李宝林
- 作品数：10 被引量：17H指数：2
- 供职机构：泸州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- nalC、mexZ调控基因及oprD基因突变导致头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青霉烯类中低度耐药被引量：1
- 2015年
- 目的探讨本地区出现的头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青霉烯类药物中低度耐药的原因。方法收集对头孢他啶和头孢吡肟敏感、对碳青霉烯类药物中低度耐药的铜绿假单胞菌临床分离株,十二烷基磺酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)观察铜绿假单胞菌相对分子量(Mr)为46 000的外膜蛋白Opr D的改变。实时荧光定量RT-PCR分析细菌外排系统基因mex A、mex C、mex E和mex X表达情况。PCR扩增opr D基因和外排系统表达调控基因(mex Z、mexR、nal C、nal D和nfx B)并进行测序分析。结果 30株分离菌有26株细菌外膜蛋白在Mr 46 000处有缺失或者减少;根据外膜蛋白表型选择30株细菌中的10株进行基因测序,发现碱基缺失和插入导致移码突变以及碱基的置换导致蛋白质合成的改变。外排系统基因以mex A和mex X过度表达为主,同时伴有少量mex C基因的过度表达。mex A的调控基因主要发生nal C Tyr23→His(TAC→CAC)和mexR Val 26→Glu(GTG→GAG),mex X的调控基因mex Z发生Pro136→Ala(CCA→GCA)的突变。结论该表型铜绿假单胞菌存在由opr D基因置换、缺失以及插入导致的外膜蛋白减少或缺失,nal C、mex Z调控基因突变引起外排系统mex AB-Opr M和mex XYOpr M表达增加,可能是共同引起头孢菌素敏感型铜绿假单胞菌对碳青酶烯类药物中低度耐药的重要原因。
- 曾章锐景翠源李宝林郭婧澜向成玉刘靳波
- 关键词：铜绿假单胞菌调控基因
- 骨髓基质细胞介导的微环境对人肝癌细胞株SMMC-7721的作用以及机制研究
- 2013年
- 目的:探讨肿瘤微环境中人骨髓基质细胞HS-5对人肝癌细胞SMMC-7721的作用及机制。方法:采用HS-5细胞条件培养基(HS-5 cell-conditioned medium,HS-5-CM)处理肝癌细胞SMMC-7721,分别通过MTT、划痕和Transwell实验分析对SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭的影响;采用Transwell小室间接共培养SMMC-7721细胞与HS-5细胞,应用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)、ELISA或Western blotting分别测定SMMC-7721细胞中趋化因子CCL5及其受体CCR5的mRNA和蛋白表达;此外加入PI3K抑制剂LY294002后,通过Western blotting检测SMMC-7721细胞中PI3K-Akt通路的相关蛋白Akt及其磷酸化水平的变化,以及qRT-PCR和ELISA检测SMMC-7721细胞中CCL5的变化。结果:HS-5-CM可以促进SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭;间接共培养后,SMMC-7721细胞中CCL5及CCR5 mRNA和蛋白表达均有增高;PI3K抑制剂LY294002可有效抑制共培养后SMMC-7721细胞中PI3K-Akt通路的激活,并减少其CCL5的分泌。结论:HS-5细胞可以促进SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力;与HS-5细胞间接共培养,激活了肝癌细胞SMMC-7721的PI3K-Akt通路,从而增加SMMC-7721细胞的CCL5分泌。
- 白慧丽李宝林何方张汝益严树涓刘晨杨丹丹施琼
- 关键词：骨髓基质细胞SMMC-7721细胞微环境
- miR-30a抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化被引量：2
- 2013年
- 目的:确认miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先用Ad-BMP9处理间充质干细胞C3H10T1/2,通过碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测早期成骨指标ALP、Western blot和PCR检测晚期成骨指标OPN,茜素红S染色检测钙盐沉积了解BMP9对C3H10T1/2细胞的成骨分化作用,同时用Real-time PCR检测miR-30a在该成骨分化中的变化。然后用BMP9条件培养基分别作用Ad-mmu-miR-30a和Ad-RFP预处理10h的C3H10T1/2细胞,检测早期成骨指标ALP、晚期成骨指标钙盐沉积和骨钙素OPN的表达。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中的可能作用机制。结果:Ad-BMP9处理C3H10T1/2细胞5d,7d后,ALP的活性的表达增高;第9d后,OPN的表达增加;第14d后,钙盐的沉积明显增多。而miR-30a过表达后,抑制了这一现象。同时发现过表达miR-30a后,Runx2蛋白水平较对照组下降而mRNA水平基本没有变化。结论:miR-30a可以抑制BMP9诱导C3H10T1/2细胞的成骨分化,其作用机理可能和Runx2相关。
- 李宝林白慧丽张汝益严树涓何方杨丹丹刘晨施琼
- 关键词：成骨分化
- 乙型肝炎患者的自身免疫损伤探讨被引量：9
- 2015年
- 目的探讨自身免疫反应在乙型肝炎病变及治疗过程中的作用和影响。方法分别采用间接免疫荧光法和免疫印迹法,对132例不同临床类型乙型肝炎、24例自身免疫性肝炎(AIH)组及30例健康对照(HC组)者血清中抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗肝肾微粒体抗体(LKM-1)及可提取核抗原抗体谱(ENA)进行检测。比较自身抗体阴、阳性患者的HBV-DNA载量,肝功能指标的差异及69例经核苷(酸)类似物治疗前后患者自身抗体的变化。结果 1乙肝患者血清自身抗体总阳性率明显高于HC组(P<0.05),但低于AIH组(P<0.01);2乙肝患者的自身抗体总阳性率按照急性肝炎组、慢性肝炎组、肝硬化组和肝癌组依次升高,慢性肝炎组明显高于急性肝炎组(P<0.05),肝硬化组和肝癌组均高于慢性肝炎组,但肝硬化组和肝癌组自身抗体总阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3自身抗体阳性患者谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转移酶(GGT)等肝功能损害指标明显高于阴性患者(P<0.01);4HBV-DNA阳性患者自身抗体总阳性率高于阴性患者,但差异无统计学意义(P>0.05);569例乙肝患者经核苷(酸)类似物药物治疗后,体内自身抗体阳性率显著下降(P<0.01)。结论乙肝患者体内存在不同程度的自身免疫反应,并与乙肝的病变密切相关,监测乙肝患者体内自身抗体的变化,对乙肝发生、发展、临床治疗及免疫损伤机制的探讨具有重要意义。
- 温先勇林江李宝林
- 关键词：乙型肝炎自身免疫自身抗体免疫损伤
- miR-450a腺病毒对体外培养小鼠早期胚胎发育的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨miR-450a腺病毒对体外培养小鼠早期胚胎发育的影响。方法取小鼠2、4、8细胞期胚胎,用含不同浓度miR-450a腺病毒(0.01、0.1、1 ng/ml)的M16培养液培养,并设不含miR-450a腺病毒的对照组。倒置显微镜观察胚胎发育情况,并计算2、4、8细胞期的胚胎发育率。结果 miR-450a腺病毒可明显抑制受精卵细胞的正常分裂,导致小鼠胚胎发育异常,且随着miR-450a腺病毒浓度的增加,胚胎发育率明显下降(P<0.05),在较高浓度miR-450a腺病毒培养过程中,有部分胚胎死亡、退化。结论 miR-450a腺病毒对体外培养的小鼠早期胚胎发育具有抑制作用,为胚胎发育异常的研究提供了新的思路。
- 杨丹丹刘晨蒋凤兵李宝林白慧丽施琼
- 关键词：腺病毒小鼠胚胎发育体外培养
- miR-30a抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化
- 目的:研究miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用，并探讨其可能作用机制。 方法:首先用Ad-BMP9处理间充质干细胞C3H10T1/2，通过碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测早期成骨...
- 李宝林
- 关键词：成骨分化间充质干细胞增殖机制
- 腺病毒介导的BMP9过表达抑制人骨肉瘤细胞系143B的增殖与迁移被引量：1
- 2013年
- 目的探讨骨形态发生蛋白9(BMP9)过表达对人骨肉瘤细胞系143B的生物学行为的影响。方法用RT-PCR和Western blot检测骨肉瘤细胞系中BMP9的内源性表达,用表达BMP9的腺病毒重组体(adBMP9)感染内源性表达BMP9相对较低的骨肉瘤细胞系,Transwell法检测细胞侵袭,划痕愈合实验检测细胞迁移,MTT法和结晶紫染色法检测细胞的增殖,Hoechst 33258染色法检测凋亡,平板集落形成实验检测集落形成能力。结果 adBMP9可以明显减弱骨肉瘤细胞系143B的增殖、迁移、侵袭及集落形成能力(P<0.05),并促进细胞凋亡。结论 adBMP9能抑制人骨肉瘤细胞系143B的增殖和迁移,促进细胞凋亡。
- 杨丹丹刘晨白慧丽李宝林何方张汝益施琼
- 关键词：骨肉瘤生物学效应
- 过表达miR-30a抑制BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化被引量：1
- 2016年
- 目的探讨miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C2C12成骨分化中的作用。方法 BMP9条件培养基处理间充质干细胞C2C12诱导成骨分化,用real-time PCR连续检测miR-30家族成员的mRNA。用BMP9条件培养基作用Ad-mmu-miR-30a预处理的C2C12细胞,通过ALP染色和活性检测来反映早期成骨指标ALP的表达、分别在mRNA水平和蛋白水平检测中期成骨指标(OCN)的表达、用钙盐沉积来检测晚期成骨分化,用流式细胞术和MTT检测C2C12细胞的周期与增殖。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C2C12细胞成骨分化中的作用机制。结果 miR-30家族中,只有miR-30a在BMP9诱导C2C12细胞成骨分化中表达下调,miR-30a过表达后,通过靶基因Runx2使BMP9诱导成骨分化能力减弱,ALP的表达下降(P<0.05),OCN蛋白水平和mRNA水平也都表达下调(P<0.05),钙盐沉积受到抑制。结论 miR-30a可以抑制BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化。
- 李宝林施琼邓正华温先勇彭瑛唐敏刘靳波
- 关键词：C2C12成骨分化
- MicroRNA-450a-3p通过抑制Bub1基因的表达调控小鼠细胞增殖和胚胎发育
- 2012年
- 目的:探讨microRNA-450a-3p(miR-450a-3p)对小鼠细胞增殖和胚胎发育的调控是否通过抑制Bub1基因的表达实现。方法:用萤光素酶报告基因实验检测miR-450a-3p能否特异性结合于Bub1基因的3’-非翻译区(untranslated region,UTR);用Western blotting和实时荧光定量RT-PCR检测miR-450a-3p对Bub1蛋白和mRNA表达;分别通过MTT、Hoechst染色、流式细胞术等分析miR-450a-3p对小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)增殖、凋亡和细胞周期等生物学功能的调控;利用染色体核型分析技术检测miR-450a-3p对MEFs染色体数目的影响。结果:miR-450a-3p能与靶基因Bub1的3’-UTR结合,在翻译水平抑制MEFs中Bub1的表达,然而其转录水平的表达却不受影响。miR-450a-3p通过下调靶基因Bub1的表达,抑制MEFs的增殖,促进细胞的凋亡;而且miR-450a-3p还能使大多数细胞停滞在G1/G0期,使细胞分裂受阻,导致细胞染色体数目异常。结论:miR-450a-3p能够调控靶基因Bub1的表达,抑制MEFs增殖,并最终影响小鼠胚胎的发育。
- 刘晨杨丹丹蒋凤兵白慧丽李宝林罗敏湛晓琴施琼
- 关键词：小鼠胚胎成纤维细胞胚胎
- SDF-1/CXCR4在BMP9介导C2C12细胞成骨分化过程中的作用研究被引量：2
- 2013年
- 为了观察SDF-1/CXCR4信号轴在BMP9促C2C12细胞成骨分化过程中的作用,通过重组腺病毒过表达BMP9,检测对C2C12细胞中SDF-1及受体CXCR4 mRNA和蛋白表达水平的影响;同时利用重组腺病毒或中和抗体干扰SDF-1/CXCR4,与BMP9先后作用于C2C12细胞,通过定量测定碱性磷酸酶(ALP)、染色测定ALP表达、免疫细胞化学测定骨钙蛋白(OCN)表达、茜素红S染色测定钙盐沉积、Real-time PCR检测成骨相关转录因子Runx2和Osx的表达、Western blot检测成骨分化信号通路MAPK和Smad的变化。结果显示,BMP9能明显抑制C2C12细胞中SDF-1、CXCR4的表达(P<0.01),且具有剂量和时间依赖性;预先干扰SDF-1/CXCR4能明显影响由BMP9介导的早、中期成骨标志物ALP、OCN及早期转录因子Runx2、Osx的表达(P<0.01)和MAPK、Smad信号通路相关蛋白的变化(P<0.05);外源性SDF-1并不能影响晚期成骨标志物钙盐沉积。提示SDF-1/CXCR4信号轴在由BMP9介导的C2C12细胞成骨分化早、中期过程中发挥重要作用。
- 刘晨杨丹丹白慧丽李宝林何方张汝益严树涓施琼
- 关键词：CXCR4成骨分化C2C12细胞
