- 采用蛋白质组学技术研究罗布麻总黄酮抗EA.hy926细胞损伤作用机制
- 目的 应用同位素标记的绝对与相对定量(iTRAQ)蛋白质组学技术联合Q-Exactive质谱仪对罗布麻总黄酮(total flavonoids of Folium Apocyni Venet,TFF)作用前后EA.hy9...
- 郝旭亮刘晓霞朱美霞康娅刘聪
- 关键词：ITRAQ蛋白质组学细胞凋亡差异蛋白
- 采用蛋白质组学技术研究罗布麻总黄酮抗EA.hy926细胞损伤作用机制
- 2015年
- 目的应用同位素标记的绝对与相对定量（iTRAQ）蛋白质组学技术联合Q-Exactive质谱仪对罗布麻总黄酮（total flavonoids of Folium ApocyniVenet,TFF）作用前后EA.hy926细胞的蛋白质表达谱进行检测,找出差异蛋白,并对其进行生物信息学分析,以探讨TFF抑制H2O2诱导的EA.hy926细胞损伤的作用机制.方法（1）采用MTT法检测TFF各浓度的细胞毒性和最有效剂量.（2）分别提取正常组,模型组,罗布麻总黄酮组蛋白,酶解后用不同的iTRAQ试剂标记,混合后采用Q-Exactive质谱仪鉴定,并用PD（Proteome Dis-coverer1.3,thermo）和mascot2.3.0进行定性和定量分析,筛选差异表达蛋白并对其进行生物信息学分析.结果（1）36mg·L^-1的TFF能较好的减少H2O2导致的细胞凋亡.（2）实验共鉴定出蛋白3628个,以两组比值≥1.2或≤0.8为差异蛋白定量标准,H2O2刺激后导致其中250个蛋白表达发生变化（两组比值〉1.2倍或〈0.8倍）,经TFF治疗可改善87个蛋白的异常表达趋势,其中上调54个,下调33个,包括血红蛋白δ亚基（HBD）,硫氧还蛋白结构域蛋白15（TXD15）,溶质载体家族12成员6（S12A6）,组织因子途径抑制物（TFPI）,血小板衍化生长因子β（PA1B2）等蛋白.结论TFF能改变H2O2导致的差异蛋白表达情况,这些蛋白富集于细胞周期,细胞骨架,细胞凋亡等多种生物学功能,形成庞大的相互作用网络,协同发挥抗凋亡作用.
- 郝旭亮刘晓霞朱美霞康娅刘聪
- 关键词：ITRAQ蛋白质组学细胞凋亡差异蛋白
- 应用iTRAQ蛋白质组学技术研究罗布麻总黄酮抗EA.hy926细胞损伤的作用机制
- 目的:应用iTRAQ（isobaric tags for relative and absolute quantitation）蛋白质组学技术对罗布麻总黄酮（total flavonoids ofFolium Apocy...
- 刘晓霞朱美霞郝旭亮
- 关键词：凋亡
- 应用iTRAQ蛋白质组学技术研究罗布麻总黄酮抗EA.hy926细胞损伤的作用机制
- 目的:应用iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)蛋白质组学技术对罗布麻总黄酮(total flavonoids ofFoliumApocyn...
- 刘晓霞朱美霞郝旭亮
- 关键词：凋亡
- 罗布麻总黄酮及金丝桃苷抗EA.hy926凋亡的iTRAQ蛋白质组学及其机制研究
- 目的:应用i TRAQ蛋白质组学技术对罗布麻总黄酮（TFF）及其主要成分金丝桃苷（Hyp）作用前后的EA.hy926细胞蛋白质表达谱进行检测,找出差异蛋白,并通过其功能分析和对差异蛋白的验证,探讨TFF及Hyp抑制H2O...
- 刘晓霞
- 关键词：金丝桃苷凋亡BIDMCL-1
- 文献传递
- 血栓性疾病蛋白质组学的研究进展
- 2015年
- 血栓性疾病是目前人类死亡的最主要原因之一,由于其发病机制尚未明确,以致病死率居高不下。蛋白质组学技术可以高通量地对比健康、疾病及给药后蛋白质表达谱的变化,有效地进行疾病标志物及药物靶点的筛选和鉴定。随着蛋白质组学研究方法的建立和发展,蛋白质组学技术在动脉血栓、静脉血栓疾病的诊断、治疗等方面发挥越来越重要的作用。该文就血栓性疾病蛋白质组学技术的研究进展予以综述。
- 刘晓霞康娅刘聪倪艳岳永花郝旭亮
- 关键词：血栓性疾病动脉血栓静脉血栓蛋白质组学技术
- 罗布麻总黄酮通过PI3K/AKT/GSK3β抑制H2O2诱导的EA.hy926凋亡机制研究
- 2015年
- 目的研究罗布麻总黄酮（TFF）对H2O2诱导的人脐静脉融合细胞EA.hy926凋亡的保护作用,并探讨其可能的作用机制.方法MTT法检测细胞存活率、凋亡检测试剂盒测定细胞凋亡率、Hoechst33342/PI荧光双染观察细胞形态变化,JC1染色检测细胞线粒体膜电位的变化;Westernblot检测凋亡相关蛋白Mcl-1、cleavedcaspase-3、cleavedcaspase9及给药组与加抑制剂组AKT、GSK3β蛋白表达和磷酸化水平;荧光定量PCR检测各组GSK3β、Mcl-1、cleavedcaspase-3、cleavedcaspase9mRNA的表达.结果与对照组相比,模型组细胞存活率降低、凋亡率升高、线粒体膜电位降低,与模型组相比,TFF各剂量组（9mg·L^-1、18mg·L^-1、36mg·L^-1）细胞存活率明显增加（P〈0.05）,线粒体膜电位升高（P〈0.05）;Westernblot结果,与模型组相比,TFF各剂量组的Mcl-1蛋白表达升高,而cleavedcaspase-3、cleavedcaspase-9蛋白表达量降低（P〈0.05）,与正常组相比,单独给药TFF各剂量组使通路中的AKT、GSK3β磷酸化水平增高,而加PI3K抑制剂LY294002后,与给药组相比AKT及GSK3β磷酸化水平均降低（P〈0.05）;荧光定量PCR结果,与模型组相比,随着给药剂量的增加Mcl-1的mRNA表达逐渐增高,而cleavedcaspase-3、cleavedcaspase-9、GSK3β的mRNA表达降低.结论罗布麻总黄酮对H2O2诱导的EA.hy926细胞损伤有明显的保护作用,其主要作用机制可能是通过激活PI3K/AKT/GSK3β通路,增加AKT、GSK3β的磷酸化,减少Bcl-2家族抗凋亡蛋白Mcl-1的泛素化降解,进而抑制基于caspase家族的线粒体凋亡,发挥细胞保护作用.
- 朱美霞刘晓霞康娅刘聪郝旭亮
- 关键词：H2O2MCL-1
- 罗布麻总黄酮通过PI3K/Akt/GSK3β抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡机制研究被引量：3
- 2016年
- 心血管疾病严重危害人类健康,其致病机制主要是氧化应激诱导的内皮细胞凋亡,保护内皮细胞免受氧化应激损伤是防治心血管疾病的关键。为了探讨罗布麻总黄酮(total flavonoids of Folium Apocyni Veneti,TFF)抑制过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)诱导的EA.hy926细胞凋亡的机制,采用不同浓度TFF处理EA.hy926细胞,一定浓度的H_2O_2造模,通过MTT法、Hoechst33342/PI荧光双染、流式细胞术检测各组的细胞凋亡情况,并用Western-blot和荧光定量PCR检测相关蛋白及m RNA的表达水平。研究发现,H_2O_2能明显诱导EA.hy926细胞凋亡,而TFF可降低H_2O_2引起的内皮细胞凋亡,表现为凋亡率降低、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)增加、裂解的半胱天冬酶-3,-9(cleaved caspase-3,-9)表达减少、髓细胞白血病因子-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)表达增加、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3β(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/glycogen synthase kinase-3β,PI3K/Akt/GSK3β)通路中Akt、GSK3β蛋白的磷酸化水平升高。上述结果表明,TFF主要是通过激活PI3K/Akt/GSK3β通路,调节Mcl-1的表达,保护MMP,进而抑制caspase蛋白的剪切活化,抑制H_2O_2诱导的EA.hy926凋亡。
- 朱美霞刘晓霞康娅刘聪郝旭亮
- 关键词：H2O2内皮细胞凋亡机制
