张钊
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：北京交通大学理学院生命科学与生物工程研究院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基于负染-电镜的Aβ体外聚集表征测试要点分析
- 2016年
- 本文应用电镜负染色技术,对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)中所涉及的β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)的聚集规律进行了分析。通过对样品的浓度、p H值、温度和时间等设置系列梯度,以及调整负染试剂的种类、浓度和染色时间,优化了Aβ寡聚体样品制备以及电镜观察的最佳条件,获得了清晰的Aβ纤维图像并用以估算纤维长度。实验结果表明:经过六氟异丙醇给予单体化处理,并溶于无水二甲基亚砜(DMSO)的Aβ(100μmol·L^(-1)),在p H7.2的PBS中4℃孵育24 h,Aβ寡聚体形态清晰,且Aβ42寡聚体比Aβ40寡聚体聚集趋势更明显。在p H 8.0的硼酸缓冲液中,Aβ42(40μmol·L^(-1))在37℃孵育72 h后,纤维形成明显;而Aβ纤维样品经过煮沸后再制备负染样品,所得电镜图像更为清晰,便于对纤维长度和结构进一步分析。因此电镜负染色技术,可作为一种快捷,直观的Aβ体外聚集形貌表征的质控方法。
- 张钊董润敏张莹孙维敏王荷王欢杨海强温杰
- 关键词：透射电子显微镜Β-淀粉样蛋白
- EGFP-LC3稳定细胞系的建立及对Aβ自噬效应的研究
- 2015年
- 该文建立了稳定表达EGFP-LC3的HEK293细胞系,以10μmol/L的Aβ肽及其不同疏水性氨基酸含量的截短形式处理细胞24 h,计数LC3的荧光斑点数;Western blot检测LC3B表达量的变化;MTT检测特定Aβ诱导细胞自噬后对细胞活性的差异;用透射电镜确认自噬体的细胞超微结构。结果显示,G418(700μg/m L)筛选6周后,建立了稳定表达EGFP-LC3的HEK293细胞系;Aβ25-35、Aβ40和Aβ42诱导细胞内LC3荧光斑点的效果较明显;Western blot结果显示LC3B的酯化,即LC3BI向LC3BII转变;MTT检测发现,与Aβ40相比,Aβ42处理后伴随自噬的细胞毒性更强;电镜可以见到Aβ诱导的自噬小体。提示,Aβ肽及其截短的疏水性片段均可诱导自噬,且诱导自噬的效果与疏水性氨基酸含量无关;同时,Aβ42细胞损伤强于Aβ40。该研究为进一步探讨AD自噬机制提供了实验基础。
- 房芳张莹彭向雷王荷张钊郑妍鹏
