赵海洲
- 作品数：10 被引量：27H指数：3
- 供职机构：肇庆学院生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 何首乌提取物对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用被引量：9
- 2016年
- 目的研究何首乌提取物对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP+致SH-SY5Y细胞损伤模型,实验分为对照组、MPP+损伤模型组、何首乌提取物干预组。干预组在MPP+损伤的基础上,给予不同浓度何首乌提取物(终质量浓度5、25、100 mg/L)。MTT比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色和白光下观察细胞形态变化,比色法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及细胞中丙二醛(MDA)含量;通过荧光强度观察活性氧(ROS)的含量和线粒体膜电位的变化。结果与对照组相比,模型组中细胞活性显著降低,Hoechst33258染色和白光下可见细胞胞体变小、核皱缩、碎裂有明显的颗粒状和固缩状荧光,并且细胞上清液中LDH泄漏明显增多、细胞中MDA含量和ROS显著升高而线粒体膜电位显著降低(P<0.05)。与模型组比较,预先4 h给予不同浓度的何首乌提取物(5、25、100 mg/L)能明显改善SH-SY5Y细胞的活性,降低细胞产生的LDH、MDA含量,并恢复线粒体膜高能电位,且对ROS有明显的抑制效果(P<0.01)。结论何首乌提取物对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著的保护作用,其保护作用与其抗氧化应激作用有关。
- 杨旭赵海洲徐大德罗展远朱晶刘文华贝伟剑
- 关键词：何首乌提取物SH-SY5Y细胞
- 杆状病毒核心基因ac78的克隆、表达与活性研究被引量：1
- 2020年
- 杆状病毒核心基因ac78在杆状病毒的生活周期中具有重要作用。生物信息学分析发现,Ac78与斯氏假单胞菌的细胞色素C氧化酶cbb3-型亚基III具有一定的序列一致性,表明Ac78可能具有氧化酶活性,并在氧化还原反应中具有一定功能。用PCR的方法成功扩增得到ac78基因,该基因序列与GenBank上的苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV) ac78基因的核苷酸同源性100%,将其克隆至原核表达载体p QE30,构建了ac78基因原核表达质粒,转化大肠杆菌M15[pREP4],在1 mmol/L IPTG和低温诱导下超量表达了可溶性的目的蛋白。使用Ni-NTA Resin蛋白纯化树脂获得了较纯的含有6×His接头的Ac78蛋白,使用纯化细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒测定其细胞色素C氧化酶活性,结果为阴性,表明Ac78可能不具有细胞色素C氧化酶活性。上述研究结果为深入探究Ac78的作用机理打下了坚实的基础。
- 李赛男刘文华钟佩桥赵海洲杨永盼
- 关键词：杆状病毒克隆原核表达活性测定
- 甜菜夜蛾核多角体病毒VP39基因的克隆与生物信息学分析
- 2019年
- VP39是杆状病毒核衣壳主要结构蛋白基因,为研究VP39在杆状病毒生活周期中的可能作用,用PCR方法克隆得到甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus,SeMNPV)VP39全长基因(Sevp39),将其克隆至pMD18-T载体上,获得重组质粒T-Sevp39,进行序列测定和生物信息学分析。序列测定结果表明:扩增序列大小为981 bp,与GenBank登录序列(Genbank accession No.NC_002169)核苷酸同源性99.9%,第308位的碱基由G突变成T。序列分析表明:Sevp39编码蛋白(Sevp39)有多个可能的N-糖基化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪氨酸激酶磷酸化位点和1个N-豆蔻酰化位点。蛋白序列比对结果表明:Sevp39与绝大部分杆状病毒VP39的序列相似性均大于30%,在Sevp39同源蛋白中有6个高度保守的半胱氨酸残基(Cys)。蛋白质二级结构预测结果显示:Sevp39可能形成7个α螺旋和14个β折叠,高度保守的Cys^17参与了β折叠的形成。上述结果为研究Sevp39在病毒入侵和病毒复制过程中所担负的功能奠定了实验基础。
- 李赛男李萌赵海洲姜玉霞
- 关键词：甜菜夜蛾核多角体病毒克隆生物信息学分析
- 杆状病毒Ac78 C末端保守区域的功能初步分析被引量：1
- 2015年
- 杆状病毒模式种苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus，AcMNPV）的orf78（即Ac78）是最近被发现的杆状病毒核心基因，在杆状病毒的生活周期中具有重要功能．氨基酸序列分析表明，Ac78的C末端105～108位氨基酸区域在GroupINPVs旁系同源物中高度保守．为研究该保守区域在Ac78功能中的作用，利用Bac—to-Bac杆状病毒表达载体系统成功构建了缺失该保守区域，并且携带绿色荧光蛋白基因和多角体蛋白基因的Ac78截短补回型重组病毒（vAe78：del105．108）．荧光显微镜分析和病毒生长曲线测定结果表明，在vAc78：del105．108转染的Sf9细胞中，感染性的芽生型病毒粒子（buddedvirion，BV）产生量与Ac78全长补回型重组病毒（vAc78：HA）基本一致；电镜观察发现，在vAc78：del105．108转染的细胞中，呈现与vAc78：HA的现象一致的典型的杆状病毒感染特征，多粒包埋型病毒粒子（multiple nucleocapsid—enveloped occlusion-derived virion，M—ODV）以及包埋有M-ODV的包涵体均能正常形成；免疫荧光实验表明，在vAc78：del105．108感染的Sf9细胞中，从病毒感染细胞24h时开始，Ac78专一定位于感染细胞的内核膜附近，与vAc78：HA的现象一致．上述结果表明，Ac78的C末端105-108位氨基酸保守区域对于BV和M—ODV的有效产生以及Ac78的亚细胞定位非必需．
- 李赛男杨凯刘文华赵海洲
- 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒
- 丁氟螨酯对SH-SY5Y细胞的毒性作用及其机制被引量：3
- 2017年
- 目的研究丁氟螨酯对人经神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞的毒性作用及其机制。方法加入丁氟螨酯0.03,0.06,0.125,0.25,0.5,1,2,2.6,4,6,8和16 mmol·L^(-1)处理SH-SY5Y细胞48 h,MTT法测定细胞存活;DCFH-DA荧光探针标记法检测细胞内活性氧(ROS)水平;JC-1标记法检测细胞线粒体膜电位;Hoechst 33258染色观察细胞核形态;碘化丙啶(PI)染色和流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;Western蛋白印迹法检测磷酸化P38蛋白(p-P38)和磷酸化Jun激酶(p-JNK)表达水平。结果与溶剂(DMSO)对照组相比,共孵育48 h后,丁氟螨酯≥0.06 mmol·L^(-1)时可降低细胞存活率(P<0.05),且随浓度增高细胞存活率有降低趋势,IC_(50)为2.6 mmol·L^(-1);丁氟螨酯1,2,4和6 mmol·L^(-1)组细胞ROS水平升高(P<0.01),线粒体膜电位下降(P<0.01)。Hoechst 33258染色结果显示,丁氟螨酯2,4和6 mmol·L^(-1)组SH-SY5Y细胞出现颗粒状荧光,细胞核固缩和崩解;流式细胞仪检测结果显示,丁氟螨酯2,4和6 mmol·L^(-1)组细胞凋亡率由DMSO对照组的(0.7±0.1)%分别上升至(6.7±0.1)%,(72.4±8.6)%和(90.7±3.2)%(P<0.01);丁氟螨酯4和6 mmol·L^(-1)组G_1期细胞较DMSO对照组明显增加(P<0.01);Western蛋白印迹结果表明,丁氟螨酯4和6 mmol·L^(-1)组p-JNK表达均升高(P<0.01),丁氟螨酯6 mmol·L^(-1)组p-P38表达水平增加(P<0.01)。结论丁氟螨酯可能通过氧化损伤、激活P38蛋白和JNK蛋白诱导SH-SY5Y细胞G_1期阻滞和凋亡。
- 赵海洲陈永星李楠杨旭李赛男刘文华
- 关键词：SH-SY5Y细胞细胞凋亡活性氧应激反应
- Parkin共调基因调控功能与疾病研究进展被引量：2
- 2018年
- Parkin共调基因(PACRG)与帕金森病相关基因Parkin共表达,共用一个双向启动子。它与微管蛋白的功能关系密切,通过微管蛋白调节鞭毛、纤毛的运动,参与精子发育,还能够减弱Parkin底物的毒性作用,增加细胞成活率。SNP分析结果显示,PACRG与麻风病、伤寒副伤寒、癌症、肺结核等疾病的发生具有相关性。该文对PACRG基因调控功能和相关疾病研究进展做一综述。
- 赵海洲李军马延红刘文华
- 关键词：鞭毛纤毛帕金森病麻风病癌症
- 稳定表达GFP-Parkin融合蛋白的SH-SY5Y细胞系的建立和功能初探
- 2017年
- 目的:建立稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系,并检测Parkin对MPP^+引起的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法:将Parkin编码序列克隆到载体pEGFP-C1中,构建重组质粒pEGFP-Parkin,转染SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,建立稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系;荧光显微镜和Western印迹鉴定Parkin表达,MTT法检测Parkin对MPP^+致细胞损伤的保护作用。结果:酶切鉴定及测序结果表明重组质粒pEGFP-Parkin构建正确;荧光显微镜下可见细胞内有GFP-Parkin的融合表达,Western印迹检测发现相对分子质量79×103的蛋白条带;MTT结果显示Parkin能够减弱MPP^+对SH-SY5Y细胞的损伤,与对照组相比,存活率高约15%,差异显著(P<0.05)。结论:构建了稳定表达GFP-Parkin的SH-SY5Y细胞系,为进一步研究Parkin的细胞保护作用和其他功能机制奠定了基础。
- 赵海洲莫灿坤林展乐刘文华
- 关键词：SH-SY5Y细胞MPP+
- 芦丁对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用被引量：7
- 2018年
- 目的：研究芦丁对1-甲基-4-苯基-吡啶离子（MPP＋）诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法：体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP＋诱导SH-SY5Y细胞损伤模型,实验分为空白组,MPP＋损伤模型组,芦丁干预组。模型组用1 mmol·L^-1MPP＋处理细胞48 h,干预组在MPP＋损伤基础上,给予不同质量浓度芦丁（50,100,200,300 mg·L^-1）。噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性;Hoechst 33342染色观察细胞核形态变化;2＇,7＇-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针标记法观察细胞内活性氧（ROS）的变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞色素C（Cyt-C）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK1/2）蛋白表达水平。结果：与空白组比较,模型组中细胞活性显著降低（P〈0.01）,Hoechst 33342染色下可见细胞胞体变小、核皱缩,细胞ROS显著升高（P〈0.01）,线粒体膜电位显著降低（P〈0.01）。Western blot结果表明,模型组Cyt-C含量升高（P〈0.01）,p-ERK1/2水平降低（P〈0.01）。与模型组比较,预先4 h给予不同浓度的芦丁（100,200,300 mg·L^-1）能明显改善SH-SY5Y细胞的活性（P〈0.05,P〈0.01）,抑制ROS升高（P〈0.01）,并恢复线粒体膜高能电位（P〈0.05）。Western blot结果显示,芦丁能够抑制MPP＋引起的Cyt-C蛋白升高（P〈0.01）和p-ERK1/2蛋白降低（P〈0.05,P〈0.01）。结论：芦丁对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著的保护作用,其机制可能与抗氧化应激有关。
- 袁倩倩赵海洲马延红龚记熠乙引刘文华
- 关键词：芦丁SH-SY5Y细胞神经保护
- TLC法快速辨别与真伪鉴定川黄柏和关黄柏被引量：5
- 2017年
- 为了建立中药材川黄柏(Phellodendri Chinense)和关黄柏(Cortex Phellodendri Amurensis)的快速辨别和真伪鉴定方法,基于川黄柏含极少量黄柏酮而关黄柏含大量黄柏酮,同时川黄柏和关黄柏两者均含有盐酸小檗碱,用薄层色谱法中的分级展开法,在日光灯下将样品与黄柏酮标准品对照,通过两者显著差异性快速辨别川黄柏和关黄柏,同时在紫外灯下与盐酸小檗碱标准品对照实现真伪鉴定.该方法操作简单,具有快速,分离效果和重现性好的优点.薄层色谱法能够应用于川黄柏与关黄柏的快速辨别和真伪鉴定,有助于该类中药材的质量控制.
- 梁凤兰赵海洲练益成黄政贵
- 关键词：川黄柏关黄柏薄层色谱法
