陈芳霞
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 苦荞二氢黄酮醇4-还原酶的原核表达与多克隆抗体制备被引量：3
- 2015年
- 苦荞二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)是花青素合成途径的关键酶。该研究以苦荞种子灌浆期cDNA为模板,采用RT-PCR方法克隆苦荞DFR编码基因,并将其连接到表达载体pET47b上,转化获得苦荞DFR编码基因的大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,通过IPTG诱导表达,用SDS-PAGE分析表达产物,用亲和层析方法纯化蛋白,制备苦荞DFR多克隆抗体。RT-PCR技术获得了苦荞DFR编码基因的开放阅读框,重组表达载体经PCR和测序鉴定,表明表达载体构建成功,SDS-PAGE分析表达产物分别以可溶和不可溶的形式高效表达,亲和层析纯化得到融合蛋白,Western blotting显示,制备的多克隆抗体能特异识别其对应的抗原,天然的苦荞DFR蛋白在苦荞种子灌浆期中大量表达。苦荞DFR编码基因的原核表达与多克隆抗体的制备,为进一步开展DFR编码基因功能的研究奠定了基础。
- 李蒙陈芳霞吕宁陈鹏
- 关键词：苦荞原核表达多克隆抗体
- 热敏型核酸酶在毕赤酵母中的分泌表达及催化特性
- 2016年
- 核酸酶在生物工程领域有着重要的应用价值。本研究在优化北极虾核酸酶(Shrimp nuclease,SNU)基因序列的基础上,构建SNU的毕赤酵母分泌表达载体SNU-p PICZαA并转化酵母,以高拷贝整合转化子为基础,优化酶表达的条件,并对该酶的催化特性进行分析,结果显示SNU可在毕赤酵母SMD1168H中高效分泌表达,最佳诱导表达条件为:培养基BMMY p H 6.0,甲醇浓度为1%,诱导时间为72 h,诱导后粗酶液比活力为1.4×10~5 U/m L。经过DEAE Sephadex阴离子交换层析可纯化获得高纯度的目标蛋白,每升菌液可纯化15 mg目标蛋白,比活力达到6.291×10~6 U/mg,该酶表观分子量为50 k Da,PNGase F酶切证实该酶存在糖基化现象。二价金属离子Ca^(2+)、Mn^(2+)、Co^(2+)、Mg^(2+)及还原剂DTT、β-ME能显著地提高其水解活性,但Zn^(2+)、Cu^(2+)、SDS、高浓度Na Cl抑制该酶的活性,SNU为Ca^(2+)/Mg^(2+)依赖型核酸酶。70℃处理10 min可使该酶不可逆的失活。
- 陈芳霞陈鹏
- 关键词：毕赤酵母
