赵锦荣
- 作品数：59 被引量：222H指数：8
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 利用荧光偏振技术检测耐异烟肼结核分枝杆菌KatG315点突变被引量：12
- 2004年
- 目的 应用模板指导的荧光染料终止物掺入反应 荧光偏振检测技术 (template directeddye terminatorincorporationwithfluorescencepolarizationdetection ,TDI FP)分析结核分枝杆菌KatG 315点突变与异烟肼耐药性的关系 ,并建立一种准确、快速的诊断结核分枝杆菌异烟肼耐药性的新方法。方法 对临床 82例耐多药结核病患者所感染的结核分枝杆菌菌株进行常规培养和药敏实验 ;提取结核分枝杆菌DNA ,并经聚合酶链反应 (PCR)扩增 2 71bp的KatG基因片段 ,PCR产物经消化处理清除残余dNTPs和引物 ,进行TDI反应 ,应用Victor2测定荧光偏振值 ,分析所有样品的KatG基因 315位点的基因型。结果 2 9例异烟肼高度耐药患者的结核分枝杆菌中有 15例发生KatG 315的G→C突变 ,其中 4例为KatG 315突变和未突变的混合感染 ,突变率为 5 2 % ;32例异烟肼低度耐药患者的结核分枝杆菌中有 15例为KatG 315突变和未突变的混合感染 ,突变率为 4 7% ;2 1例异烟肼敏感患者的结核分枝杆菌未发现KatG 315突变。结论 KatG 315突变与结核分枝杆菌对异烟肼产生耐药性密切相关 ;应用TDI FP技术检测KatG 315突变具有准确、快速、简便以及高通量等优点 。
- 王琰张文红赵锦荣罗明张增贤白玉杰阎小君
- 关键词：药物耐受性
- 乙肝治疗耐药基因突变的焦磷酸测序技术诊断被引量：3
- 2011年
- 目的:建立焦磷酸测序技术检测拉米夫定和阿德福韦酯治疗乙肝所致乙肝病毒基因耐药突变的定量检测方法,为临床乙肝耐药诊断和治疗提供依据。方法:针对乙肝病毒DNA聚合酶基因序列上4个常见基因突变位点的6种突变形式,分别克隆构建野生型和突变型质粒作为标准品,应用生物信息学手段设计目标基因通用PCR引物和各突变点的焦磷酸测序引物,建立焦磷酸测序的突变检测方法。对接受拉米夫定、阿德福韦酯治疗的慢性乙型肝炎患者血清标本进行检测。结果:构建了乙肝病毒四种常见耐药性突变的标准株和变异株克隆,建立了分别或同时检测拉米夫定、阿德福韦酯耐药突变的焦磷酸测序方法,对68例临床耐药或疑似耐药的患者血清标本进行检测,双脱氧测序验证,检出拉米夫定耐药突变32例,阿德福韦酯耐药突变5例,其中焦磷酸测序检出20例为混合突变,而双脱氧测序显示为6例。结论:成功建立了焦磷酸测序定量检测拉米夫定、阿德福韦酯耐药基因突变的方法,构建了乙肝病毒耐药基因突变的标准质粒,为临床动态监测乙肝病毒变异病毒株、指导合理用药奠定了基础。
- 汪钦郭晏海李勇年刘永兰包晗赵锦荣梁平雷小英张菊颜真
- 关键词：乙肝耐药基因焦磷酸测序阿德福韦酯
- PIK3CA基因突变的MassARRAY分子量阵列分析
- 2011年
- 目的:利用MassARRAY分子量阵列分析系统检测胃癌组织PIK3CA基因突变。方法:从胃癌石蜡包埋组织中提取基因组,PCR反应扩增目的基因片段,MassARRAY分子量阵列分析系统检测PIK3CA基因突变;焦磷酸测序验证检测结果。结果:中国西部地区144例胃癌组织样本中PIK3CA_E542K(1624G>A)突变携带率为77.6%,PIK3CA_E545K(1633G>A)突变携带率为84%。MassARRAY分子量阵列分析系统检测结果与焦磷酸测序结果达到100%吻合。结论:建立了MassARRAY分子量阵列分析系统检测基因突变的方法,初步建立了中国西北地区汉族人群胃癌组织PIK3CA基因PIK3CA_E542K(1624G>A)和PIK3CA_E545K(1633G>A)位点突变频数。
- 梁平赵锦荣惠延平孙建斌王伟汪钦包晗刘永兰金天博郭晏海张菊颜真
- 关键词：胃癌基因基因分型基因突变
- 荧光偏振检测血清中HBV多聚酶基因突变被引量：1
- 2003年
- 目的 建立简便、多重HBV多聚酶基因序列中拉米呋啶耐药性相关的基因突变的检测方法。方法 采用终点终止法和偏振光检测技术进行点突变的检测。对HBV多聚酶基因进行PCR扩增 ,然后用特异探针与扩增产物中待测核苷酸的下游序列杂交 ,使探针的 3′可以在DNA聚合酶的作用下 ,依据其互补链上的待测核苷酸连接上一个标有特定荧光素的ddNTP ,然后检测该 3′端带有荧光素的探针 ,根据检测到的荧光素种类和偏振光的强度判定待测点是何种核苷酸。结果 该方法可以检测出HBV多聚酶基因序列中特定位置的核苷酸类型 ,能检测 1× 1 0 1 个拷贝的模板量。对 30例经过 6个月以上拉米呋啶治疗的患者血清进行检测 ,检测出其中有 3例是甲硫氨酸 (M)密码子ATG中的A→G变异 ;2例是ATG中的G→C变异 ;1例是ATG中的G→T。
- 郭晏海吕贯庭赵锦荣张菊白玉洁闫小君
- 关键词：荧光偏振血清HBV多聚酶基因突变乙型肝炎
- Centrobin与BRCA2蛋白间相互作用及其细胞定位被引量：5
- 2009年
- 为分析乳腺癌易感基因2（breast cancer susceptibility gene2,BRCA2）蛋白与中心体BRCA2相互作用蛋白（centromal BRCA2interacting protein,centrobin）间相互作用及其细胞定位的关系,探讨二者功能上的联系,本研究采用哺乳细胞双杂交实验检测体内结合并初步判定BRCA2分子上的结合区域 免疫共沉淀实验进一步验证其体内结合活性,GST-pulldown法检测其体外结合活性,免疫组织化学染色观测BRCA2蛋白的细胞定位及在有丝分裂各期centrobin的细胞定位.结果显示,BRCA2与centrobin间存在体内和体外结合,且BRCA2分子的结合区域主要位于2393-2952氨基酸残基处 外源表达BRCA2定位于中心体,在有丝分裂各时相centrobin均定位于中心体.BRCA2与centrobin在体内形成复合物,并存在直接物理结合作用,二者存在细胞空间定位的一致性.该结果为进一步研究BRCA2在中心体复制中的调控作用提供了线索.
- 薛丽杨芳张贺龙赵锦荣张文红白玉杰
- 关键词：中心体有丝分裂
- 应用荧光偏振技术检测HBV DNA被引量：3
- 2004年
- 目的 建立一种简便、灵敏、特异的DNA检测方法。方法 用荧光偏振技术检测 10 2例乙型肝炎患者血清中的HBVDNA ,并与多聚酶链反应 酶联免疫吸附试验 (PCR ELISA)方法作比较。结果 该方法可以检测出 1× 10 1拷贝的HBVDNA模板 ,CV为 6 .4 4 % ,对 10 2例乙型肝炎患者的血清进行检测 ,HBsAg( + )、HBeAg( + )、抗HBc( + )血清HBVDNA阳性率为 10 0 % ( 4 0 / 4 0 ) ;HBsAg( + )、抗HBe( + )、抗HBc( + )血清HBVDNA阳性率为 81.8% ( 2 7/ 33) ;HBsAg( + )、抗HBc( + )血清HBVDNA阳性率为 72 .4 % ( 2 1/ 2 9) ,其余为阴性。 30例非乙型肝炎患者血清中HBVDNA的检测结果均为阴性。结论 该方法简单、灵敏、特异 。
- 郭晏海吕贯庭白玉杰赵锦荣张菊韩峰产闫小君
- 关键词：乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸血清学检查
- 全自动(定量PCR)基因扩增诊断仪配套定量试剂的研制被引量：12
- 2001年
- 目的 研制一种能用于仪器操作的灵敏、快速、特异的定量试剂 .方法 使用一个生物素标记的上游引物 ,对HBVDNA及其竞争模板DNA进行不对称PCR扩增 ,使扩增出的单链带有生物素 ,并可结合在固定有链亲合素的微孔板的表面 .用标有辣根过氧化物酶的待测模板探针和竞争模板探针分别与两个微孔中固定的相应单链PCR产物杂交 ,而后加底物显色 ,测定吸光度进行分级定量分析 .结果 该定量方法可以检测 10拷贝数的模板 ,而且对简便处理的标本适应性强 ;以分级定量的形式定量时 ,具有良好的重复性 .结论 该试剂适用于仪器操作 。
- 郭晏海阎小君孟宪润崔大祥侯瑜韩锋产冯永强张菊赵锦荣
- 关键词：定量PCR探针杂交
- NDRG2基因启动子甲基化与肺腺癌细胞中mRNA表达相关性的实验研究被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨肺腺癌细胞中NDRG2基因启动子甲基化状态及其与基因表达的关系。方法:甲基化焦磷酸测序技术检测启动子区域甲基化状态,荧光定量PCR技术检测不同药物浓度下培养细胞中NDRG2基因mRNA的表达水平,分析启动子区域甲基化与基因表达之间的关系。结果:在体外培养细胞中检测到NDRG2基因启动子区域呈现不同程度的甲基化,甲基化频率分别为肺癌A549细胞71.8%、GLC-82细胞86.1%、人脐静脉内皮ECV-304细胞36.8%、胃上皮GES-1细胞42.9%。NDRG2基因mRNA表达与其启动子甲基化程度成反比,甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用于细胞后,A549和GLC-82细胞中NDRG2基因的mRNA转录明显上调,至72 h差异显著(P<0.05)。结论:肺腺癌细胞中NDRG2基因启动子CpG岛存在高甲基化,甲基化程度与该基因的表达具有负相关性,5-Aza-CdR能在一定程度上提高NDRG2的转录水平。
- 李慎梁平刘永兰黄启超汪钦包晗赵锦荣雷小英郭晏海颜真
- 关键词：NDRG2基因启动子甲基化焦磷酸测序5-杂氮-2-脱氧胞苷
- 抗人TGF_α发夹状核酶基因逆转录病毒表达载体的构建及鉴定
- 1998年
- 目的：构建抗人ＴＧＦα核酶基因逆转录病毒表达载体．方法：用二异丙基亚磷酰胺法合成抗人ＴＧＦα核酶基因的两条互补单链，将其退火后克隆人ｐＵＣ１８，用ＥｃｏＲＩ及ＢａｍＨＩ切下该基因，定向克隆人逆转录病毒表达载体ｐＤＯＲ．结果：酶切后经琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，所构建重组克隆载体ｐＵＣ１８ＴＲＺ及重组表达载体ｐＤＯＲＴＲＺ正确．结论：成功构建了抗人ＴＧＦα发夹状核酶基因逆转录病毒表达载体，为下一步运用核酶对肿瘤进行基因治疗打下了基础．
- 赵锦荣惠宏襄金明王成济
- 关键词：转化生长因子Α发夹状核酶
- HPV6晚期表达基因L1的克隆并在杆状病毒表达系统的表达及其抗血清制备
- 2002年
- 目的 获得具有正确序列的人乳头瘤病毒 HPV6型晚期表达基因 L1 ,并获得其高活性表达 L1基因特异性抗血清 ,为进一步研究及临床检验应用奠定物质基础。方法 用 PCR法从感染人乳头瘤病毒患者尖锐湿疣组织中获得 HPV6晚期表达基因 L1 ,测序验证后 ,将正确的 HPV6晚期表达基因 L1序列 ,插入 Bac- to- Bac杆状病毒表达系统 ,转染昆虫细胞 Sf9,表达外壳蛋白 L 1 ,并以之作为抗原免疫兔 ,获得特异性抗血清。结果 获得了正确序列 HPV6晚期表达基因 L1 ,在 Bac- to- Bac杆状病毒系统活性表达并获得其特异性抗血清。结论 获得 HPV6晚期表达基因 L1 ,及有抗原活性的表达和相应抗血清。
- 张菊闫小君陈蕤赵锦荣段杰苏成芝
- 关键词：克隆抗血清
