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人源抗H7N9血凝素中和抗体IgG的制备及鉴定被引量：4: 2016年; 目的 :将从全人源Fab噬菌体抗体库筛选获得的抗H7N9血凝素Fab抗体基因进行基因工程改造,以表达全分子抗H7N9血凝素中和抗体Ig G,并验证其对H7N9型禽流感病毒的中和活性。方法:用H7N9型禽流感病毒血凝素筛选全人源Fab噬菌体抗体库,构建全分子Ig G抗体重、轻链表达载体,共转染293 Free Style(293F)细胞,表达并纯化Ig G抗体。应用ELISA及Western blot实验检测抗体免疫学活性,微量中和实验及鸡胚预防保护实验检测其中和活性,血凝抑制试验判断其结合血凝素亚基。结果:成功筛选出1株全人源抗H7N9血凝素Fab抗体基因并构建Ig G真核表达载体。获得的全分子Ig G抗体重、轻链序列正确,并可特异性结合H7N9血凝素。微量中和实验证明其对H7N9型禽流感病毒有良好中和活性,中和滴度为15.6μg/m L。鸡胚预防保护实验显示抗体用量为200μg时可达100%保护率。血凝抑制试验表明其结合血凝素HA2亚基。结论:制备的重组全人源全分子抗H7N9血凝素Ig G抗体可特异性识别H7N9型禽流感病毒血凝素,对H7N9型禽流病毒有显著的中和作用,为进一步研发用于禽流感防治的抗体药物奠定基础。; 陈雅熊四平唐奇王怡雯耿以如顾慧徐亚如周荧仇镇宁冯振卿朱进; 关键词：血凝素中和抗体

人源抗H7N9型禽流感病毒血凝素IgG抗体的制备及鉴定: 2013年3月,中国疾病预防与控制中心(CDC)首次公布三例新型H7N9型禽流感确诊病例,截止目前该病毒已造成数百人感染,死亡率极高[1]。禽流感病毒基因极易突变,因此需防范大范围流行事件。目前治疗禽流感的一线化学药物包...; 陈雅; 关键词：噬菌体抗体库人源抗体中和抗体; 文献传递

狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析被引量：2: 2015年; 目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。; 王晓蕾陈芳芳袁伟钱国强耿以如张晓杨瑾熊四平陈雅唐奇仇镇宁冯振卿朱进; 关键词：狂犬病病毒狂犬病病毒糖蛋白纯化抗体

人源全分子抗c-Met抗体的制备及对鼻咽癌细胞生物学特性的影响被引量：4: 2016年; 目的 :利用基因工程技术制备全分子人源抗c-Met抗体,分析该抗体免疫学特性,并观察该全分子抗体对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:设计引物扩增抗c-Met Fab抗体的重轻链可变区序列,将其分别克隆到真核表达载体p FUSECHIg-h G1和p FUSE-CLIg-hκ中。转染真核细胞,表达产物用Protein A柱纯化。通过ELISA、Western blot和免疫荧光等方法鉴定该抗体的免疫学特性。CCK-8检测抗体对人鼻咽癌细胞增殖的抑制作用,划痕实验、Transwell侵袭实验分析抗体对人鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响。结果:成功重组全分子人源抗c-Met抗体的表达载体,获得的全分子抗体保留了与抗原的特异性结合活性。CCK-8实验中结果显示全分子抗体能抑制c-Met阳性鼻咽癌细胞CNE2和HONE1的增殖。细胞划痕和Transwell侵袭实验结果显示全分子抗体能抑制c-Met阳性细胞CNE2和HONE1的迁移和侵袭能力。结论:本研究成功制备人源全分子抗c-Met抗体,该抗体有明显的中和活性,为探索鼻咽癌分子靶向治疗奠定了基础。; 白璐月刘金荣唐奇熊四平陈雅杜银娟周荧朱进陈仁杰; 关键词：鼻咽癌 C-MET 人源抗体

人源特异性抗狂犬病毒二价Fab094-DDD抗体的制备及鉴定: 2016年; 目的 :利用蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)调节亚基(R亚基)的二聚体化功能结构域(DDD)的二聚化功能,制备具有中和活性的人源特异性抗狂犬病毒二价抗体。方法:优化合成linker-C-DDD序列,设计引物扩增抗狂犬病毒抗体Fab094的Fd段和轻链可变区序列(Vκ),通过overlap PCR将Fab094的Fd段和linker-C-DDD基因重组为Fd-DDD,将其和Vκ分别克隆到真核表达载体中,共转染293Free style细胞,表达纯化该抗体。应用SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫共沉淀、亲和力测定及免疫荧光试验检测该抗体的免疫学特性,用荧光抗体病毒中和试验检测其中和活性。结果:成功构建了全人源抗狂犬病毒二价抗体Fab094-DDD的真核表达载体,获得的二价Fab094-DDD抗体与抗原保持着较好的亲和力,能特异性结合狂犬病毒,中和效价为213.2 U/mg。结论:成功制备了抗狂犬病毒二价Fab094-DDD抗体,具有较高的中和活性,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础,对于其他疾病双表位人源特异性抗体的制备也具有借鉴作用。; 耿以如熊四平唐奇张晓陈雅徐亚如周荧仇镇宁冯振卿朱进; 关键词：狂犬病毒中和活性

新型人感染H7N9型禽流感病毒研究进展被引量：15: 2016年; 人感染新型H7N9型禽流感自2013年确诊以来全国蔓延,表现出极高的致病率及致死率,引发了极大的关注。该病由新型H7N9型禽流感病毒引起,该病毒基因突变率高,一旦发生对人类呼吸道上皮受体的适应性突变,极易导致暴发性大流行。文中从H7N9型禽流感的流行病学特征、病原学特征、感染患者的特征、检测措施及防治策略等方面对目前的研究进展进行综述。; 陈雅朱进冯振卿; 关键词：基因突变流行病学疫苗

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陈雅