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C-8神经酰胺对肺泡Ⅱ型上皮细胞通透性及紧密连接蛋白的影响: 2016年; 目的研究外源性C-8神经酰胺对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)单层通透性的影响,探讨其作用机制。方法将体外分离培养的AECⅡ通过差速贴壁法纯化,在Transwell上构建单层,待细胞融合后给予不同浓度的C-8神经酰胺(0、25、50、100μmol/L)继续培养24 h,应用伏欧计测定跨上皮电阻值(TEER)及辣根过氧化物酶(HRP)标记法检测吸光度(OD)值;分别提取细胞总蛋白及总RNA,采用Western blot和实时定量聚合酶链式反应方法检测不同浓度的C-8神经酰胺对AECⅡ紧密连接蛋白ZO-1和Occludin蛋白水平和mRNA水平表达的影响。结果不同浓度的C-8神经酰胺刺激融合的AECⅡ单层24 h后,各组间TEER值、OD值差异均有统计学意义(F=38.780、19.780,P<0.001)。C-8神经酰胺作用后,ZO-1、Occludin蛋白(F=71.150,P<0.01;F=7.703,P=0.002)及mRNA(F=4.887,P=0.014;F=3.637,P=0.048)表达量明显降低。结论 C-8神经酰胺可能通过下调紧密连接蛋白的表达增加肺泡Ⅱ型上皮细胞通透性。; 汪影杨进刘辉毕继蕊卫园园操基玉陆友金; 关键词：神经酰胺肺上皮细胞

C-8神经酰胺对肺泡上皮细胞通透性调节作用的研究被引量：1: 2015年; 目的探讨C-8神经酰胺对肺泡上皮细胞通透性的调节作用。方法体外分离培养的胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type II epithelial cell,AECⅡ)在Transwell上构建成单层细胞,通过不同浓度的C-8神经酰胺(0,50,100μmol/L)刺激,并测定跨上皮电阻值(TEER);分别应用免疫印迹检测凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、流式细胞技术检测细胞凋亡情况。结果不同浓度的C-8神经酰胺刺激AECII单层24 h后,TEER值明显下降;C-8神经酰胺作用后,免疫印迹检测表明cleaved-caspase 3表达升高,而凋亡率明显升高。结论 C-8神经酰胺可能通过促进肺泡上皮细胞凋亡,增加肺泡上皮屏障通透性。; 杨进刘辉汪影陆友金; 关键词：神经酰胺细胞凋亡

Gas-6蛋白对小鼠急性肺损伤保护作用的研究被引量：1: 2016年; 目的研究外源性Gas-6蛋白对脂多糖(LPS)诱发小鼠急性肺损伤的保护作用。方法将Balb/c小鼠随机分为空白对照组、Gas-6蛋白对照组、LPS处理组、Gas-6蛋白保护组。LPS处理组、Gas-6蛋白保护组分别通过腹腔注射LPS诱导急性肺损伤模型,其余组以等量生理盐水作为对照。而后Gas-6蛋白对照组及Gas-6蛋白保护组立刻通过尾静脉注入Gas-6蛋白,其余两组以等量生理盐水作为对照。LPS/生理盐水注射12 h后,取小鼠血清及肺组织。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变、测定肺组织病理学评分、肺组织湿/干质量比、检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)水平以及肺组织中TNF-αmRNA、IL-6 mRNA的表达情况。结果肺组织病理学检查显示:与空白对照组比较,LPS处理组小鼠肺水肿、肺组织充血、中性粒细胞浸润、炎性渗出较明显,而Gas-6蛋白可减轻上述改变。LPS处理组小鼠肺组织湿/干质量比、肺组织病理学评分、血清中TNF-α、IL-6水平及肺组织中TNF-αmRNA、IL-6 mRNA的表达较空白对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。而Gas-6蛋白保护组上述指标较LPS处理组均有所下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Gas-6蛋白对LPS所诱导的急性肺损伤小鼠有保护作用。; 尹璐杨进汪影毕继蕊刘辉陆友金; 关键词：脂多糖急性肺损伤

C8-神经酰胺诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的研究被引量：1: 2015年; 目的探讨外源性c8．神经酰胺诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的作用。方法取妊娠18dICR孕鼠，分离、培养胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolartype1Iepithelialcell，AEC1I），分别加入0、20、40、80μmol／L的c8-神经酰胺溶液，继续培养24h，MTF法检测c8-神经酰胺对AECII增殖的影响，使用80μmol／LC8．神经酰胺溶液培养AECII3、6、12、24h，MTF法检测AECⅡ活力。使用0、20、40、80μmo]／LC8-神经酰胺溶液对AECII进行体外干预12和24h，分别使用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡率。结果c8-神经酰胺对AECII增殖具有明显抑制作用，并且具有浓度效应和时间效应。c8-神经酰胺溶液浓度为0、20、40、80μmol／L时，12和24h细胞总凋亡率分别为（20．634-0．86）％、（22．67±1．72）％、（42．03±1．34）％、（50．404±1．30）％和（20．93±2．51）％、（28．934±3．19）％、（47．004±1．08）％、（57．774±3．04）％（除12h20pμmol／L组外，相同时间点，其他各组与对照组相比，差异均有统计学意义，均P〈0．05）。c8-神经酰胺溶液浓度为0、20、40、80μmol／L时，12和24h的凋亡率分别为（5．514±1．41）％、（13．24±2．62）％、（35．104±4．59）％、（75．07±4．37）％和（5．564±1．36）％、（21．344±2．09）％、（37．12±2．11）％、（91．334±0．72）％（相同时间点，各浓度组与对照组相比，差异有统计学意义，均P〈0．05）。结论c8一神经酰胺可降低肺泡上皮细胞生存率，并且具有明显的诱导细胞凋亡作用。; 刘辉杨进汪影卫园园陆友金操基玉; 关键词：肺泡上皮细胞神经酰胺类细胞凋亡

丙咪嗪对小鼠急性肺损伤肺泡上皮屏障功能保护作用的研究被引量：7: 2017年; 目的研究丙咪嗪对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）肺泡上皮屏障功能的保护作用，并探讨可能机制。方法32只雄性SPF级Balb/c小鼠随机数字法分为4组（健康对照组、丙咪嗪组、LPS组、LPS＋丙咪嗪组）。采用LPS（20 mg/kg）腹腔注射建立小鼠ALI模型，并在腹腔注射LPS前30 min给予丙咪嗪（25 mg/kg）干预，处死前10 min，给予尾静脉注射FITC-FD4，12 h后麻醉下放血处死小鼠，随后取出支气管肺泡灌洗液（BALF）及肺组织。常规HE染色观察肺组织病理变化及病理学评分；肺组织湿/干比（W/D）和BALF/血清FD4比值的测定分别评估肺水肿和肺泡上皮细胞通透性；采用real-time PCR、Western blot和免疫组织化学方法检测不同组紧密连接蛋白Occludin、Claudin-4和ZO-1的表达情况。数据分析采用SPSS 16.0软件，多组间的均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果LPS＋Imipramine组小鼠病理评分（9.22±0.21）较LPS组（11.23±0.55）降低，差异具有统计学意义（P〈0.05）；LPS＋Imipramine组肺组织湿/干比小于LPS组，差异具有统计学意义（P〈0.05）；LPS＋Imipramine组较LPS组相比，BALF/血清FD4比值下降差异具有统计学意义（P〈0.05）；方差分析结果显示，4组之间的Occludin、Claudin-4、ZO-1蛋白mRNA及蛋白表达水平差异均有统计学意义（均P〈0.05），组间两两比较发现与LPS组相比，LPS＋Imipramine组小鼠肺各紧密连接蛋白mRNA及蛋白的表达水平均升高（均P〈0.05）；免疫组织化学结果显示，紧密连接蛋白Occludin、Claudin-4主要位于肺泡上皮细胞膜，ZO-1主要位于肺泡上皮细胞胞浆内，在健康对照组和丙咪嗪组蛋白表达明显，LPS组蛋白表达较健康对照组均降低（均P〈0.05），LPS＋Imipramine组较LPS组蛋白表达均上升（均P〈0.05）。结论丙咪嗪可通过上调肺泡上皮细胞紧密连接蛋白的表达增; 毕继蕊杨进汪影梅静尹璐操基玉陆友金; 关键词：丙咪嗪紧密连接蛋白小鼠急性肺损伤

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汪影

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