王艺红
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：上海市科委科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌菌悬液光密度值与菌落计数的关联性被引量：7
- 2016年
- 目的建立一种基于光密度值计算结核分枝杆菌菌落数的可靠方法。方法利用低频超声和玻璃珠研磨两种方法制备H37Ra菌悬液,菌悬液2倍梯度稀释后,分别测定各个稀释度菌悬液在600 nm处的光密度值（OD600值）,并分析OD600值与稀释倍数曲线,确定最佳的菌悬液制备方法,OD600线性范围,以及OD600值与CFU关联曲线。结果 OD600值为0.1～0.6,线性范围内OD600值与稀释倍数线性回归分析结果显示,玻璃珠研磨法和低频超声法相关系数（R2）分别为0.98、1.00,均呈良好的相关性,且低频超声法比玻璃珠研磨法的相关性好,其菌液分散更均匀。OD600值与CFU值线性回归分析结果显示,玻璃珠研磨法和低频超声法回归方程分别是：CFU=2.35×107×OD600＋4.42×105、CFU=3.26×107×OD600＋6.89×105。结论低频超声法是一种较好的结核分枝杆菌菌悬液制备方法,结合OD600值测定,可成为一种可靠、快速的结核分枝杆菌定量方法。
- 秦云贺王艺红郭庆龙王洪海张雪莲
- 关键词：结核分枝杆菌菌落形成单位CFU
- 利用表型芯片系统高通量分析H37Ra与H37Rv差异表型被引量：1
- 2016年
- H37Rv是结核分枝杆菌标准有毒株,H37Ra是从H37Rv获得的稳定减毒株,但目前H37Ra毒力减弱原因尚不完全清楚。本研究利用表型芯片系统,高通量分析H37Ra生长表型,并与H37Rv表型比较,筛选两菌株表型差异,分析与H37Ra毒力减弱可能的相关表型及分子机制。结果发现,与H37Rv相比,H37Ra耐酸及耐渗透压能力显著下降,且不能利用丁二酸单甲酯和吐温40作为碳源。结核分枝杆菌耐酸能力直接影响其在吞噬体中的生存和代谢,耐高渗能力影响其必需营养物质的跨膜运输,代谢途径的改变影响其在宿主内的能量摄取,三者改变均可能与H37Ra毒力减弱相关。
- 王艺红郭庆龙周凤竹苟宗超王洪海张雪莲
- 关键词：结核分枝杆菌表型毒力
- 乙酰化修饰调控结核杆菌异柠檬酸裂合酶的研究
- 2015年
- 目的:探索结核杆菌异柠檬酸裂合酶(ICL)蛋白322位点赖氨酸(Lys322)的乙酰化修饰对蛋白功能的调控作用。方法:构建结核杆菌ICL蛋白原核表达载体p ET28a-icl,并对Lys322位点进行定点突变为精氨酸(Arg,R)和谷氨酰胺(Glu,Q),体外表达纯化获得重组蛋白ICLWT、ICL322R和ICL322Q。通过Western blotting和酶活性测定来揭示Lys322位点突变前后对蛋白的乙酰化修饰水平及蛋白功能的影响。结果:Western blotting检测发现大肠杆菌表达体系获得的ICLWT、ICL322R和ICL322Q蛋白均有较高水平的蛋白赖氨酸乙酰化修饰信号,较ICLWT,ICL322R和ICL322Q突变蛋白的酶活性分别下降了大约50%和70%。结论:在大肠杆菌的表达体系中,ICL蛋白可以获得乙酰化修饰。ICL322Q突变蛋白酶活性的显著下降,揭示Lys322位点乙酰化修饰对ICL蛋白的功能存在负向调控。为未来深入探索赖氨酸乙酰化修饰对结核杆菌代谢,潜伏感染的调控作用奠定了基础。
- 李瑶瑶毕静王艺红秦云贺张雪莲
- 关键词：乙酰化修饰定点突变
