杨盼盼
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
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- PEDV中国流行株和疫苗株S蛋白免疫反应性差异分析
- 引言猪流行性腹泻病毒的纤突(Spike,S)蛋白是病毒的主要结构蛋白,现有研究显示目前我国的PEDV流行毒株与长期使用的CV777疫苗株在基因水平具有一定差异,其中S基因有较大差异,特别是S蛋白N端区域变异更大,但这是否...
- 陈静杨盼盼雷喜梅王晓梦高冬生李永涛常洪涛杨霞陈陆赵军王川庆
- 伐昔洛韦抑制猪伪狂犬病病毒复制的研究
- 引言猪伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的一种以仔猪发热,脑脊髓炎及怀孕母猪流产为主要特征的急性传染病。虽然我国养猪业普遍采用基因缺失疫苗防控该病,但仍然存在猪群中猪伪狂犬病病毒野毒感染阳性率逐年升高的趋势。...
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- 分泌抗猪流行性腹泻病毒中国变异株S蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立被引量：7
- 2016年
- 以纯化的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)中国变异株(CH/ZMDZY/11)S蛋白N端高变区(22-380aa)重组蛋白为抗原免疫BALB/C小鼠,以纯化CH/ZMDZY/11全病毒及带His标签的重组蛋白分别为筛选抗原,利用淋巴瘤杂交技术获得了一株稳定分泌抗S蛋白特异性单克隆抗体细胞株,命名为2D1。该株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价为1∶3 200,免疫球蛋白类型为IgM。ELISA检测该单抗与PEDV流行株及PEDV CV777疫苗株全病毒的反应显著差异,可区分流行毒株和疫苗毒株;但该单抗用于Western blot不能区分PEDV流行株和疫苗株。ELISA及Western blot试验结果显示,该单抗有较好的PEDV特异性,可用于检测PEDV。
- 雷喜梅陈静杨盼盼赵永祥王晓梦赵军王川庆
- 关键词：猪流行性腹泻病毒纤突蛋白单克隆抗体BLOT
- 分泌抗PEDV变异株S蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
- 引言猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的猪的一种急性、高度接触性肠道传染病。2010年10月以来在我国主要养猪省份暴发,主要导致仔猪腹泻、呕吐、脱水和较高的死亡率[1],给我国养猪业造成巨大损失。...
- 雷喜梅陈静杨盼盼赵永祥王晓梦赵军王川庆
- 表达PEDV中国变异株S基因重组猪伪狂犬病病毒的构建和纯化被引量：2
- 2018年
- 为了研制出能够同时预防猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）和猪伪狂犬病病毒（pseu—dorabies virus，PRV）感染的二联活疫苗，本研究将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）和PEDV中国变异株的纤突蛋白免疫决定簇区域（S1）基因分别克隆至舍有PRV胸苷激酶（TK）基因上、下游同源臂的穿梭载体pTK中，构建重组PRV转移质粒pTK—EGFP和pTK—S1。将重组质粒pTK—EGFP与PRV疫苗毒株Bartha—K61基因组DNA共转染Vero细胞，经绿色荧光蚀斑纯化得到重组病毒rPRV—EGFP。随后将重组质粒pTK—S1与rPRV—EGFP基因组DNA共转染Vero细胞，通过反向筛选EGFP阴性蚀斑，蚀斑纯化得到表达PEDVS蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV-S1。本研究将为更有效防控猪伪狂犬病和猪流行性腹泻提供辅助工具。
- 杨盼盼吴艳阳杨东东高冬生王川庆赵军李存法
- 关键词：猪伪狂犬病病毒EGFPS1基因
- 伐昔洛韦对猪伪狂犬病病毒复制的抑制作用被引量：2
- 2016年
- 本研究确定伐昔洛韦的体外和体内抗猪伪狂犬病病毒作用,确定伐昔洛韦对Vero细胞的最大无毒质量浓度为4g/L,抑制PRV野毒在Vero细胞中复制的最低有效质量浓度为3g/L。用1个LD50的PRV对小鼠进行攻毒,在攻毒后48h给服不同剂量的伐昔洛韦,确定了伐昔洛韦能够为小鼠提供完全保护的最低剂量为3 mg/只。PRV攻毒后,未给服伐昔洛韦组小鼠表现典型的神经症状并全部死亡,而给药组小鼠临床健康并全部存活。与给药组小鼠相比,未给药组小鼠脑、肺组织中的PRV病毒载量明显高于给药组小鼠,且随时间延长一直增加。脑、肺组织呈现PRV感染的特征性病理变化。伐昔洛韦给药组小鼠相应组织中的病毒载量和脾脏T淋巴细胞分泌PRV特异性Th1型细胞因子水平在攻毒后72h逐渐降低。试验结果显示,伐昔洛韦无论在体内、体外均能够有效抑制PRV的复制。
- 杨盼盼万文妍高冬生郑关民常洪涛杨霞陈陆赵军王川庆
- 关键词：猪伪狂犬病病毒伐昔洛韦
- PEDV中国流行株和疫苗株S蛋白免疫反应性差异分析被引量：7
- 2015年
- 为分析PEDV流行株和疫苗株S基因差异对疫苗免疫效果影响,分别在大肠杆菌中表达PEDV流行株CH/ZMDZY/11与疫苗株CV777S蛋白差异较大的N端（22～380aa）区域（SA）,将纯化的SA蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体,并以SA蛋白为抗原,通过Western Blot及间接ELISA的方法检测2种蛋白与多克隆抗体的反应性差异。结果表明,抗PEDV疫苗株SA蛋白（YSA）多抗与疫苗株SA蛋白的反应性明显高于与流行株SA蛋白（LSA）的反应性;与此相反,抗PEDV流行株SA蛋白多抗与流行株SA蛋白的反应性明显高于与疫苗株SA蛋白的反应性。研究结果提示,PEDV S蛋白22～380aa区域存在差异性抗原表位,PEDV流行株和疫苗株S基因的差异可能是导致基于CV777疫苗株的PED疫苗免疫效果不好的原因。本研究将为开发PEDV流行株亚单位疫苗用于预防临床PEDV流行株的感染提供理论依据。
- 陈静杨盼盼雷喜梅王晓梦高冬生常洪涛杨霞陈陆赵军王川庆
- 关键词：S蛋白免疫反应性
- 基于PEDV中国变异株S蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用被引量：6
- 2014年
- 以纯化的重组猪流行腹泻病毒(PEDV)中国变异株S蛋白为包被抗原,建立了检测PEDV流行株抗体的间接ELISA方法。所建方法最佳反应条件为:抗原最适包被量为1μg/孔,包被时间为37℃1h后4℃过夜;血清工作浓度为1∶100,作用时间为1.5h;二抗选用HRP标记的兔抗猪IgG稀释度为1∶4 000,作用时间为1.5h;显色液TMB作用时间为15min;判定标准为,样品S/P值大于等于0.058判定为阳性,小于0.045判定为阴性。所建ELISA方法具有良好的特异性和重复性。对50份疑似猪流行性腹泻血清样品进行检测,该方法与PEDV病原检测结果有较高的符合率。结果表明本研究所建立ELISA方法可用于PEDV流行株抗体检测和疫病监测。
- 陈静王晓梦杨盼盼雷喜梅刘金玲李晓静赵军王川庆
- 关键词：S蛋白间接ELISA
