张倩
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
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- 疥螨eIF4E和UPP基因的克隆表达及免疫鉴定
- 2023年
- 目的克隆、表达疥螨(Sarcoptes scabiei,S.scabiei)真核翻译起始因子(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)和尿苷磷酸化酶(Uridine phosphorylase,UPP),并鉴定其免疫原性。方法首先提取兔疥螨总RNA,通过反转录聚合酶链式反应得到cDNA,根据NCBI数据库eIF4E和UPP序列设计引物,PCR扩增获得疥螨eIF4E、UPP完整基因序列,对基因序列进行生物信息学分析,构建pET-32a(+)重组质粒,SDS-PAGE验证重组蛋白表达情况,最后免疫印迹法鉴定其免疫原性。结果疥螨eIF4E基因的开放阅读框(ORF)长度约为561 bp,编码186个氨基酸,疥螨UPP基因的ORF长度约为939 bp,编码312个氨基酸。与其他物种氨基酸序列比对显示,eIF4E、UPP氨基酸序列与粉尘螨、屋尘螨、热带无爪螨亲缘关系较近,进化树分析eIF4E、UPP氨基酸序列与节肢类动物在同一分支。同时,成功诱导表达了疥螨重组eIF4E和UPP蛋白,免疫印迹结果表明重组eIF4E和UPP蛋白可与自然感染疥螨的兔血清结合,具有较好的免疫原性。结论疥螨重组eIF4E和UPP蛋白均具有较好的免疫原性。
- 张倩徐路阳郭茂川李晓萍李敏何冉
- 关键词：疥螨克隆表达免疫原性
