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PCV2与PPV共感染猪PBMCs对其白细胞介素转录时相影响: 2015年; 为分析PCV2与PPV体外共感染对猪外周血单个核细胞(PBMC)对其白细胞介素mRNA转录水平的影响,探讨PCV2与PPV体外混合感染的致病机制。运用荧光定量PCR技术,测定和分析了PCV2和PPV感染PBMC后PCV2,PPV的病毒核酸含量及IL-1β,IL-6,IL-8,IL-12p35,IL-12p40,IL-13,IL-17,IL-18等的转录时相变化。结果表明,PCV2,PPV能够感染PBMC细胞,PCV2/PPV共感染中PCV2,PPV的含量分别在24 h显著最高(P<0.01);PCV2,PPV单独感染和PCV2与PPV共感染PBMC后引起IL-1β,IL-6,IL-8,IL-17转录水平上升,IL12p35,IL-12p40,IL-18转录水平明显受到抑制。由PCV2,PPV共感染而引起的免疫反应和免疫抑制比单独感染更明显。; 景亚星张睿智何潇湘兰培英曹贝贝靳晓慧徐卫松魏战勇; 关键词：猪细小病毒共感染白细胞介素

PDCoV、TGEV、PEDV多重RT-PCR检测方法的建立及临床初步应用: 猪传染性胃肠炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起猪...; 兰培英; 关键词：双重RT-PCR 多重RT-PCR; 文献传递

一种猪德尔塔冠状病毒毒株: 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒毒株（Porcine Deltacoronavirus），CCTCC NO：V201558。本发明获得一种猪德尔塔冠状病毒毒株，将对该病毒的病原学研究、流行病学调查、诊断防制及疫苗研究奠定...; 胡慧魏战勇杨国宇王亚宾曹贝贝韩丽兰培英张利卫; 文献传递

猪流行性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：7: 2015年; 为建立一种快捷、特异、敏感检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的方法,本研究根据Gen Bank中登录的PEDV ZKHFQ株的N基因序列的保守区设计一对特异性引物,经过对反应条件进行优化,建立了检测PEDV的SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法。该方法对常见的病毒均未检测到荧光信号,而仅对PEDV检测为阳性,其灵敏度为57拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于1%。利用该方法对26份疑似PEDV感染的病料样品进行检测,结果显示本研究所建立的方法对PED的检出率比常规PCR高23.07%。本实验建立的荧光定量RT-PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可以用于临床PEDV的检测。; 曹贝贝韩丽于朋飞兰培英程慧芳宋月胡慧; 关键词：猪流行性腹泻病毒 SYBR I 荧光定量RT-PCR

日本乙型脑炎病毒对猪外周血单核细胞炎性因子mRNA转录时相影响的研究: 2016年; 为分析猪日本乙型脑炎病毒(JEV)感染猪外周血单核细胞后对其促炎因子转录的影响,探讨JEV感染的分子免疫致病机制。采用real-time RT-PCR方法,测定并分析了JEV感染猪外周血单核细胞(PBMC)后病毒RNA含量及白细胞介素(IL-8、IL-12p35、IL-12p40、IL-17、IL-18)炎性细胞因子mRNA转录时相的变化。结果显示,JEV感染猪PBMC后引起IL-8,IL-12p35和p40的分泌呈现不规则的曲线,IL-18表达量持续升高;IL-17表达量持续下降,仅在感染后48 h的时候达到峰值。以上结果表明,JEV感染PBMC可促使炎性因子分泌增加,参与细胞免疫应答。; 何潇湘景亚星靳晓慧兰培英张利卫周雍魏战勇; 关键词：日本乙型脑炎病毒炎性细胞因子转录时相

一种猪德尔塔冠状病毒毒株: 本发明公开了一种猪德尔塔冠状病毒毒株（Porcine Deltacoronavirus），CCTCC NO：V201558。本发明获得一种猪德尔塔冠状病毒毒株，将对该病毒的病原学研究、流行病学调查、诊断防制及疫苗研究奠定...; 胡慧魏战勇杨国宇王亚宾曹贝贝韩丽兰培英张利卫; 文献传递

猪TGEV HN-2012株ORF3a和ORF3b基因遗传变异分析及其真核表达研究被引量：2: 2016年; [目的] 研究猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）HN-2012株ORF3a和ORF3b基因的遗传变异情况。[方法] 根据GenBank公布的猪传染性胃肠炎病毒ORF3a和ORF3b基因序列,分别设计合成1对特异性引物,通过RTPCR从猪传染性胃肠炎病毒HN-2012株的cDNA中扩增ORF3a和ORF3b基因,经克隆测序后,将其基因序列与NCBI中不同来源的TGEV毒株的相应序列进行同源性分析,构建系统进化树并进行遗传变异分析,然后将ORF3a和ORF3b基因亚克隆至真核表达载体,构建pCAGGS-ORF3a-flag和pCAGGS-ORF3b-flag载体,转染293T细胞进行表达,利用flag标签抗体对2个基因的蛋白表达情况进行Western blot分析。[结果] TGEV HN-2012株的ORF3a基因与其他毒株间核苷酸的同源性为92.6%～100%,ORF3b基因与其他毒株间核苷酸的同源性为98.6%～99.7%。Western blot[结果]表明,ORF3a蛋白和ORF3b蛋白的分子质量约为8ku和28ku。[结论] TGEV HN-2012株的ORF3a基因与CH/JLY2/08、CH/HLJH/08株等亲缘关系较近,ORF3b基因与TS株、Miller M6株等亲缘关系较近,与我国其他毒株关系较远;成功实现了ORF3a和ORF3b蛋白在293T细胞中的表达。; 曹贝贝兰培英韩丽刘玲玲韦学雷胡慧; 关键词：293T细胞

猪Delta冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：27: 2018年; 猪Delta冠状病毒（PDcoV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）均是能引起仔猪腹泻的冠状病毒，通过临床症状和剖检很难鉴别诊断，建立同时检测且能够鉴别诊断这3种疾病的快速检测方法对于临床诊断具有重要的意义。参照GenBank中登录的PDCoV，NPEDVM和TGEVN基因的基因序列，利用Primer5．0设计合成3对能扩增特异性目的片段的引物，构建重组质粒，并对RT-PCR反应条件进行优化，建立了检测PDCoV，PEDV和TGEV的多重RT—PCR诊断方法，并对所建立的方法进行敏感性、特异性和重复性分析。利用该方法对河南176份临床样品进行检测，并与普通RT-PCR检测方法对该检测方法进行比较分析。结果表明，所建立的三重RT-PCR方法对PDCoV的最低检测量是3．14×10 3拷贝／uL；PEDV的最低检测量是3．88×10 4拷贝／uL和TGEV的最低检测量是3．68×10 4拷贝／uL。所建立的方法具有较好的特异性，对猪博卡病毒（PboV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟（CSFV）和猪圆环病毒（PCV）等猪常见病毒的扩增结果均为阴性。应用所建立的三重RT-PCR方法对176份临床收集的仔猪腹泻样品进行PEDV，PDCoV和TGEV检测，并将检测结果和单重RT-PCR检测方法比较，结果显示，多重RT—PCR检测结果与常规单一RT～PCR的结果符合率均为100％。综上，本试验建立了能同时检测PDCoV，PEDV和TGEV的三重RT—PCR方法，为临床上这3种疫病的快速检测和流行病学调查奠定了基础。; 韦学雷梁青青曹贝贝张君涛韩丽兰培英胡慧; 关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒

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兰培英

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