欧海龙
- 作品数：8 被引量：50H指数：3
- 供职机构：贵阳医学院基础医学院更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金贵州省科学技术基金贵州省卫生厅科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 慢病毒介导的重组人α1-抗胰蛋白酶在小鼠体内的表达被引量：1
- 2012年
- 目的:构建重组人α1-抗胰蛋白酶(hAAT)因子的慢病毒表达载体,并通过体外细胞水平和小鼠体内分析其表达情况.方法:通过RT-PCR的方法扩增出hAAT基因的编码序列,并构建重组慢病毒质粒;经体外包装后,感染鼠成纤维细胞及注射小鼠.荧光显微镜下观察GFP的表达情况,同时对收获的细胞及感染小鼠的肝脏或血浆进行Western blot、ELISA检测.结果:获得重组hAAT因子的慢病毒表达质粒pLVX-ser;包装后得到8×106TU/mL滴度的慢病毒颗粒.通过荧光显微镜下观察,显示重组hAAT因子在成纤维细胞中正常表达;对小鼠尾静脉注射病毒之后,进行hAAT因子检测,Western blot结果说明hAAT因子在小鼠体内成功表达;通过ELISA检测发现hAAT在小鼠体内的表达平均达190g/L左右,而且在慢病毒的介导下hAAT在小鼠中的表达可持续3mo以上.结论:重组慢病毒载体可高效、持续表达hAAT因子,为通过基因工程生产重组hAAT因子以及为α1-AT缺乏症的基因治疗奠定基础.
- 欧海龙雷霆雯李红梅王筑婷莫晓川
- 关键词：Α1-抗胰蛋白酶慢病毒
- LDLR^(-/-)小鼠中脂代谢相关基因的表达被引量：3
- 2012年
- 目的分析LDLR基因敲除小鼠体内脂代谢相关基因ApoB100、PPARα、LXRα以及ABCA1与野生型相比表达水平的差异情况。方法应用多重PCR的方法对LDLR-/-小鼠基因型进行鉴定;接着分别对LDLR-/-小鼠和野生型小鼠脂代谢相关基因的mRNA相对丰度以及蛋白表达水平进行qRT-PCR、ELISA分析。结果与野生型相比,LDLR-/-小鼠中ApoB100、PPARα的mRNA及蛋白表达均上调(P<0.05);ABCA1的表达水平下降(P<0.01),蛋白水平上的下降幅度更为明显;而LXRα不管在mRNA或蛋白水平上均检测不到差异表达。结论 LDLR基因功能的缺失对不同的脂类代谢相关基因的表达产生不同的影响。本研究有助于人们进一步了解家族性高胆固醇血症的发病机制,同时也为药物设计中靶位点的选择提供参考价值。
- 欧海龙严忠海雷霆雯
- 关键词：脂代谢基因表达
- 姜黄素对apoE^(-/-)小鼠抗氧化能力和血脂水平的影响被引量：2
- 2015年
- 目的探讨姜黄素在小鼠体内抗氧化能力和血脂代谢中的作用。方法高脂饮食诱导基因敲除的apoE-/-小鼠8周之后,用不同剂量(50、100、200mg/kg体质量)的姜黄素连续灌胃4周、8周或12周。获取血清和肝脏并分别检测各种抗氧化指标和各项血脂含量。结果血清和肝脏的SOD和CAT的活性、MDA含量的变化均随剂量的升高而表现得更加明显;各项血脂指标降低,也表现出剂量的依赖性。其中在中剂量时SOD和CAT的活性的升高、MDA含量的下降均能达到显著差异(P<0.05),而各项血脂指标包括总胆固醇、甘油三脂和低密度脂蛋白胆固醇只有在高剂量时才表现出显著下降(P<0.05)。结论姜黄素对于高脂诱导的动脉粥样硬化小鼠具有抗氧化,降低血脂的作用。
- 欧海龙张庆海
- 关键词：姜黄素血脂
- 花青素对动脉粥样硬化模型小鼠抗氧化和血脂代谢的影响被引量：3
- 2015年
- 目的探讨花青素在动脉粥样硬化模型小鼠体内抗氧化能力和血脂代谢中的作用。方法高脂饮食诱导基因敲除的ApoE-/-小鼠8周后,每天用不同剂量(低、中、高:50、100、200 mg/kg)的花青素对小鼠连续灌胃8周。获取血清和肝脏并分别检测各抗氧化指标和各项血脂含量。结果中、高剂量组血清中SOD活性的提高及血清和肝脏的MDA含量的降低与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组肝脏的SOD活性与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,随着剂量的增加不断降低,中、高剂量组中TG水平与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);高剂量组TC和LDL-C水平与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论花青素对高脂诱导的动脉粥样硬化小鼠具有抗氧化、降低血脂的功能。
- 欧海龙张庆海
- 关键词：花青素APOE-/-小鼠动脉粥样硬化
- 姜黄素对果蝇抗氧化能力和衰老的影响被引量：5
- 2015年
- 以黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)为试验动物,通过喂食含不同比例姜黄素(0,0.5,1.0,1.5mg/g)的食物,分析姜黄素对果蝇体内抗氧化能力和寿命的影响。结果显示:1.0 mg/g和1.5 mg/g姜黄素处理组与对照组(0 mg/g)相比具有显著的延寿效果(P<0.05),半数生存期分别提高了11%和19%,平均寿命分别延寿了26%和31%;姜黄素(1 mg/g)处理还降低衰老相关基因d InR,BD-2,Hsp68和Gst D1的表达,其中d InR,Hsp68和Gst D1基因的表达水平下降较为显著(P<0.05)。通过对与氧化应激能力相关指标的检测发现,随着姜黄素剂量的上升,黑腹果蝇体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性不断提高,而丙二醛(MDA)水平逐渐降低,特别是在1.5 mg/g浓度的姜黄素处理后,果蝇体内CAT活性是对照的3倍多,同时MDA水平降低近1倍。说明姜黄素在果蝇体内具有明显的清除自由基、抗氧化及抑制机体衰老的功能。
- 欧海龙张庆海
- 关键词：姜黄素抗氧化衰老黑腹果蝇
- 利用RNA干扰技术抑制小鼠羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶基因的表达被引量：3
- 2013年
- 目的为了探寻一种更有效的家族性高胆固醇血症(FH)基因治疗新途径,通过慢病毒介导RNA干扰的方法在H22细胞系及C57BL/6J纯系小鼠中抑制内源性羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMG-CoAR)基因表达进行研究。方法从HMG-CoAR基因序列中选择三段作为靶序列(T1、T2和T3),并构建重组慢病毒RNAi载体;经体外包装后,分别感染H22细胞系及注射小鼠。通过qRT-PCR检测HMG-CoAR mRNA丰度;利用WesternBlot、ELISA方法分析HMG-CoAR的表达水平。结果与空载体对照相比,三个实验组中稳定转染细胞的HMG-CoAR表达水平显著降低(P<0.05),同时感染5天后小鼠的肝脏HMG-CoAR mRNA水平、蛋白含量以及血浆中HMG-CoAR表达均显著降低(P<0.05),其中T3位点的抑制效率最高,是空质粒对照的1/3。另外,对三个载体的持续性抑制能力分析显示,在处理后的至少50天内,三个实验组小鼠中HMG-CoAR表达量均有效地被抑制,其中T1靶点的抑制效果最为稳定,而T3靶点的波动最大,但抑制效率一直最高。结论三个重组慢病毒RNAi载体均可显著抑制内源性HMG-CoAR表达,可为下一步试图通过下调HMG-CoAR表达的方式,降低FH患者体内胆固醇水平的FH基因治疗奠定基础。
- 欧海龙严忠海焦飞
- 关键词：RNA干扰胆固醇家族性高胆固醇血症基因治疗
- 苦荞蛋白的分离及其体外抗氧化活性的研究被引量：13
- 2015年
- 目的:提取苦荞蛋白并评价苦荞蛋白各组分的体外抗氧化能力。方法:采用不同溶剂分级提取苦荞中的清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,并采用考马斯亮蓝蛋白定量法测定各组分的蛋白含量,SDS-PAGE电泳观察各蛋白组分的分子量分布情况;采用比色法测定各蛋白组分在体外抑制超氧阴离子自由基(O2-·)的能力和清除羟自由基(·OH)的能力。结果:清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白占总蛋白的百分含量分别为42.65%、14.08%、9.54%和33.73%,清蛋白含量最高,醇溶蛋白含量最少;各蛋白组分的分子量分布不一样;清蛋白和球蛋白均具有清除羟自由基(·OH)的能力和抑制超氧阴离子自由基(O2-·)的能力,且球蛋白高于清蛋白(p<0.05),而醇溶蛋白和谷蛋白无抗氧化能力。结论:苦荞中的清蛋白和球蛋白具有体外抗氧化能力。
- 李红梅何晓兰张礼林孙达权欧海龙雷霆雯许庆忠
- 关键词：苦荞抗氧化活性体外
- ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型的建立被引量：20
- 2015年
- ApoE-基因敲除小鼠(ApoE-/-)经含有21%脂肪和0.15%胆固醇的高脂饲料喂食12周后进行各项血脂胆固醇水平检测,以及整体主动脉油红O染色与主动脉根部病理切片油红O染色等动脉粥样硬化病理分析。结果显示经过高脂诱导的ApoE-/-小鼠的血浆总胆固醇和甘油三酯水平均比未经饮食诱导的ApoE-/-小鼠、经同样饮食处理的野生型小鼠以及未经处理的野生型小鼠均显著升高(P<0.05);低密度脂蛋白-胆固醇水平与野生型(正常饮食组和高脂组)相比升高了近3倍多;高脂诱导ApoE-/-小鼠的主动脉斑块面积占整体主动脉面积的65%,显著高于ApoE-/-小鼠的正常饮食组(21%)(P<0.05),同时主动脉根部的血管壁明显增厚,管腔变窄。实验结果表明通过高脂饲料饮食诱导,成功建立了动脉粥样硬化模型小鼠,可为下游的药物筛选、基因治疗以及动脉粥样硬化机理的体内研究提供理想的实验材料。
- 欧海龙张礼林何晓兰李红梅雷霆雯
- 关键词：APOE^-/-小鼠动脉粥样硬化胆固醇血脂主动脉
