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双碳源流加对重组毕赤酵母高效表达葡萄糖氧化酶的影响被引量：3: 2013年; 葡萄糖氧化酶(GOD)是一种具有广泛应用前景的工业酶。为了实现葡萄糖氧化酶的高效生产,提高重组毕赤酵母生产GOD的产量和增强生产强度,对重组毕赤酵母诱导阶段的初始菌体浓度和甲醇浓度进行了优化。在此基础上,诱导期采用了双碳源(甘油、山梨醇和甘露醇)与甲醇混合流加的模式。研究发现,最佳诱导前初始菌体浓度和甲醇浓度分别为100 g/L和18 g/L,此时GOD产量为427.6 U/mL。在诱导阶段采用甘油、山梨醇和甘露醇与甲醇的混合添加均可以提高GOD产量,其中甘露醇与甲醇的混合流加效果最为显著。当甲醇与甘露醇混合流加的比例为20∶1(W/W)时,诱导156 h GOD产量和生产强度分别可达711.3 U/mL和4.60 U/(mL.h),比甲醇单一流加策略结果分别提高了66.3%和67.9%。此外采用合适的甘露醇混合流加策略不但不会抑制AOX1启动子的表达,甚至有一定促进作用,AOX酶活性为8.8 U/g(对照为5.2 U/g)。双碳源流加方式还能推广到毕赤酵母其他表型中,为该系统高效表达外源蛋白提供一种新策略。; 沈伊娜顾磊张娟陈坚堵国成; 关键词：重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶

一株具有藻毒素清除功能的干酪乳杆菌细胞高密度发酵条件优化被引量：1: 2012年; 为提高一株具有藻毒素清除能力的干酪乳杆菌Lactobacillus casei BBE10-212单位体积的活菌数,针对其营养需求,研究了不同碳源、氮源、缓冲盐、微量元素及生长因子对该菌株生长情况及发酵特性的影响。通过响应面法对碳源、氮源、生长因子等进行优化,获得最佳培养基配方为:α-乳糖43.8 g/L,酵母膏79.5 g/L,无水乙酸钠13.12 g/L,冰醋酸9.17 ml/L,MnSO_4·H_2O 190mg/L,吐温-80 5.15 mL/L。经37℃培养18 h,菌体干重达到4.97g/L,比在普通MRS培养基中(1.32 g/L)提高近4倍。基于乳酸菌发酵过程中的产酸特性,通过外源添加5 g/L谷氨酸,促使菌体浓度进一步提高15%,并提前1.2 h进入生长稳定期。上述研究结果为食品行业重要生产菌株干酪乳杆菌的高密度培养技术提供了可借鉴的研究思路。; 张娟顾磊董自星堵国成陈坚; 关键词：干酪乳杆菌响应面法谷氨酸

定点突变提高毕赤酵母产葡萄糖氧化酶的氧化稳定性被引量：5: 2016年; 通过定点突变的方法,将来源于黑曲霉Aspergillus niger的葡萄糖氧化酶的甲硫氨酸替换为亮氨酸,以期提高葡萄糖氧化酶的耐氧化性。野生型的葡萄糖氧化酶和突变酶M305L、M524L、M556L和M582L的基因分别在巴斯德毕赤酵母中分泌表达,对突变酶与野生型葡萄糖氧化酶纯化后进行性质比较。结果表明：突变酶的耐氧化性与野生型葡萄糖氧化酶相比均有不同程度的提高,其中,突变酶M556L在100 mmol/L和500 mmol/L过氧化氢存在下的氧化稳定性是野生型葡萄糖氧化酶的近2倍,且催化效率（kcat/Km）提高至野生型葡萄糖氧化酶的2.08倍。定点突变后,突变酶的最适反应温度为35℃,与野生型葡萄糖氧化酶基本保持一致,同时,突变酶M524L的p H稳定范围由4.0~6.0扩展到3.0~7.0。; 闻一凡顾磊张娟堵国成; 关键词：葡萄糖氧化酶定点突变黑曲霉巴斯德毕赤酵母

共表达HAC1基因对重组毕赤酵母分泌表达葡萄糖氧化酶的影响被引量：3: 2016年; 通过增强不可折叠蛋白质响应(UPR)信号途径以及研究不同培养温度下的影响,来提高重组葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的分泌表达。影响毕赤酵母外源蛋白表达的因素,主要为内质网中的折叠速率以及不可折叠蛋白积累造成的胞内胁迫压力。通过共表达HAC1基因对不可折叠蛋白信号通路进行调控,摇瓶中改造菌株PP-G-HAC1胞外酶活达到161 U/m L,相比于原始重组葡萄糖氧化酶菌株提高了34%。进一步研究不同温度下过量表达HAC1基因对菌株的生长和分泌外源蛋白的影响,菌株PP-G-HAC1在3 L发酵罐中28℃培养,酶活达到1 008 U/m L,胞外重组蛋白质达到14.43 g/L,相比原始菌株在相同条件下提高了3.12倍。; 顾磊张娟堵国成陈坚; 关键词：重组毕赤酵母葡萄糖氧化酶

唾液乳杆菌高密度发酵培养基的响应面优化: 唾液乳杆菌是具有多重生理功能的重要益生菌之一,但较低的生物量一直是制约其进行工业化生产及应用的瓶颈问题。为提高单位体积的活菌数,本研究考察了不同碳源、氮源、缓冲盐、微量元素及生长因子等对唾液乳杆菌ATCC 11741生长...; 董自星顾磊张娟王淼堵国成陈坚; 关键词：高密度发酵培养基响应面优化; 文献传递

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顾磊