朱雷
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军第三〇二医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HIV多抗原位点串联基因的表达及活性鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的 在原核表达载体系统中对HIV - 1 / 2型外壳蛋白多个抗原位点串联基因进行表达、纯化并鉴定其活性。方法 人工合成含HIVgp 4 1的 2个抗原位点、gp 1 2 0的 3个群的各 3个抗原位点及 gp 36的 2个抗原位点的串联基因 ,克隆到原核表达载体pRSETB中 ,构建重组表达质粒 pRSETB env ,异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导其在大肠埃希菌BL 2 1 (DE 3)中高效表达 ,利用固化金属离子配体亲和层析技术纯化表达蛋白 ,利用逐渐降低尿素浓度透析法使目的蛋白复性。用免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定。结果 目的基因在BL 2 1中有较高表达率 ,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)可见一条约 32KD的蛋白带 ,与设计分子量相符。免疫印迹、ELISA试验显示该表达蛋白可与HIV患者血清较好结合 ,而与其它患者血清无交叉反应。结论 成功构建了由HIV外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体 pRSETB env ,并在原核细胞中高效表达 ,表达蛋白经一步纯化后纯度较高 ,并具有良好特异性和活性。
- 朱雷胡燕侯俊沈宏辉杨健洋貌盼勇
- 关键词：HIV嵌合基因活性鉴定
