高滴度的多克隆抗体。使用多克隆抗体western-blot显示与其它菌种LDH不存在交叉反应性,为后续使用该重组蛋白进行金黄色葡萄球菌感染的诊断研究奠定基础。
- 梁秉绍杨丽媛董慧李飞黄艳梅陈吟霜谢永强钟华敏周珍文
- 关键词：金黄色葡萄球菌乳酸脱氢酶多克隆抗体交叉反应性
- 金黄色葡萄球菌乳酸脱氢酶多克隆抗体的制备及其交叉反应性研究矿
- 目的:在原核载体中表达、纯化金黄色葡萄球菌乳酸脱氢酶,免疫小鼠获得多克隆抗体,使用多克隆抗体分析与其它菌种的交叉反应性.
方法:复苏pET28a-1dh/B121重组菌,IPTG诱导重组融合蛋白表达、以抗HIs...
- 梁秉绍杨丽媛董慧李飞黄艳梅陈吟霜谢永强钟华敏周珍文
- 关键词：金黄色葡萄球菌乳酸脱氢酶多克隆抗体交叉反应性
- 文献传递
- 花生主要变应原Ara h2的克隆及原核表达被引量：2
- 2017年
- 目的:在原核载体中克隆、表达花生主要变应原Ara h2,为其重组变应原应用研究奠定基础。方法:合成花生主要变应原Ara h2基因,设计特异性引物行PCR扩增,经Eco RⅠ、HindⅢ双酶切后与做相应酶切的pET-28a载体连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序分析,使用IPTG诱导融合蛋白表达,使用Ara h2特异性多克隆抗体对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果:成功扩增了Ara h2基因,重组质粒双酶切见目的条带,基因测序显示Ara h2在正确开放阅读框中,基因长423bp,编码140个氨基酸,预测的等电点为5.3,分子量约16660.17 Da,基因比对分析显示其与相关报道的核苷酸序列一致性达100%。重组pET-28a-Ara h2/BL21经0.6 mmol/L IPTG诱导表达可见重组融合蛋白在相应分子量大量表达,使用Ara h2多克隆抗体免疫印迹法能检测到目的蛋白。结论:成功克隆、表达了花生主要变应原Ara h2,为其重组变应原应用研究奠定了基础。
- 董慧梁秉绍黄艳梅李飞陈吟霜周珍文
- 关键词：花生变应原ARAH2
- 表达霍乱毒素B与幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的枯草芽孢抑制小鼠过敏性哮喘的研究
- 董慧黄艳梅姚淑雯梁秉绍李飞黄莲芬钟华敏谢永强周珍文
- 金黄色葡萄球菌肠毒素B在枯草杆菌芽孢表面的表达及免疫特征研究
- 目的： 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，除引起人类局部化脓感染之外，还能引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至全身感染，如败血症、脓毒症等。近年来由于抗生素的广泛应用，耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）...
- 李飞
- 关键词：金黄色葡萄球菌免疫特征口服疫苗
- 文献传递
