张竞
- 作品数：9 被引量：16H指数：3
- 供职机构：吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省自然科学基金吉林省青年科研基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 毒胡萝卜素在制备抗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物中的应用
- 本发明涉及一种毒胡萝卜素在制备抗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物中的应用，属于兽药技术领域。解决了现有技术中针对猪血凝性脑脊髓炎病毒尚无特效的治疗药物的技术问题。本发明首次发现毒胡萝卜素能够显著抑制猪血凝性脑脊髓炎病毒的增殖...
- 贺文琦贾茜涵石俊超陆慧君张竞邱瑞召马莹
- 猪血凝性脑脊髓炎病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：5
- 2016年
- 为建立检测猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)血清抗体的间接ELISA方法,构建了高效表达PHEV核衣壳蛋白(N)的重组质粒(pET28a-N),Western blot检测该重组蛋白具有较好的免疫原性。以纯化的N重组蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为2mg/L,酶标二抗的最佳稀释倍数为1∶10 000,建立了用于PHEV抗体检测间接ELISA方法。此外,用该法(N-ELISA)对天津市地区采集到的200份猪血清样品进行检测,阳性检出率为83.5%,与前期工作中建立的全病毒作为包被抗原的间接ELISA诊断方法 (HEV-ELISA)检测结果的符合率为90.91%。结果表明:以重组N蛋白为包被抗原所建立的用于PHEV血清抗体检测的方法能够用于检测PHEV感染及相关的流行病学调查。
- 单长见张竞尹洋吕晓玲李姿兰云刚贺文琦高丰
- 关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒重组N蛋白间接ELISA血清抗体
- 小胶质细胞在猪血凝性脑脊髓炎病毒致神经损伤中的作用及其机制
- 猪血凝性脑脊髓炎是由猪血凝性脑脊髓炎病毒（Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV）感染引起的主要危害仔猪的一种急性、高度接触性传染病。患病仔猪临床可表现...
- 张竞
- 关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒中枢神经系统小胶质细胞活化
- 猪血凝性脑脊髓病毒在J774A.1细胞中的增殖特性及炎性因子表达被引量：2
- 2015年
- 为了探讨宿主巨噬细胞(J774A.1细胞)在猪血凝性脑脊髓炎病毒(Procine hemagglutinatin encephalomyelitis virus,PHEV)感染过程中的作用及其参与炎性反应的应答特征,本研究通过CPE观察、TCID50、免疫荧光(IFA)、ELISA和PT-PCR等方法,对PHEV感染J774A.1细胞的增殖特性及炎性因子IL-6、TNF-a、IL-1β等mRNA转录水平和蛋白水平的表达情况进行检测分析。IFA的检测结果显示,感染后8h后仅有少量的被荧光抗体标记细胞出现绿色荧光,随着感染时间的延长,荧光标记的细胞逐渐增加,直至感染后32~40h出现大量细胞出现荧光。TCID50结果显示,PHEV感染滴度的增值趋势与mRNA含量的变化基本一致,在感染后24~32h增殖速度最快,至32h病毒感染滴度达到最高。荧光定量RT-PCR结果显示,PHEV感染可诱导J774A.1细胞分泌的TNF-a、IL-6、IL-1βmRNA转录水平均显著升高,尤其IL-6mRNA的表达量显著增加,在48h达到对照组的25倍;TNF-αmRNA的表达量在感染后8h内增加为对照组的4倍,随后一直维持较高水平。ELISA结果显示,TNF-a、IL-6、IL-1β蛋白水平表达也显著增加。上述研究结果表明,PHEV不仅可以感染J774A.1细胞,而且能诱导其分泌多种细胞因子参与免疫应答,为进一步阐明机体重要免疫细胞在PHEV过程中的作用奠定了基础。
- 唐博张竞兰云刚潘伟田忠华贺文琦高丰
- 关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒实时荧光定量PCR
- 猪血凝性脑脊髓病毒刺激小鼠树突状细胞成熟及炎性因子分泌被引量：4
- 2015年
- 为了了解猪血凝性脑脊髓炎病毒(Procine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)感染机体后对树突状细胞(Dendritic cell,DC)的激活状况,以及DC在PHEV感染过程中参与免疫应答的能力,本试验分离了BALB\c小鼠骨髓细胞,并通过条件培养基诱导培养8d,获得纯度约77.69%的DC。将PHEV接种DC后,分别对其表面成熟标志分子CD40、CD80、MHCⅡ类分子以及分泌炎症因子的能力进行检测分析。结果显示,PHEV感染DC后T细胞共刺激分子CD40、CD80及MHCⅡ均有一定程度的上调,同时DC分泌细胞因子和趋化因子的能力显著增强,尤其IL-1β的mRNA表达量增高近10倍。经荧光定量PCR方法检测病毒刺激后DC模式识别受体的表达情况结果显示,TLR4和TLR9表达量变化不明显,TLR7的表达受到抑制;但Rig-I的表达量显著增加。结果表明,PHEV在体外能有效的活化DC并促使其成熟为有效的抗原提呈细胞,具有潜在的激活T、B淋巴细胞的能力。
- 赵家宽岳慧青张竞兰云刚田忠华高丰贺文琦
- 关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒树突状细胞炎性因子模式识别受体
- 猪血凝性脑脊髓炎病毒感染可激活脑内的小胶质细胞被引量：3
- 2015年
- 以猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)易感的BALB/c小鼠为实验动物模型,以小胶质细胞表面特异性标记物Iba1蛋白为检测对象,利用荧光定量PCR、Western-blot、免疫组化等方法,分别从基因转录水平、蛋白水平和组织学水平对PHEV感染后不同时间点小鼠脑内小胶质细胞的增殖、活化情况进行了检测分析。结果表明,与对照组相比,试验组小鼠脑组织内的Iba1基因转录水平、蛋白表达量均有升高,且都随着感染时间延长而增大。将采集的小鼠脑组织制作石蜡切片,免疫组化结果证实PHEV的感染激活了小胶质细胞,表现为细胞数量增多,呈聚集样分布;同时细胞形态变化也很明显,胞体变大并呈阿米巴状。上述试验证实PHEV感染小鼠后小胶质细胞发生了明显增殖、活化现象,为后期深入开展PHEV所致神经系统炎性损伤的机制研究奠定了基础。
- 唐志文赵家宽张竞兰云刚高丰贺文琦靳朝
- 关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒小胶质细胞增殖活化
- 猪血凝性脑脊髓炎病毒感染降低ZO-1表达致小鼠血脑屏障通透性升高被引量：2
- 2017年
- 为明确猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)感染后对机体血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性的影响,本试验以PHEV易感的BALB/c小鼠为实验动物模型,将PHEV接种小鼠后静脉注射伊文氏蓝(Evans blue,EB),运用形态学和化学定量方法检测EB通过BBB进入脑组织的状况。结果显示,接种病毒后3d的小鼠脑组织即出现肉眼可见的蓝色,定量检测结果证实其含量随着感染时间的延长而增加。同时利用荧光定量PCR和Western blot方法分别对病毒感染后不同时间点紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5进行核酸定量检测,证明感染组小鼠脑组织中ZO-1的基因转录水平随感染时间延长下调明显,而Occludin和Claudin-5的变化不明显。进而对脑组织中ZO-1蛋白表达水平进行检测,证实ZO-1的蛋白表达水平也发生下调,表明内皮细胞紧密连接完整性在病毒感染后期遭到了破坏。上述试验结果证实PHEV感染机体后可使BBB的通透性升高,而且这一变化与ZO-1的降低相关,为后期深入开展PHEV所致神经系统炎性损伤的机制奠定基础。
- 石俊超张竞徐梦实潘伟兰云刚赵魁高丰贺文琦
- 关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒血脑屏障伊文氏蓝ZOL
- miR-21a-5p对PHEV复制的影响及其靶基因Cntfr的验证被引量：2
- 2016年
- 为研究猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)感染过程中宿主miR-21a-5p对PHEV复制的影响,利用荧光定量PCR方法对PHEV感染过程中细胞内miR-21a-5p的表达变化进行了检测;之后,将化学合成的miR-21a-5p模拟体或抑制剂转染N2a细胞,接种PHEV后利用荧光定量PCR方法检测PHEV基因组RNA的含量。通过TargetScan、Microcosm和Miranda数据库预测miR-21a-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告系统对预测的靶基因进行验证。结果显示,PHEV感染N2a细胞后,miR-21a-5p的表达量明显升高。而有效抑制N2a细胞中miR-21a-5p的表达会使PHEV复制增殖显著下降;反之,miR-21a-5p过表达能使PHEV表达量升高。此外,生物信息学分析表明,miR-21a-5p可能在PHEV感染致病过程中参与了细胞免疫、神经损伤等过程。而预测靶基因Cntfr为CNTF受体,具有维持神经细胞形态和功能完整性的作用,并进一步利用双荧光素酶报告系统证实Cntfr为miR-21a-5p的靶基因。总之,miR-21a-5p在PHEV致病过程中具有极其重要的调控作用,影响PHEV的复制增殖,并具有直接靶向Cntfr基因维持神经细胞稳态的作用。研究结果不仅为miRNA参与调控PHEV复制提供数据支持,也为深入研究PHEV的致病机制提供新的思路。
- 吕晓玲兰云刚李姿崔学文张竞岳慧青高丰贺文琦
- 关键词：PHEV
- 猪血凝性脑脊髓炎病毒抑制神经细胞干扰素的产生
- 2017年
- 猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)属于β属冠状病毒成员,其具有典型的嗜神经性。多种冠状病毒可逃避宿主先天性免疫的识别而表现出明显的致病性,但宿主的先天性免疫在PHEV感染过程中发挥的作用还不是很清楚。为了明确神经细胞在PHEV感染过程中细胞自身的免疫应答状况,本研究对参与先天性免疫的重要炎性细胞因子和相关的通路变化情况进行了检测分析。用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对PHEV感染小鼠脑神经瘤母细胞(N2a)不同时间点的样品进行检测,结果证明没有IFN-β的表达,说明PHEV不能引起神经细胞产生Ⅰ型IFN。收集感染N2a细胞24h的上清,ELISA方法检测TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ的分泌情况,仅有IL-6呈现高水平表达,说明PHEV感染N2a细胞诱发了IL-6的先天性免疫反应。免疫荧光方法检测PHEV感染N2a细胞24h后重要核转录因子IRF-3和NF-κB的核定位情况,发现NF-κB移位到了胞核,IRF-3仍然存在于胞浆,说明PHEV仅激活了NF-κB信号通路。以上试验结果表明,PHEV进入中枢神经系统时可逃避神经细胞以IFN-β为主的免疫识别,该结果可为深入开展PHEV抑制机体干扰素产生的机制研究奠定基础。
- 岳慧青杨雅雯姜丹张竞石俊超潘伟贺文琦高丰宋德光
- 关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒干扰素IL-6NF-ΚB
