- 鸟分枝杆菌PhoP功能分析及其基因突变株的构建
- 2016年
- 【目的】对鸟分枝杆菌PhoP的功能进行分析及构建PhoP基因突变株,为深入研究PhoP的调控机制打下基础。【方法】利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP DNA结合区(PhoPC)编码序列,与表达载体p GEX-4T-3连接后,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达GST-PhoPC融合蛋白。用凝血酶去除GST标签,制备PhoPC蛋白;利用PCR扩增出鸟分枝杆菌PhoP基因及其下游基因MAV0127、PhoU和Amt的启动子片段,采用凝胶迁移率移动试验(EMSA)分别检测PhoPC与PhoP、MAV0127、PhoU和Amt的启动子结合的情况。通过PCR扩增PhoP基因上、下游片段,构建PhoP基因缺失性同源核苷酸片段,与自杀质粒p GMB151连接后,通过电转化导入鸟分枝杆菌进行同源交换,利用PCR筛选出PhoP基因缺失突变株。【结果】EMSA结果显示,鸟分枝杆菌PhoP能与PhoP、MAV0127及Amt基因启动子结合,不能与PhoU结合。通过PCR和序列分析证实基因突变株的PhoP基因缺失了309个碱基。【结论】PhoP不仅可调控其下游基因MAV0127和Amt的转录水平,还可调控其自身基因的转录,但不参与调节PhoU二元调控系统。构建了PhoP基因缺失突变株,为进一步研究其在鸟分枝杆菌的调控功能奠定了基础。
- 何时义丁峰山王爱妍付鑫杨东君凌敏
- 关键词：PHOP
- 结核分枝杆菌耐受活性氧和活性氮基因的研究进展被引量：1
- 2015年
- 活性氧和活性氮是生物体新陈代谢过程的中间产物,性质活泼,具有强氧化性。激活的巨噬细胞内存在大量的活性氧和活性氮,能够破坏病原菌的生物膜,改变蛋白质的功能,损害DNA的遗传信息,最终抑制或杀死入侵的病原微生物。结核分枝杆菌侵入机体,主要在巨噬细胞内存活并大量繁殖。在氧化和氮化胁迫下,结核分枝杆菌基因在转录水平会发生明显改变,帮助结核分枝杆菌逃逸巨噬细胞的杀伤作用。本文综述了结核分枝杆菌耐受活性氧和活性氮基因的研究进展,并总结了各基因之间的调控通路。
- 付鑫王爱妍丁峰山何时义杨东君凌敏
- 关键词：活性氧活性氮巨噬细胞结核分枝杆菌
- 利用TMT技术研究结核分枝杆菌与鸟分枝杆菌感染巨噬细胞引致的差异表达蛋白
- 目的:本课题通过结核分枝杆菌和鸟分枝杆菌分别感染巨噬细胞，筛选出特异性强、敏感度高的差异蛋白，为阐明结核分枝杆菌和鸟分枝杆菌致病性的相似点和差异性提供依据。 方法:用结核分枝杆菌和鸟分枝杆菌分别感染巨噬细胞构建结核杆菌...
- 付鑫
- 关键词：结核分枝杆菌巨噬细胞
- 文献传递
