- 匍枝根霉碳代谢调控基因(cre)对纤维素酶表达调控作用的研究
- 纤维素酶是一种复合酶,分解纤维素时起生物催化作用,广泛存在于自然界的生物体内。一般用于生产纤维素酶的菌株主要为丝状真菌,产生外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶和p一葡萄糖苷酶,三种酶结合正调控和负调控的双重机制调控多种基因的转录...
- 孟庆婷
- 关键词：匍枝根霉纤维素酶
- 文献传递
- 匍枝根霉β-葡萄糖苷酶BGLIII关键位点的结构功能被引量：2
- 2015年
- 从匍枝根霉TP-02(Rhizopus stolonifer)基因组DNA中扩增得到β-葡萄糖苷酶bgl3全长基因,并在大肠杆菌BL21中实现表达。通过对β-葡萄糖苷酶的生物信息学分析,确定其与底物作用过程中的关键氨基酸为Trp127。对该位点进行突变研究,结果显示:突变为不带侧链的Ala时,酶活降低20.8%;突变为具有相同苯环侧链的Phe时,酶活相差不大;突变为带有非苯环长链的Leu时,酶活提高34.07%。Leu的长链在维持原有活性中心构象的基础上,与酶解产物葡萄糖的疏水作用增强,从而提高酶与底物结合效率。即127位氨基酸的空间构象对BGLIII活性中心的结构功能有显著影响。
- 李娟汤斌李松孟庆婷
- 关键词：匍枝根霉Β-葡萄糖苷酶突变
- 碳阻遏因子CRE对匍枝根霉产纤维素酶调控作用的研究
- 2016年
- 为研究匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)TP-02中碳代谢阻遏因子CRE对其产纤维素酶的调控特性,从其基因组DNA中扩增得到CRE全长基因,并利用重叠PCR(overlapping PCR)技术将潮霉素B抗性基因(hyg B)插入其中,既破坏cre正常转录又提供了筛选标记。通过电转化将p UCmT-cre-hyg B导入匍枝根霉萌发孢子,经抗性筛选得到△CRE突变株。利用RT-q PCR对此突变株纤维素酶基因转录水平进行研究,发现eg、bg、cbh1和cbh2的转录均有所提高,分别为48.75%、26%、5.6%和38.6%。同时,△CRE突变株的纤维素酶在表达水平上也均高于原菌,其中内切葡聚糖苷酶酶活提高了58.62%。CRE的破坏在一定程度上减弱了碳阻遏效应,其对纤维素酶的调控具有特异性。其中,对内切酶的调控最为显著。此外,△CRE突变株在3%糖浓度下仍高产纤维素酶,这为后续酶系优化及产业化生产提供了一定的依据。
- 孟庆婷汤斌
- 关键词：纤维素酶匍枝根霉转录调控
